丹蔞片改善大鼠急性心肌缺血的作用研究

譚亞芳，潘詩婷，祁建勇，張敏州

心肌缺血是常見的心血管疾病，預防和治療心肌缺血已成為研究熱點。中醫理論認為氣虛血瘀是心肌缺血的病機。丹萎片秉承痰瘀同治法，具有通陽散結、行氣祛痰的功效，可用于改善冠心病心絞痛痰瘀互結型病人的臨床癥狀[1-3]、減少心肌細胞凋亡[4]、改善心室重構[5]、調節心律失常[6]、改善血脂紊亂等[7]，對心肌缺血具有保護作用[8]。本研究建立大鼠急性心肌缺血模型[9]，探討丹蔞片對心肌缺血的保護作用機制，闡明丹蔞片改善心肌缺血的優勢和作用靶點，為防治心肌梗死和再灌注損傷提供方法和依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級雄性健康SD大鼠190只，8～10周齡，體質量(230±20)g，購于廣東省醫學實驗動物中心，飼養于廣東省中醫院無特定病原體(SPF)級動物實驗中心，許可證號：SYXK(粵)2018-0094。所有動物實驗及飼養方案均遵照中華人民共和國動物處理條例(條例號：552001)，且所有動物實驗均在廣東省中醫院動物倫理委員會允許下進行。

1.2 藥物、試劑和儀器 丹蔞片超微粉(吉林康乃爾公司生產)；異丙腎上腺素(SIGMA公司生產)，美托洛爾(SIGMA公司生產)，絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制劑PD98059(CST公司生產)，磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制劑LY294002(CST公司生產)，鈣調素依賴性蛋白激酶(CaMK)抑制劑KN93(CST公司生產)，內皮型一氧化氮合酶(eNOS)抑制劑L-NAME(CST公司生產)；7180全自動生化分析儀，Cobas e601電化學發光分析儀。

1.3 動物模型的建立和給藥 參考文獻方法及本實驗室既往研究基礎制定手術方案，連續兩天皮下注射異丙腎上腺素85 mg/kg構建大鼠急性心肌缺血模型[10]。

1.3.1 現象實驗 選取SD大鼠40只，隨機分為對照組、異丙腎上腺素組、丹蔞片1 000 mg/kg組、美托洛爾組，每組10只，給藥2 d，具體給藥方法見表1。

表1 現象實驗各組給藥方法

1.3.2 量效實驗 選取SD大鼠80只，隨機分為生理鹽水組、異丙腎上腺素組、美托洛爾組、丹蔞片5 mg/kg組、丹蔞片50 mg/kg組、丹蔞片100 mg/kg組、丹蔞片500 mg/kg組、丹蔞片5 000 mg/kg組，每組10只，給藥2 d，具體給藥方法見表2。

表2 量效實驗各組給藥方法

1.3.3 機制實驗 選取SD大鼠60只，隨機分為異丙腎上腺素組、丹蔞片組、PD98059組、LY294002組、KN93組、L-NAME組，每組10只，給藥2 d，具體給藥方法見表3。

表3 機制實驗各組給藥方法

1.4 檢測指標 大鼠血液的心肌酶5項及肌鈣蛋白：由廣東省中醫院大學城醫院檢驗科收取樣本，7180全自動生化分析儀檢測天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、α-羥丁酸脫氫酶(α-BDH)；采用電化學發光法檢測肌鈣蛋白T(cTnT)。

2 結 果

2.1 現象實驗 與對照組比較，給藥后異丙腎上腺素組AST、CK、CK-MB、LDH、α-HBD、cTnT水平均升高，差異均有統計學意義(P<0.05)；與異丙腎上腺素組比較，丹蔞片1 000 mg/kg組和美托洛爾組給藥后AST、CK、CK-MB、LDH、α-HBD、cTnT水平均降低，差異均有統計學意義(P<0.05)。詳見表4。

表4 現象實驗血液檢測指標(±s)

2.2 量效實驗 與對照組比較，異丙腎上腺素組給藥后AST、CK、CK-MB、LDH、α-HBD、cTnT水平均升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。與異丙腎上腺素組比較,美托洛爾組、丹蔞片5 mg/kg組、丹蔞片50 mg/kg組、丹蔞片100 mg/kg組、丹蔞片500 mg/kg組、丹蔞片5 000 mg/kg組給藥后AST、CK、CK-MB、LDH、α-HBD、cTnT水平均下降，差異均有統計學意義(P<0.05)，其中，不同丹蔞片給藥劑量組AST、CK、CK-MB、LDH、α-HBD、cTnT水平下降幅度不同，且丹蔞片100 mg/kg組各指標下降幅度最大。詳見表5。

表5 量效實驗血液檢測指標(±s)

2.3 機制實驗 與對照組比較，異丙腎上腺素組給藥后AST、CK、CK-MB、LDH、α-HBD、cTnT水平均升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。與異丙腎上腺素組比較，丹蔞片組、PD98059組、LY294002組、L-NAME組、KN93組給藥后心肌酶AST、CK、CK-MB、LDH、α-HBD、cTnT水平均下降，差異均有統計學意義(P<0.05)。詳見表6。

表6 機制實驗血液檢測指標(±s)

3 討 論

心肌缺血是指心臟的血液灌注減少，導致心臟的供氧減少，不能支持心臟正常工作的一種病理狀態。血壓降低、主動脈供血減少、冠狀動脈阻塞可直接導致心臟供血減少、心瓣膜病、血黏度變化，心肌本身病變也會使心臟供血減少。

研究顯示，丹蔞片可緩解不穩定型心絞痛、高脂血癥，改善代謝綜合征病人的血管內皮功能。繆靜等[11]觀察了丹蔞片對動脈粥樣硬化(AS)大鼠血清抵抗素(resistin)、內皮素-1(ET-1)、白細胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和一氧化氮(NO)水平的影響，探討丹蔞片對AS模型大鼠血管內皮的保護作用及可能機制，結果表明，丹蔞片可通過降低AS模型大鼠血清抵抗素、ET-1、IL-6 和TNF-α水平，升高NO 水平，減輕AS模型大鼠血管內皮損傷，作用與他汀類藥物相似，表明丹蔞片亦可保護血管內皮，其作用機制可能是通過降低血清抵抗素、ET-1、IL-6和 TNF-α水平，增加 NO 的分泌，從而保護血管內皮細胞結構的完整和功能的完善，揭示了丹蔞片對急性心肌缺血的可能機制。李琳等[4]研究顯示，丹蔞片通過上調Bcl-2的表達、下調Caspase-3的表達，從而減輕心肌細胞凋亡、減少心肌梗死面積，保護心肌缺血損傷。雖然丹蔞片改善心肌缺血的療效已在臨床得到證實，但其潛在的機制尚未明確。

本研究通過假設丹蔞片可改善大鼠急性心肌缺血，并通過檢測大鼠血液的心酶5項和cTnT值，評估丹蔞片對大鼠急性心肌缺血的改善作用。同時通過給予通路抑制劑來排除得到丹蔞片治療急性心肌缺血的潛在機制，證實了異丙腎上腺素連續皮下注射2 d大鼠急性心肌缺血模型造模成功，結果還顯示美托洛爾和丹蔞片都具有抗心肌缺血的作用，且丹蔞片與美托洛爾效果相當，但仍需進一步明確其作用機制。