新城疫活疫苗對控制雞大腸桿菌病的效果觀察

蔡 羲 林 琳 黃梅清 陳秀琴 鄭 敏 江 斌＊

（1.福建省農業科學院畜牧獸醫研究所 福州 350013；2.福建省畜禽疫病防治工程技術研究中心 福州350013）

禽大腸桿菌病（Avian colibacilloisis）指部分或全部由大腸桿菌（E.coli）所引起的局部或全身性感染的疾病。隨著集約化養禽業的發展，雞大腸桿菌病已成為嚴重威脅養雞業的傳染病之一，造成嚴重的經濟損失。目前，防治該病主要依靠抗生素，但是抗生素濫用的現象越來越嚴重，不僅會造成養殖成本增高，也會導致細菌產生耐藥性，另外藥物殘留會造成更為嚴重的食品安全問題。疫苗接種有一定的效果，但由于大腸桿菌血清型眾多，各血清型之間沒有交叉保護，因此其推廣使用范圍有限。如何應用無抗的方法控制大腸桿菌病已經成為一項涉及食品安全的實用技術。筆者通過多年臨床觀察，對于頑固性大腸桿菌，應用新城疫疫苗緊急免疫能取得較好的效果，具體原因尚不清楚。因此，設計本試驗，論證新城疫La-sota弱毒苗（Ⅳ系）對控制雞大腸桿菌病的效果。

1 材料與方法

1.1 大腸桿菌菌株來源 本實驗室分離鑒定的FQ11株。

1.2 儀器和試劑 流式細胞儀（BD公司，型號：BD FACSCalibur）；普通臺式離心機（上海安亭科學儀器廠，型號：TGL-16G）；淋巴細胞分離液（天津灝洋生物制品科技有限責任公司）；新城疫疫苗La-sota弱毒苗（Ⅳ系）為青島易邦生物制品廠生產，批號為：20190911。

1.3 試驗動物 選取同一批次30日齡的健康蛋雞50羽，由河北峪口禽業有限公司提供，根據本場免疫程序進行，于7日齡、21日齡進行雞新城疫-傳染性支氣管炎二聯四價疫苗(活)免疫，隨機分為空白組10羽，對照組20羽，試驗組20羽，正常飼喂，不添加任何藥物。

1.4 攻毒試驗 參照周秀紅等[1]的方法進行攻毒試驗，以平板計數法測定細菌含量，最終調至細菌濃度為1×108CFU/mL。FQ11大腸桿菌混懸液胸肌注射攻毒，0.2 mL/羽。 各組雞分別隔離飼養，連續觀察2周，每天詳細記錄雞群發病、死亡情況，并對病死雞進行剖檢，從中分離病原體并進行鑒定，以驗證死雞確系由攻毒所致。

待出現臨床癥狀，試驗組每只雞緊急免疫新城疫La-sota弱毒苗（Ⅳ系）4羽份。分別于免疫后第5 d、10 d、17 d隨機采集各組血樣8份，每份5 mL，其中每份血液樣品取2 mL分離血清，用血凝抑制法（HI）檢測ND抗體[2]；每份剩余樣品3 mL，加肝素抗凝，用于提取淋巴細胞，按流式細胞儀操作進行T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞數量檢測。

1.5 數據統計分析 試驗數據采用SPSS 13.0軟件進行單因素方差分析，用LSD法進行多重比較，以平均值±標準差表示，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標準。

2 結果與分析

2.1 臨床表現和剖檢病變 對照組雞死亡10羽，死亡率高達50%，試驗組死亡4羽，死亡率20%；對照組和試驗組部分雞食欲降低，翅下垂，羽毛蓬亂，反應遲鈍，行動緩慢，消瘦喜睡，排黃綠色稀糞。剖檢病變為氣囊炎、心包炎、肝周炎。以患雞的心血、氣囊、肝滲出液接種S-S瓊脂、麥康凱瓊脂、伊紅美藍瓊脂，于37℃溫箱培養24 h后均有典型的大腸桿菌菌落生長。空白對照組，一切正常。

2.2 新城疫抗體水平與大腸桿菌病抗病性相關性分析 由表1可知，緊急免疫后5～17 d，試驗組抗體水平逐漸升高，而對照組抗體略有下降，免疫后第17 d，試驗組與對照組新城疫抗體水平差異顯著（P<0.05），試驗組死亡率明顯降低，說明新城疫抗體水平較高的雞，對大腸桿菌病的抗病性較強，呈一定程度正相關。

表1 免疫后雞群新城疫平均抗體水平變化相關性分析比較

2.3 外周血液中T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞數量的變化 由表2可以看出，對照組、試驗組緊急免疫后外周血液T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞數量明顯上升，試驗組與對照組T淋巴細胞數量差異極顯著（P<0.01），B淋巴細胞、NK細胞數量差異顯著（P<0.05），說明緊急免疫后體液免疫、細胞免疫、非特異性免疫增強，并且維持在較高的水平。

表2 外周血液T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞數量變化

3 討 論

從試驗結果可以看出，緊急免疫后，隨著試驗組雞新城疫抗體水平提高，對大腸桿菌病的抗病性增強，死亡率降低，新城疫抗體水平與大腸桿菌病抗病性呈一定程度正相關。這一結果與Yunis R等[3]的研究報道基本一致，即新城疫抗體水平較高的個體，其大腸桿菌病抗病性也較高，二者存在很強的正相關。

試驗結果表明，緊急免疫后，試驗組雞的死亡率得到有效控制，未免疫的對照組死亡率達到50%。外周血液檢測結果顯示，緊急免疫后，T淋巴細胞、B淋巴細胞和NK細胞數量明顯上升，并維持在較高的水平。有試驗表明[4-7]，應激反應可增強固有免疫、獲得性體液免疫和細胞免疫，其決定因素是抗原、病原或受傷導致的應激反應建立的生理條件，這些條件包括T淋巴細胞、B淋巴細胞和NK細胞的轉運和激活。新城疫弱毒疫苗有Ⅰ系、Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系等多種，Ⅰ系疫苗具中等毒力，對產蛋雞、雛雞等都有致病性，應謹慎使用；Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系屬于弱毒苗，廣泛應用于青年雞群免疫，但Ⅳ系疫苗的毒力比其它兩系要強，免疫后對雞群提升免疫力效果不錯[8]。因此，可以通過緊急免疫新城疫La-sota弱毒苗（Ⅳ系），快速提高雞群免疫力，提高對大腸桿菌病的抗病性。