紫稔止血合劑的制備工藝研究

游宏成，郭亞蕾，3，岑敏貴，謝達(dá)爍

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧 530200；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院，廣西南寧 530022；3.廣西國(guó)際壯醫(yī)醫(yī)院，廣西南寧 530201）

食管、胃、十二指腸或膽胰等臟器病變引發(fā)的出血，稱為上消化道出血，多數(shù)為中等動(dòng)脈出血，難以自止。主要臨床癥狀表現(xiàn)為嘔血和黑便，重癥或伴有急性周圍循環(huán)衰竭等。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)上消化道出血病死率高達(dá)8%～13%，是臨床最常見的急危重癥之一，若不及時(shí)搶救和積極治療可危及患者性命[1]。所以快速、有效地止血是臨床救治的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前西醫(yī)針對(duì)本病的治療仍局限于止血藥配合抑酸藥，停藥后復(fù)發(fā)率高，療效并不令人滿意[2]。而采用內(nèi)鏡止血雖然得到臨床上廣泛的肯定，但對(duì)老年患者群體，因其具有合并癥多，以及休克、血紅蛋白低、十二指腸后壁潰瘍、出血速度快遮蓋潰瘍等缺陷，不利于內(nèi)鏡止血術(shù)的順利操作，仍要以藥物治療為主[3]。中醫(yī)學(xué)對(duì)此病具有豐富的理論研究與臨床經(jīng)驗(yàn)，歷經(jīng)數(shù)年檢驗(yàn)療效確切，故目前學(xué)界也將治療上消化道出血的研究投向了中醫(yī)藥這一偉大的寶庫(kù)。

上消化道出血在中醫(yī)學(xué)中被歸納至“吐血”“嘔血”“便血”等范疇，亦多屬危重癥。其中醫(yī)證型可細(xì)分為胃熱熾盛證、瘀阻胃絡(luò)證、肝火犯胃證、肝胃陰虛證和脾不統(tǒng)血證等[4]。病因多由胃絡(luò)損傷所致，概因胃腑本身或他臟受邪而導(dǎo)致胃絡(luò)受損，血不循經(jīng)，溢于胃腸，迫使胃氣上逆，或血隨氣逆，從口吐出，或是隨大便而下。治療血證中醫(yī)基本原則有三：治火、治氣、治血，對(duì)于血證歷代醫(yī)家已有大量論述，如清·唐容川《血證論》中所提出的止血、消瘀、寧血、補(bǔ)虛仍是目前治血應(yīng)當(dāng)遵循的四原則。

紫稔止血方經(jīng)過長(zhǎng)期的醫(yī)學(xué)臨床驗(yàn)證，功效顯著，療效確切，是上消化道出血中醫(yī)治療的常用經(jīng)驗(yàn)處方。處方由裸花紫珠、崗稔子、鳳尾草等三味藥物組成，具有清熱化瘀、涼血止血的功效，主治因濕熱困脾、胃中積熱、灼傷胃絡(luò)、迫血妄行所致的上消化道出血。本研究擬將紫稔止血方制備成合劑，為該處方的進(jìn)一步研究與開發(fā)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

電磁爐、湯鍋、水浴鍋、蒸發(fā)皿、干燥器、電子秤、計(jì)時(shí)器、毛細(xì)玻管、剪刀、濾紙等。

1.2 材料

裸花紫珠、崗稔子、鳳尾草、紫稔止血合劑（中試樣品）。

2 方法

2.1 紫稔止血湯處方

具體處方：裸花紫珠30g，崗稔子15g，鳳尾草30g。上述3味藥材經(jīng)本院藥師鑒定均為真品，且符合2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》以及相關(guān)藥品標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其外觀性狀的描述。

2.2 正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝參數(shù)[5]

2.2.1 藥材比例的量取

設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)因素水平表（如表1所示），依處方比例量取藥材。

表1 中藥復(fù)方提取工藝正交試驗(yàn)因素水平表

2.2.2 出膏率影響因素的考察

按照各對(duì)應(yīng)條件煎煮、濾過、合并濾液（如表2所示），依次置于已干燥到恒重的蒸發(fā)皿中行水浴蒸干，行105℃干燥3h，移入干燥器，待冷卻至室溫，迅速精密稱量重量，依據(jù)干燥品重量對(duì)各對(duì)應(yīng)條件下出膏率進(jìn)行計(jì)算，以出膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選用L9（34）正交表考察煎煮時(shí)間（A）、提取次數(shù)（B）、加水倍數(shù)（C）對(duì)出膏率的影響。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)安排

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

依據(jù)正交試驗(yàn)法所獲得最佳工藝條件再行3次驗(yàn)證試驗(yàn)。

2.4 中試試驗(yàn)[6]

2.4.1 試驗(yàn)方法

依照處方用量擴(kuò)大10倍取裸花紫珠300g、崗稔子150g、鳳尾草300g。紫稔止血合劑樣品依照上述已優(yōu)選出的最佳制備工藝進(jìn)行制備，分別測(cè)定樣品出膏量，并觀察其澄明度，共開展3批試驗(yàn)。

2.4.2 檢查

參照2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》附錄合劑項(xiàng)下規(guī)定，檢查中試樣品。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

選定中試試驗(yàn)所得到3批成品，每批成品取樣3份，于溫度25℃±2℃，相對(duì)濕度60%±10%的環(huán)境中放置6個(gè)月，分別在0個(gè)月、1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月進(jìn)行取樣，檢測(cè)出膏量，完成紫稔止血合劑穩(wěn)定性研究，考察成品在0、1、2、3、6月份的質(zhì)量變化。

2.6 數(shù)據(jù)處理

本研究所獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS26.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析，利用方差分析在制備工藝研究中優(yōu)選出最佳提取工藝，中試研究、穩(wěn)定性研究中計(jì)量資料均采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）”表示。P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 正交試驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)由表3、表4可知，因素A、B、C 對(duì)出膏率的影響顯著（P＜0.05）。結(jié)合極差分析、生產(chǎn)成本及生產(chǎn)效率等多方面因素，得出最佳提取工藝為A3B3C2，即：加水8倍量，煎煮1.5h，提取3次。

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果

表4 提取工藝方差分析

3.2 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

通過測(cè)定得到出膏率為8.55%±0.11%。

3.3 中試試驗(yàn)結(jié)果

中試試驗(yàn)3批次出膏量詳見表5。中試樣品檢查符合2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》附錄合劑項(xiàng)下規(guī)定。

表5 中試試驗(yàn)出膏量（）

表5 中試試驗(yàn)出膏量（）

3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

紫稔止血合劑成品在0、1、2、3、6月出膏量質(zhì)量變化詳見表6。

表6 穩(wěn)定性試驗(yàn)（，單位：g）

表6 穩(wěn)定性試驗(yàn)（，單位：g）

3.5 討論

根據(jù)紫稔止血方藥物的化學(xué)性質(zhì)和現(xiàn)代藥理研究成果文獻(xiàn)，本處方中裸花紫珠、崗稔子、鳳尾草均為止血類中藥。方中君藥裸花紫珠的止血活性藥效成分以苯乙醇苷類和黃酮類為主，通過影響內(nèi)源性凝血途徑，或通過同時(shí)影響內(nèi)、外源性凝血途徑起到止血功能[7]。臣藥鳳尾草中的主要成分為黃酮、倍半萜、苯丙素、生物素和揮發(fā)油等，藥理研究證實(shí)其具備良好的止血、升高血小板的功能，止血機(jī)理正是通過升高血小板數(shù)量來(lái)完成，也是其治療血小板減少性出血的藥理學(xué)基礎(chǔ)[8]。方中使藥崗稔子則主要含有桃金娘酚A、沒食子酸、楊梅素等化合物，藥理研究表明該藥能促進(jìn)血栓形成和血小板聚集，其機(jī)制可能為下調(diào)血小板環(huán)磷酸鳥苷、環(huán)磷酸腺苷和一氧化氮水平[9][10]。三藥配伍，能有效促進(jìn)消化性潰瘍患者的血小板聚集，增強(qiáng)血管收縮，從而發(fā)揮本方止血、凝血功效[11]。

經(jīng)本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，通過正交試驗(yàn)可使試驗(yàn)次數(shù)大幅減少。通過比較極差大小可明確各因素對(duì)試驗(yàn)的影響順序。試驗(yàn)結(jié)果和因素的極差成正比。本次正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)中極差最大為因素A（煎煮時(shí)間），其次為因素B（提取次數(shù)），極差最小為因素C（加水倍數(shù)）。上述3因素和其交互作用的顯著性可通過試驗(yàn)誤差SSe2進(jìn)行檢驗(yàn)。優(yōu)選出的最佳提取工藝可以使有效成分得到最大程度保留，生產(chǎn)成本亦得到最大程度節(jié)約。本試驗(yàn)對(duì)測(cè)定出膏率進(jìn)行3次重復(fù)性試驗(yàn)，在一定程度上使試驗(yàn)誤差值減小。

本次中試研究采用經(jīng)正交試驗(yàn)優(yōu)選出的最佳制備工藝進(jìn)行處方用量擴(kuò)大10倍的研究，理論上出膏量應(yīng)約為64g，批次2的出膏量最為接近，批次1的出膏量過少，批次3的出膏量過多，或與3批次所選用藥材原料不同有關(guān)。

采用留樣觀察法進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，本次穩(wěn)定性研究中9份樣品均具備良好的穩(wěn)定性，可持續(xù)放置12個(gè)月乃至更長(zhǎng)時(shí)間。

4 結(jié)語(yǔ)

紫稔止血方作為臨床經(jīng)驗(yàn)方，運(yùn)用于臨床治療的形式大多采用湯劑，現(xiàn)為求改進(jìn)和創(chuàng)新本處方劑型，以提高臨床應(yīng)用效率與治療效果，能更廣泛地適用于臨床場(chǎng)景，故進(jìn)行本次紫稔止血合劑的最優(yōu)制備工藝研究。本實(shí)驗(yàn)的工藝路線設(shè)計(jì)為水煎煮提取，盡可能保留原方湯藥劑型優(yōu)勢(shì)。水提工藝過程中，煎煮時(shí)間、提取次數(shù)和加水倍數(shù)等是影響提取效果的主要因素。本實(shí)驗(yàn)設(shè)置出膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，針對(duì)上述因素的影響著重進(jìn)行研究。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫稔止血合劑依照裸花紫珠、崗稔子、鳳尾草加8倍水，煎煮1.5h，提取3次的制備工藝提取具備高穩(wěn)定性，依照上述制備工藝流程進(jìn)行中試生產(chǎn)亦具備良好的穩(wěn)定性和可行性，是本合劑的最優(yōu)制備工藝。經(jīng)驗(yàn)證，本工藝設(shè)計(jì)科學(xué)，合理可行，穩(wěn)定便捷，適用于紫稔止血合劑的制備，可應(yīng)用于社會(huì)工業(yè)化生產(chǎn)，并為紫稔止血方的后續(xù)研究開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。