致積食物炭劑對食積小鼠模型治療效果探究

高 晴

河南中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院， 河南省鄭州市 450000

食積又稱“積滯”，是臨床常見的脾胃病證。據(jù)調(diào)查統(tǒng)計，世界范圍內(nèi)功能性消化不良的患病率為19%～41%，我國功能性消化不良的患病率為10%～30%，占消化門診的50%左右。西醫(yī)對于功能性消化不良的治療效果不佳，臨床常用藥物存在副作用多及易復(fù)發(fā)等缺點。而中醫(yī)對食積的治療方式多種多樣且療效好。依據(jù)中藥炮制理論，將藥物炒焦、炒炭都能增強(qiáng)藥物消食健脾的功效。將食物制成炭劑治療食積是一種民間療法，在很多地方皆有此法針對食積的應(yīng)用。本研究旨在探索致積食物炭劑對食積的影響以及作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 清潔級昆明種雄性小鼠60只，體質(zhì)量(24.0±5.0)g。隨機(jī)分為6組：空白對照組、模型組、致積食物炭劑低劑量組、致積食物炭劑中劑量組、致積食物炭劑高劑量組和多潘立酮組，每組10只。

1.2 實驗試劑 多潘立酮片(修正藥業(yè)集團(tuán)長春高新制藥有限公司，批號H20093061)、致積食物炭劑(由面粉、豆粉、奶粉、魚松按照1∶2∶1∶1的比例，加水混合、烘干制成的飼料炒炭而成)、炭末半固體膏(取羧甲基纖維素鈉8g，溶于200ml水中，分別加入口服葡萄糖6g、全脂奶粉12g、活性炭3g、可溶性淀粉6g，均勻攪拌，配制成200ml，約200g的炭末半固體膏)，5-羥色胺(HT)ELISA酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(上海聯(lián)碩生物科技有限公司，M20170417)。

1.3 實驗儀器 MR-96A型酶標(biāo)儀(南京貝登醫(yī)療股份有限公司)，HWIR200A型烘干機(jī)(山東科弘微波能有限公司)，2 500r/min型離心機(jī)(常州恩培儀器制造有限公司)BL-420生物機(jī)能實驗系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)，HL-ZHQ型張力換能器(北京合力科創(chuàng)科技發(fā)展有限公司)，ZH-SX型HW-300型恒溫平滑肌槽(安徽正華生物儀器設(shè)備公司)。

1.4 方法

1.4.1 模型制備：除空白對照組正常飼養(yǎng)外，其余各組喂食精制飼料(奶粉、面粉、豆粉、魚松按1∶2∶1∶1的比例加少量蒸餾水做成短柱狀，形狀與普通小鼠顆粒飼料相似，烘干，制成飼料)[1]；每天每只小鼠0.2ml全脂牛奶灌胃[2]，空白對照組以等量生理鹽水灌胃，連續(xù)7d。相比于空白對照組，造模后小鼠精神萎靡、進(jìn)食量減少、體形消瘦，毛色無光澤，蜷縮聚堆，大便溏軟呈棕黃色; 用半固體膏檢測胃排空率和小腸推進(jìn)率，若相比于空白對照組，模型組小鼠胃排空率降低，小腸推進(jìn)率降低，說明模型制備成功[3]。

1.4.2 藥物制備及給藥：(1)藥物制備：小鼠用中藥、西藥劑量相當(dāng)于國家藥典人體用量的9.01倍[4]，折算動物給藥劑量時，按人的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量70kg計算小鼠按體表面積折算的等效劑量。小鼠精制飼料炒制成炭劑，根據(jù)炭劑藥物一般臨床劑量折算為小鼠灌胃劑量，按照低劑量組1.1g/kg，中劑量1.9g/kg，高劑量2.6g/kg；以蒸餾水為稀釋劑，各劑量炭劑分別用10ml蒸餾水煎至沸騰，當(dāng)溫度降至30℃左右時取0.2ml藥液給藥。按照多潘立酮成人1片/次,3次/d,70kg成人使用量是35mg,小鼠每日使用量即為4.5mg/kg，取蒸餾水將多潘立酮配置成為0.2ml藥液。(2)給藥:致積食物炭劑組小鼠，按各組藥劑劑量(低劑量組1.1g/kg，中劑量1.9g/kg，高劑量2.6g/kg)[5-7]給藥液0.2ml/只，1次/d；多潘立酮組小鼠按3.9mg/kg給藥液0.2ml/只，1次/d；空白對照組和模型組灌胃生理鹽水0.2ml/只，1次/d，連續(xù)7d。各組小鼠均正常飲水。

1.5 觀測指標(biāo)

1.5.1 小鼠一般狀態(tài)、進(jìn)食量考察：每天觀察小鼠的一般狀態(tài)，包括皮毛、活動度、糞便狀態(tài)等。其間每日16:00對每只小鼠進(jìn)行稱重，記錄，每日16:00每籠給予飼料60g，并記錄各組小鼠每日進(jìn)食量。1.5.2 胃排空率和小腸推進(jìn)率的測定：末次給藥后1h，將禁食不禁水18h的小鼠灌胃給予炭末半固體膏，0.3ml/只。30min后脫頸脫臼處死小鼠，剖開腹腔，結(jié)扎胃賁門和幽門，剪取完整胃，濾紙擦干稱胃全重。生理鹽水洗出胃內(nèi)容物后，濾紙擦干稱胃凈重，與此同時取出小腸，輕輕剝離腸系膜后將小腸拉成直線，測量幽門至炭末半固體膏前沿的距離以及幽門至回盲部的小腸全長。計算胃排空率和小腸推進(jìn)率[8]。胃排空率(%)=[1-(胃全重-胃凈重)/0.3ml炭末半固體膏質(zhì)量]×100%。小腸推進(jìn)率=幽門至炭末半固體膏前沿的距離/幽門至回盲部全長×100%。

1.5.3 BL-420小鼠離體小腸平滑肌收縮力的評價：取實驗組小鼠處死，取出小腸，制成離體小腸平滑肌標(biāo)本。調(diào)節(jié)好儀器，待系統(tǒng)穩(wěn)定后，開始試驗。當(dāng)小腸收縮曲線穩(wěn)定后，標(biāo)記、觀察、記錄收縮曲線。

1.5.4 血清中5-羥色胺(5-HT)水平的檢測：末次給藥后，空白對照組、致積食物炭劑組、多潘立酮組小鼠禁食不禁水18h，眼眶取血，于4℃，2 500r/min條件下離心，取上層血清。采用ELISA法測定血清中5-HT水平[9]，整個過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書的操作程序進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 食積小鼠一般狀態(tài)觀察 造模成功后，空白對照組小鼠精神狀態(tài)良好，行動活潑，皮毛有光澤，糞便色澤偏暗黃，質(zhì)干燥；而其余造模組小鼠食欲不振、精神狀態(tài)較差，活動減少、蜷縮扎堆，皮毛無光澤，糞便偏黑紅，質(zhì)黏重。用藥7d后，與模型組相比，多潘立酮組脫毛程度低，其余給藥組脫毛程度無明顯變化。而糞便量及糞便質(zhì)量無明顯變化。

2.2 致積食物炭劑對食積小鼠進(jìn)食量的影響 實驗過程中，每組小鼠每天喂食60g飼料，定時稱量剩余飼料，經(jīng)過計算得到每組小鼠7d進(jìn)食量。與空白對照組相比，模型組進(jìn)食量減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比，各給藥組進(jìn)食量增加，但組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 致積食物炭劑對食積小鼠進(jìn)食量的影響

2.3 致積食物炭劑對食積小鼠胃排空率和小腸推進(jìn)率的影響 與空白對照組相比，模型組胃排空率和小腸推進(jìn)率顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，提示造模成功；與模型組相比，致積食物炭劑中、高劑量組胃排空率和小腸推進(jìn)率顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與模型組相比，致積食物炭劑低劑量組和多潘立酮組的胃排空率和小腸推進(jìn)率均升高，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表2。

表2 致積食物炭劑對食積小鼠胃排空率和小腸推進(jìn)率的影響

2.4 致積食物炭劑對食積小鼠小腸平滑肌收縮力的影響 與空白對照組相比，模型組小腸平滑肌收縮力降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與模型組相比，致積食物炭劑低、中、高劑量組和多潘立酮組小腸平滑肌收縮力上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。詳見表3。

表3 致積食物炭劑對食積小鼠小腸平滑肌收縮力的影響

2.5 致積食物炭劑對食積小鼠血清5-HT水平影響 與空白對照組相比，模型組5-HT水平顯著降低(P<0.01)；與模型組對比，致積食物炭劑組和多潘立酮組5-HT水平顯著升高(P<0.01)。詳見表4。

表4 致積食物炭劑對食積小鼠血清5-HT水平影響

3 討論

3.1 致積食物炭劑治療食積的依據(jù) 《黃帝內(nèi)經(jīng)》首次記載“積”，常指各種病理因素，例如氣、血、痰、食等停滯并聚集不行的病癥。依據(jù)中藥炮制理論，將藥物炒焦、炒炭都能增強(qiáng)藥物消食健脾的功效[10]，如山楂炭、檳榔炭皆有較好消積效果。將食物制成炭劑治療食積是一種民間療法，在很多地方皆有此法針對食積的應(yīng)用。本實驗根據(jù)民間療法，探索致積食物炭劑對食積的影響及作用機(jī)制。

3.2 造模方法的確定 食積是中醫(yī)學(xué)特有的說法，是臨床常見的脾胃疾病，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)功能性消化不良及胃腸功能紊亂疾病較為接近。多因暴飲暴食、飲食不當(dāng)(包括過量進(jìn)食、進(jìn)食不易消化之物、饑飽不調(diào)、飲食不潔等)影響機(jī)體消化功能，使食物停滯而形成的一種胃腸道疾患[11]。查找文獻(xiàn)可知，小鼠食積模型建造方法大同小異。從處理因素分析來看，特制飼料結(jié)合牛奶灌胃的居多，但牛奶的濃度并不統(tǒng)一，50%、52%以及25%的牛奶均有報道，本次實驗選擇給小鼠喂食高蛋白的精制飼料，并且每天給予小鼠1次等量全脂牛奶灌胃，以此建造小鼠食積模型。從動物品種分析來看，以昆明小鼠居多，并且大部分研究者青睞于雄性小鼠，這可能與雌雄小鼠能量代謝存在差異性有關(guān)，因此本次小組實驗中選擇60只雄性小鼠。從造模時長分析來看[12]，食積小鼠模型造模時長非常不統(tǒng)一，但以7d居多，所以此次實驗小鼠造模時間為7d。

3.3 指標(biāo)討論

3.3.1 小鼠狀態(tài)、進(jìn)食量、糞便狀態(tài)觀測指標(biāo)的討論：觀察小鼠狀態(tài)、進(jìn)食量、糞便狀態(tài)是評價小鼠是否食積造模成功的重要依據(jù)。當(dāng)大量高蛋白、高脂肪的食物積滯于小鼠胃腸道，會造成小鼠胃腸蠕動減慢，出現(xiàn)胃腸動力障礙，導(dǎo)致小鼠糞便排泄障礙，進(jìn)食量減少，從而進(jìn)一步影響小鼠的精神活動狀態(tài)。在此次實驗中，記錄每天各組小鼠總的進(jìn)食量進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，與空白對照組相比，模型組小鼠進(jìn)食量日益減少，且精神狀態(tài)萎靡，喜扎堆；毛色灰暗，有少量脫毛現(xiàn)象；糞便排泄量少，整體黏膩質(zhì)軟,呈棕黃色。由此可見模型組小鼠食積表現(xiàn)明顯且日益加重，表示小鼠造模成功。

3.3.2 胃排空率和小腸推進(jìn)率指標(biāo)討論：胃腸的運(yùn)動功能是消化系統(tǒng)最重要的生理功能之一，胃排空率是反映胃腸推動力的最直觀指標(biāo)之一。本實驗研究結(jié)果顯示，與模型組比較，致積食物炭劑中、高劑量組胃排空率和小腸推進(jìn)率顯著增高(P<0.01)，致積食物炭劑低劑量組胃排空率和小腸推進(jìn)率均增高，但結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義。可能出現(xiàn)的原因有：(1)用藥時間短：用藥組共只用了7d藥，且在用藥過程中仍然喂養(yǎng)小鼠精制飼料，可能導(dǎo)致對最終的胃排空率數(shù)據(jù)產(chǎn)生影響；(2)操作手法不夠嫻熟：給小鼠灌胃喂藥過程中藥物有一定損耗，導(dǎo)致最終喂藥量低于實際喂藥量，影響用藥組的胃排空率。

3.3.3 BL-420小鼠離體小腸平滑肌收縮力指標(biāo)的討論：平滑肌的緊張性收縮是小腸保持其基本形狀、進(jìn)行其他形式運(yùn)動的基礎(chǔ)。當(dāng)小腸平滑肌的緊張性收縮增強(qiáng)時，有利于小腸內(nèi)容物的混合和運(yùn)送。但功能性消化不良時，會抑制小腸推動和收縮，故可通過測定小鼠離體小腸平滑肌收縮力的強(qiáng)弱來比較各組致積小鼠的治療效果[13]。實驗結(jié)果顯示，相較于模型組，致積食物炭劑低、中、高劑量組和多潘立酮組小腸平滑肌張力上升(P<0.01)。提示致積食物炭劑和多潘立酮對食積動物小腸平滑肌收縮功能改善有一定作用。

3.3.4 血清5-HT指標(biāo)的討論：5-HT既是一種神經(jīng)遞質(zhì)，又是一種血管活性物質(zhì)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍組織中起著多種生理作用，其本身也是強(qiáng)有力的腸道促分泌素。而5-HT受體的激活對胃腸道平滑肌張力也有著顯著的影響。臨床上一般將5-HT受體興奮劑如西沙必利、莫沙必利等作為治療功能性消化不良的胃腸動力藥[14]。本實驗通過對小鼠血清中5-HT水平的檢測，探究致積食物的炭劑對食積小鼠的作用機(jī)制。結(jié)果顯示，與模型組對比，致積食物炭劑組和多潘立酮組5-HT水平顯著升高(P<0.01)。

本研究表明致積食物炭劑能夠增加食積小鼠的進(jìn)食量，可顯著升高食積小鼠的胃排空率和小腸推進(jìn)率，可使食積小鼠小腸平滑肌收縮力上升，可致食積小鼠血清5-HT水平顯著上升。綜上所述，我們得出初步結(jié)論，致積食物炭劑對食積小鼠的治療效果較為明顯。