結直腸癌組織中Rictor蛋白的表達及其與臨床病理特征、預后的關系

周義志, 張忠偉, 向立斌, 劉 巖, 王 碩, 曹美楠

(中國人民解放軍聯勤保障部隊第962醫院, 黑龍江 哈爾濱, 150086)

結直腸癌是臨床常見的惡性腫瘤之一，發病率呈逐年升高趨勢。近年來，隨著治療方法的進步，結直腸癌患者的預后得以改善，但分期較晚、遠處轉移患者的預后仍不佳[1]。因此，探尋結直腸癌早期診斷與預后評估相關的分子標志物成為該研究領域的熱點。Rictor蛋白是哺乳動物雷帕霉素靶蛋白復合物2(mTORC2)的成員，參與調控哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信號通路。相關研究[2]表明, Rictor蛋白在結腸癌組織中高表達，與結腸癌的發生與發展有關。另有研究[3-4]提出，微小RNA-152(miR-152)和微小RNA-448(miR-448)可靶向調控Rictor蛋白而抑制結直腸癌細胞增殖。本研究觀察Rictor蛋白在結直腸癌組織中的表達情況，并分析其與臨床病理特征、預后的關系，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年6月—2018年6月在本院接受結直腸癌根治術治療并經病理組織學檢查確診的90例結直腸癌患者作為研究對象。納入標準: ① 臨床資料、病理數據無缺失者; ② 經病理明確診斷結直腸癌者; ③ 術前未接受放化療、免疫治療等抗腫瘤治療者; ④ 對本研究知情并簽訂書面同意書者。排除標準: ① 存在其他器官惡性腫瘤者; ② 懷孕期或哺乳期女性; ③ 近期接受過免疫抑制劑治療，或存在嚴重感染者。90例患者中，男51例，女39例; 年齡44～78歲，平均(60.6±12.3)歲; 腫瘤部位為左側結腸28例、右側結腸31例、直腸31例; TNM分期為Ⅰ期30例、Ⅱ期40例、Ⅲ期20例; 腫瘤最大直徑為1.5～5.5 cm, 平均(2.9±1.3) cm; 分化程度為低分化23例、中分化49例、高分化18例; 合并淋巴結轉移30例; 浸潤深度為T1期10例、T2期11例、T3期42例、T4期27例。收集90例患者的結直腸癌組織標本，并取對應的距癌組織5 cm處的正常結直腸組織作為對照，所有癌旁組織均經蘇木素-伊紅(HE)染色明確無癌細胞。

1.2 免疫組織化學方法

制備5 μm切片，實施脫蠟、脫水、水化等步驟，加入鼠抗人Rictor一抗(1∶50, 貨號ab1203, 美國Sigma公司)，置于4 ℃冰箱過夜，用磷酸鹽緩沖溶液(PBS)沖洗3次，加入兔抗鼠二抗(1∶100, 貨號M282, 大連寶生物有限公司), 37 ℃孵育30 min, 用PBS沖洗3次，加入二氨基聯苯胺(DAB)顯色，封片，于光學顯微鏡下觀察。半定量分析評分方法[2]: ① 細胞質染色強度評分，無黃染為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分; ② 陽性細胞百分比≤5%為0分, >5%～25%為1分, >25%～50%為2分, >50%～75%為3分, >75%為4分。以① 與② 評分乘積表示Rictor蛋白表達水平，參照全部患者的平均分值(4.23分)，將<4.23分判定為低表達, ≥4.23分判定為高表達。

1.3 隨訪方法

對所有患者進行隨訪(門診隨訪、電話隨訪等方式)，隨訪截止日期為2021年6月30日，隨訪時間為12～36個月，中位時間34個月，平均(34.1±8.0)個月，采用總體生存率對患者進行預后評價。

1.4 統計學分析

采用SPSS 20.0統計學軟件分析數據, Rictor蛋白陽性表達情況、生存率等計數資料以[n(%)]、百分率(%)描述，比較行χ2檢驗。采用Kaplan-Meier法繪制結直腸癌組織Rictor蛋白低表達、高表達患者的生存曲線，采用Log-Rank檢驗對生存率進行比較，并采用單因素和多因素Cox回歸分析探討結直腸癌預后的影響因素。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 Rictor蛋白在癌旁正常結直腸組織和結直腸癌組織中的表達情況

Rictor蛋白陽性表達細胞的染色表現為核周及細胞質內出現棕黃色或棕褐色顆粒。結直腸癌組織中Rictor蛋白陽性表達率為55.6%(50/90), 高于癌旁正常結直腸組織的11.1%(10/90), 差異有統計學意義(χ2=40.034,P<0.001)。見圖1。

2.2 結直腸癌組織中Rictor蛋白陽性表達與臨床病理特征的關系

結直腸癌組織中Rictor蛋白陽性表達率與腫瘤最大直徑、浸潤深度、TNM分期、分化程度和淋巴結轉移有關(P<0.05), 與性別、年齡及腫瘤部位無關(P>0.05), 見表1。

2.3 Rictor蛋白表達與結直腸癌患者預后的關系

本研究90例結直腸癌患者均未失訪，結直腸癌組織Rictor蛋白低表達患者的總體生存率高于Rictor蛋白高表達患者，差異有統計學意義(P<0.05), 見圖2。

圖2 結直腸癌組織Rictor蛋白低表達、高表達患者的生存曲線

2.4 結直腸癌患者預后的單因素、多因素Cox回歸分析

將患者是否死亡作為因變量，將性別(男、女)、年齡(<60歲、≥60歲)、腫瘤部位(右側結腸、左側結腸、直腸)、Rictor蛋白(低表達、高表達)、腫瘤最大直徑(<3 cm、≥3 cm)、浸潤深度(T1～T2期、T3～T4期)、TNM分期(Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ期)、分化程度(高分化、低中分化)和淋巴結轉移(有、無)作為自變量，進行單因素、多因素Cox回歸分析。分析結果顯示, Rictor蛋白高表達、TNM分期Ⅲ期是結直腸癌患者死亡的獨立危險因素(P<0.05), 見表2。

表2 結直腸癌患者預后的單因素、多因素Cox回歸分析

3 討 論

結直腸癌是一種異質性腫瘤，其機制目前尚未闡明。基因組學研究[5]發現，結直腸癌組織中眾多基因呈差異性表達。盡管免疫靶向治療等治療手段可大大改善結直腸癌患者的預后，提升患者的生活質量，但目前臨床尚未發現有效的分子靶點。大量研究[6-8]發現，腫瘤浸潤深度、TNM分期、分化程度和淋巴結轉移等臨床病理特征與結直腸癌預后有關。因此，尋找與臨床病理特征及預后有關的分子標志物對于結直腸癌的早期診斷和預后評估具有重要意義。

Rictor蛋白屬于mTORC2的成員，在腫瘤增殖、遷移、侵襲和上皮間質轉化(EMT)等過程中發揮著重要作用[9-11]。研究[12]發現, Rictor蛋白在子宮內膜癌組織中高表達，是患者預后的獨立危險因素。此外, Rictor蛋白在多種消化道腫瘤組織中高表達，且與患者的預后有關[13-15]。本研究采用免疫組織化學方法檢測結直腸癌組織中Rictor蛋白表達情況，發現Rictor蛋白在結直腸癌組織中高表達，與相關研究[16]結論基本一致。黃仕思等[17]研究發現，沉默Rictor表達可抑制肝癌細胞的惡性生物學行為及EMT過程。由此推測, Rictor可能通過促進EMT而增加腫瘤細胞的惡性生物學行為。

臨床病理特征是反映腫瘤進展和預測腫瘤患者預后的可靠指標。本研究分析Rictor蛋白與結直腸癌患者臨床病理特征的關系后發現, Rictor蛋白陽性表達率與腫瘤最大直徑、浸潤深度、TNM分期、分化程度和淋巴結轉移有關，提示Rictor蛋白與結直腸癌惡性生物學行為有關。本研究結果顯示, Rictor蛋白高表達患者的總體生存率低于Rictor蛋白低表達患者，且Rictor蛋白高表達是結直腸癌患者死亡的獨立危險因素。由此提示, Rictor蛋白高表達可能與結直腸癌患者的低生存率有關，推測Rictor蛋白通過調控腫瘤細胞EMT促進細胞侵襲、轉移等惡性生物學過程，進而影響患者的預后[18]。但Rictor蛋白對結直腸癌的影響有待細胞功能實驗和動物實驗證實，且其具體作用機制也有待探索。

綜上所述, Rictor蛋白在結直腸癌組織中高表達，且Rictor蛋白表達情況與結直腸癌患者臨床病理特征和預后有關，但Rictor蛋白通過何種通路發揮作用尚需進一步開展體內外實驗加以明確。