跨膜絲氨酸蛋白酶2-成紅細胞特異性轉化基因相關基因、成紅細胞特異性轉化基因變異體1及成紅細胞特異性轉化基因變異體4在前列腺癌中的表達及臨床意義

陳俊泳，韓耕宇，褚 靖，鄧 健，謝 群

(廣東省珠海市人民醫院，暨南大學附屬珠海醫院，廣東 珠海 519000)

前列腺癌是男性發病率最高惡性疾，多好發于老年人群[1]。目前有關前列腺癌的發病機制尚未十分明確，有學者指出，人類惡性腫瘤與基因融合存在密切聯系，參與了腫瘤發生、發展，通過觀察基因融合情況，觀察基因融合情況對治療方法選擇、預后評估具有重要意義[2]。前列腺癌中基因融合涉及了跨膜絲氨酸蛋白酶2(transmembrane serine protease 2，TMPRSS2)基因及成紅細胞特異性轉化基因相關基因(ERG)、成紅細胞特異性轉化基因變異體4(ETV4)、成紅細胞特異性轉化基因變異體1(ETV1)等，多數前列腺癌患者常伴有上述基因融合改變，而在前列腺良性組織中并不會出現上述改變[3，4]。本研究通過檢測前列腺癌患者中各因子表達情況，探討三者與前列腺癌的關系及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料2018年4月至2020年9月我院收治的82例前列腺癌患者，納入標準：①均經臨床確診；②年齡>18歲，且無意識、溝通障礙；③無放療、化療等治療史；④資料齊全。排除標準：①自身免疫系統先天性異常；②存在急性前列腺炎、尿潴留等；③非典型性腺瘤樣增生者；④精神病、癡呆、孕婦等特殊人群。82例患者年齡52～85歲[(71.65±9.36)歲]；病理類型：腺癌69例，鱗癌13例；Gleason 分級評分標準：2～4分17例，5～7分42例，8～10分23例；Jewett-WhitmoreProut臨床分期：A+B期34例，C+D期48例。

1.2 方法收集82例患者術后癌組織及距瘤體5 cm以上的正常組織。常規脫水、固定、包埋，5 μm連續厚切片。用于免疫組化檢測TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV4表達。試劑：兔抗人TMPRSS2-ERG(濃縮型，稀釋度為1∶200)、TMPRSS2-ETV1(濃縮型，稀釋度為1∶200)、TMPRSS2-ETV4(濃縮型，稀釋度為1∶200)、多克隆抗體，均由美國 Epitomics公司提供。SP免疫組化、DAB試劑盒均由美國 Epitomics公司提供。并采用S-P免疫組化染色法檢測TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV4。一抗陰性對照使用PBS進行代替。

1.3 結果判定采用雙盲法對結果進行判定，即根據陽性細胞在全部組織細胞中占比及陽性細胞染色強度判定[5]：①按顯色細胞數計分，無陽性細胞數為0分；1分陽性細胞<10%，2分10%～50%；3分50%～75%；4分>75%。②著色程度：0分為無色，淡黃色、棕黃色、黃褐色分別記1、2、3分。每張切片取5個高倍視野。兩類分數相乘總分<3分為陰性。比較不同組織TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4表達。分析各因子與臨床特征之間的關系及對前列腺癌的診斷價值。

1.4 統計學方法采用SPSS 22.0統計軟件分析數據。計量資料以均數±標準差描述，組間比較采用t檢驗；計數資料以n(%)表示，比較行χ2檢驗；診斷價值分析采用ROC曲線。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組織中各因子表達比較前列腺癌組織中TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4陽性表達率均顯著高于癌旁正常組織(P<0.05)。見表1。

表1 不同組織中各因子表達比較 [n(%)]

2.2 不同臨床特征前列腺癌患者各因子陽性表達率比較臨床分期C+D期、Gleason評分≥5分患者的各因子陽性表達率均顯著高于臨床分期A+B期、Gleason評分<5分(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床特征前列腺癌患者各因子陽性表達率比較 [n(%)]

※與A+B期比較，P<0.05；○與<5分比較，P<0.05

2.3 各因子檢測對診斷前列腺癌的價值TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4聯合檢測曲線下面積(AUC)、敏感度、特異度分別為0.814、0.925、0.865，均高于各項指標單獨檢測(P<0.05)。見表3及圖1。

表3 各因子檢測對診斷前列腺癌的價值

圖1 各因子對診斷前列腺癌的ROC曲線分析

3 討論

染色體結構改變是正常細胞進展為癌細胞的重要分子生物學事件，其中染色體易位導致基因融合可能是部分腫瘤發生的重要原因。TMPRSS2-ETS基因融合具有多樣性，TMPRSS2與ETS家族成員如ERG、ETV1、ETV4等均可發生基因重排，其中以TMPRSS2-ERG發生最為常見[6，7]。

ETS轉錄因子家族成員可表達于人體各臟器、組織，且同時參與了多個生物學過程，如細胞分化、調節、增殖等[8，9]。國內外相關報道顯示，ETS在乳腺癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤的血管生成、轉移、浸潤中具有調控作用[10，11]。周文浩等則指出ERG、ETV1、ETV4基因與TMPRSS2基因融合生成新的融合基因頻繁出現在前列腺癌中，在疾病進展中發揮重要作用[12，13]。本研究報道結果與上述研究基本相符，認為可能是融合基因TMPRSS2調節了前列腺癌組織中ERG、ETV1、ETV4的表達，且ERG、ETV1、ETV4易受雄激素的影響；其融合基因的存在同樣亦影響雄激素的調節機制[14～16]。大部分的前列腺癌標本中可見出現基因重排，從而促進EST家族表達。但Todorova等[17]發現，在前列腺癌患者中，TMPRSS2-ETV1、ETV4陽性表達率不超過10%，與本研究報道不符，可能與納入樣本量、患者自身差異等因素有關。

國外部分研究指出，TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4的過度表達與ERG、ETV1、ETV4的高表達具有較高的一致性[18，19]。TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4過表達與前列腺癌的侵襲性具有一定關系，且與分化程度、腫瘤分期等亦相關。Carsten等[20]通過檢測Gleason評分為7分的前列腺癌中TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4表達，發現含融合基因患者的5年生存率明顯高于未含融合基因者。本研究中，隨臨床分期進展、Gleason評分增高，TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4陽性表達率亦逐漸增高，提示上述因子同樣參與了前列腺癌的進展，增加了前列腺癌細胞的侵襲能力，促進腫瘤臨床進展。進一步ROC曲線分析發現，三者均可有效診斷前列腺癌，但通過聯合檢測三者可一定程度提高診斷效能。

綜上所述，前列腺癌患者中TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4表達異常，聯合檢測上述因子可為臨床鑒別診斷前列腺癌提供參考。