原發性高血壓病人Salusin-β、miRNA-375與免疫因子的相關性分析

趙茜茜，王 珅，盧相琴，楊 婷

原發性高血壓是臨床常見的心血管疾病，主要由環境因素、遺傳因素共同導致的多基因遺傳性疾病，發病機制復雜，且隨著病情不斷進展。臨床研究顯示，原發性高血壓會對心臟、腎臟、大腦造成損傷，同時也是腦卒中、動脈粥樣硬化等血管性疾病發生的重要危險因素[1-2]。有研究顯示，原發性高血壓約占高血壓病人的90%，原發性高血壓是高血壓急癥的多發群體，引發心肌梗死、高血壓腦病等一系列危險疾病，對病人生命健康造成威脅[3]。近年來，隨著全球范圍內原發性高血壓發病率升高，引發的心腦血管病病死率升高，對人類生存質量及生命健康造成影響，并造成較重的經濟負擔[4-5]。隨著對疾病的不斷深入研究發現，原發性高血壓發生、發展與免疫反應及相關因子水平有關[5]。本研究對原發性高血壓病人Salusin-β、miRNA-375、免疫因子水平進行檢測，同時分析相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年11月—2020年11月我院收治的原發性高血壓病人77例，作為觀察組；另選取同時間于我院體檢健康者77名，作為對照組。觀察組，男39例，女38例；年齡40～69(54.5±12.3)歲；病程2～5(3.5±1.2)年。對照組，男40名，女37名；年齡41～67(54.1±10.9)歲。兩組性別、年齡比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。所有研究對象對本研究知情同意，并獲得我院倫理委員會批準。納入標準：觀察組病人均符合《中國高血壓防治指南》內原發性高血壓診療標準[6]；年齡18～70歲。排除標準：一般資料不全；繼發性高血壓；合并高脂血癥、肥胖、糖尿病、腦血管等其他慢性疾病；合并心、肺、肝、腎等重要臟器功能不全；合并惡性腫瘤；合并嚴重器質性疾病；患有肺炎、尿道感染等急性感染性疾病；精神疾病及認知障礙；長期嗜煙、嗜酒及濫用藥物。

1.2 標本采集 抽取所有研究對象空腹靜脈血6 mL，于室溫下，以3 000 r/min離心10 min，分離上清液至無RNA酶的EP管中，-70 ℃保存，待用。

1.3 觀察指標

1.3.1 酶聯免疫吸附法檢測Salusin-β、超敏C反應蛋白(hs-CRP)、白細胞介素10(IL-10)水平 取50 mmol/L碳酸鹽包緩沖液對抗原進行稀釋，在聚苯乙烯反應孔內加入使用50 mmol/L碳酸鹽包緩沖液稀釋后抗原，加蓋處理之后存放24 h置于4 ℃冰箱內，次日進行3次洗滌，之后拋干，將稀釋液(pH值為7.4，0.02 mol/L Tris-HCl緩沖液)待測標本0.1 mL放入每個孔，同時放入陽性和陰性對照標本，置于42 ℃環境中60 min，移除液體，3次洗滌后拋干，在每個孔中放Salusin-β、hs-CRP、IL-10抗體0.1 mL，存放60 min，移除液體后。進行3次洗滌并拋干，在每個孔中放入低物液(0.1 mol/L Na2HPO4，0.05 mol/L枸櫞酸)，混勻之后置入0.1 mL鄰苯二胺，進行20 min遮光，再次置入2 mol/L H2SO40.05 mL放置在每個孔內，終止反應。使用酶標儀檢測A450值檢測Salusin-β、hs-CRP、IL-10。

1.3.2 散射比濁法檢測免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平 提取IgA、IgM、IgG、TNF-α血清樣品在凝固過程中發生變化的散射光檢測，在光探檢測器為90°直角的單色光源中向血清樣本加入凝血激活劑，在樣品凝塊過程中，散射光強度緩慢增加，血清樣本完全凝固后，光探測器發生變化，送到檢測器上處理并描出凝固曲線后檢測IgA、IgM、IgG、TNF-α水平。

1.3.3 逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測miRNA-375表達 首先提取miRNA-375細胞總RNA，對提取總RNA的純度、含量進行檢測，之后逆轉，逆轉錄處理后獲得cDNA，獲得cDNA后使用Primer5.0軟件設計引物，2-△△Ct方法計算，內參U6。設置反轉錄反應條件：25 ℃ 10 min，40 ℃ 60 min，85 ℃ 5 min；設置擴增條件：94 ℃ 20 s，72 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，35個循環，采用2-△△Ct計算miRNA-375表達量。

2 結 果

2.1 對照組和觀察組血清Salusin-β水平、miRNA-375表達比較 與對照組比較，觀察組Salusin-β水平、miRNA-375表達升高，差異有統計學意義(P<0.001)。詳見表1。

表1 對照組和觀察組血清Salusin-β水平、miRNA-375表達比較(±s)

2.2 對照組和觀察組免疫因子水平比較 與對照組比較，觀察組IgA、IgG水平升高，IgM水平降低，差異有統計學意義(P<0.001)。詳見表2。

表2 對照組和觀察組免疫因子水平比較(±s) 單位：g/L

2.3 對照組和觀察組血清細胞因子水平比較 與對照組比較，觀察組hs-CRP、TNF-α平升高，IL-1水平降低，差異有統計學意義(P<0.001)。詳見表3。

表3 對照組和觀察組血清細胞因子水平比較(±s)

2.4 不同高血壓分級病人血清Salusin-β水平、miRNA-375表達比較 與1級高血壓病人比較，2級、3級高血壓病人Salusin-β水平、miRNA-375表達升高，差異有統計學意義(P<0.05)；與2級高血壓病人比較，1級高血壓病人Salusin-β水平、miRNA-375表達較低，3級高血壓病人Salusin-β水平、miRNA-375表達升高，差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表4。

表4 不同分級高血壓病人血清Salusin-β水平、miRNA-375表達比較(±s)

2.5 Salusin-β、miRNA-375與原發性高血壓病人免疫因子的相關性分析 Salusin-β與IgA呈正相關(r=0.608，P<0.001)，Salusin-β與IgM呈負相關(r=-0.523，P<0.001)，Salusin-β與IgG呈正相關(r=0.598，P<0.001)；miRNA-375與IgA呈正相關(r=0.621，P<0.001)，miRNA-375與IgM呈負相關(r=-0.701，P<0.001)，miRNA-375與IgG呈正相關(r=0.519，P<0.001)。詳見圖1、圖2。

圖1 Salusin-β水平與原發性高血壓病人免疫因子相關性分析的散點圖

圖2 miRNA-375水平與原發性高血壓病人免疫因子相關性分析的散點圖

3 討 論

高血壓是以動脈壓升高為特征的疾病，是伴有心、腎、血管、腦等器官功能性或器質性改變的全身性疾病，分為原發性高血壓和繼發性高血壓，其中原發性高血壓發病率約占高血壓的90%[7-8]。流行病學研究顯示，老年人為原發性高血壓主要發病人群，我國60歲以上人群發病率高達60%，原發性高血壓臨床表現以耳鳴、頭脹、頭暈等為主，若不及時進行有效干預，造成心血管結構和功能變化，并引發高血壓腦病、冠心病、心力衰竭等各種疾病[9-10]。隨著社會經濟發展、生活節奏加快、精神壓力緊繃等多種因素影響，導致高血壓發病率呈逐年升高趨勢，同時各種心血管疾病病死率隨之升高。對人類生活質量及生命健康造成威脅。因此，及時預防及控制高血壓具有重要的意義[11]。

相關研究顯示，血管內皮細胞損傷及局部炎癥反應與高血壓、心血管疾病的發生、發展關系密切，同時造成血栓形成并增加血管緊張性[12]。Salusin-β作為內源性心血管調節肽，在促進心肌細胞生長、血管平滑肌細胞增殖及血管內皮細胞炎癥反應中發揮著重要作用。相關研究表明，Salusin-β可促進機體炎性因子釋放，加重血管內皮細胞受損程度，從而誘發冠心病等[13]。另有研究顯示，中樞Salusin-β有助于激活交感神經，促進精氨酸加壓釋放，導致血壓升高。Salusin-β具有調節血壓的作用，通過檢測原發性高血壓病人Salusin-β水平，可較好地預測高血壓急癥發生[14]。本研究結果顯示，Salusin-β水平隨高血壓分級增加而升高，證實Salusin-β水平變化與原發病高血壓病人病情發展具有密切聯系，可作為生物學標志物應用于原發性高血壓病人的早期預估，具有重要的臨床應用價值。

人體內廣泛存在的內源性非編碼RNA為微小核糖核酸，在多種基因轉錄及表達中均有參與[15]。miRNA-375是一種在胰島細胞中特異性表達的miRNA，成熟的miRNA作用于靶基因以發揮其功能。相關研究顯示，miRNA-375通過對充足胰島素樣生長因子1產生調節作用，導致細胞膜內側肌動蛋白絲組成的網狀結構發生改變，促進胰島素小泡和細胞膜融合，從而釋放胰島素。相關研究顯示，miRNA-375表達水平在維持人體葡萄糖穩態方面發揮著重要的作用[16-17]。本研究結果顯示，miRNA-375參與原發性高血壓的發生、發展。以miRNA-375為靶點設計小分子物質拮抗miRNA-375作用，可為臨床原發性高血壓提供藥物治療的新靶點。

免疫球蛋白在原發性高血壓發生、發展過程中發揮著重要作用。相關研究顯示，原發性高血壓病人T細胞功能異常，導致輔助介導B細胞活化分泌亢進，從而導致免疫球蛋白水平紊亂[18]。相關研究顯示，原發性高血病人IgA水平升高，而IgM水平降低，可能是由于疾病發展過程中炎癥消耗所致。原發性高血壓病人IgG存在異常表達，IgG形成抗原抗體復合物，沉積血管基底層，造成血管內皮損傷發生[19]。本研究結果顯示，免疫球蛋白IgA、IgM、IgG均參與原發性高血壓發生、發展過程，提示其可能參與原發性高血壓功能及結構改變等病理過程。

原發性高血壓以全身動脈血管的慢性炎癥反應為特征，多種細胞因子在高血壓發生、發展及轉歸中發揮著重要作用。相關研究顯示，hs-CRP作為系統炎癥反應的標志物因子與高血壓有關，可能是導致高血壓發生、發展的獨立危險因素[20]。IL-10作為細胞因子中極少存在的抑制性細胞因子，具有限制及終止炎癥作用；可有效抑制炎癥細胞產生白細胞介素1(IL-1)、白細胞介素6(IL-6)等多種炎性因子[21]。TNF-α作為具有多種生物活性的多肽炎性因子，通過細胞毒作用對血管內皮結構直接造成破壞，并對舒張功能造成影響。有研究顯示，TNF-α可誘導IL-1分泌，導致血管壁重塑，是促進原發性高血壓發展的重要危險因素[22]。本研究結果顯示，原發性高血壓病人炎性因子水平存在異常表達。提示炎性因子可有效評估病人病情，有利于原發性高血壓診斷及預后評估，具有較高的臨床應用價值。

綜上所述，Salusin-β、miRNA-375及免疫因子對原發性高血壓病人的診斷及干預具有重要的臨床意義，且Salusin-β、miRNA-375及免疫因子在原發性高血壓中具有相關性，可為臨床原發性高血壓的診斷提供一定參考依據。