鞘花的化學成分及抗腫瘤活性研究

潘立衛，羅澤萍，韋 正，汪艷平，潘彩燕，王愛娟

河池學院，宜州 546300

鞘花Macrosolencochinchinensis(Lour.)Van Tiegh.廣泛分布于我國西南地區，曾被作為傳統桑寄生用藥，具有補肝腎，除風濕，強筋骨，通經絡，益血，安胎等功效。臨床上用于治療腰膝酸痛、風寒濕痹、筋骨痿弱、崩漏經多、腳氣、妊娠漏血、產后乳汁不下、胎動不安、偏枯、頭暈目眩等[1,2]。鞘花主要寄生于板栗、樟樹、杉木、楓香樹等植被枝干上[3]，其因寄主的不同，會有不同的藥用功效。課題組前期研究發現黃樟鞘花水煎液抗腫瘤活性顯著，此外，鞘花多種溶劑的萃取物在體外對A549細胞有抑制增殖的作用，而關于鞘花的化學成分和抗腫瘤作用研究得較少，特別是寄主為黃樟的鞘花的化學成分及抗腫瘤作用，筆者未見國內外文獻報道。為進一步研究黃樟鞘花的藥用物質基礎，本文對廣西產黃樟鞘花的化學成分進行了系統分離。最后對分離獲得的單體化合物的抗腫瘤活性進行初步評價，以進一步明確黃樟鞘花抑制腫瘤細胞增殖的化學物質基礎及其可能機制，為黃樟鞘花的深度加工利用和新型天然抗腫瘤功能性食品的開發提供一定的理論參考，對充分挖掘黃樟鞘花的食用及保健價值具有積極意義。

1 材料與方法

1.1 材料

METTLER-ME104E電子分析天平(瑞士METTLER公司)；MS Finnigan Trace DSQ四極桿質譜儀；NMR瑞士Bruker Drx-500 MHz；瑞士BrukerAV-400 MHz；1260高效制備液相色譜儀(美國安捷倫公司)；1260-6130液質聯用色譜儀(美國安捷倫公司)；RE-52C旋轉蒸發器(上海亞榮生化儀器廠)；SHB-Ⅲ循環水式真空泵(鄭州長城科工貿有限公司)。BD C6 plus流式細胞儀(美國BD公司)；xMark酶標儀(美國伯樂BIO-RAD公司)；Forma3111 CO2恒溫培養箱(美國Thermo)；CKX53倒置顯微鏡(日本奧林巴斯)；BSC-1600IIA2生物安全柜(蘇州安泰)。AB-8大孔吸附樹脂(南開大學樹脂廠)；RP-C18反相硅膠(加拿大Silicycle公司)；Sephadex LH-20(美國Pharmacia公司)；MCI(三菱化學MCI GEL CHP20P 聚苯乙烯型反相樹脂填料，粒徑75～150 μm，孔徑：0.03 μm)；色譜甲醇(美國天地)。其余試劑均為分析純，由國藥控股集團化學試劑有限公司提供。鞘花寄生藥材采摘于廣西河池市，經河池學院覃勇榮教授鑒定為桑寄生科鞘花寄生屬植物Macrosolencochinchinensis(Lour.)Van Tiegh.莖葉。人肺癌細胞株A549(河池學院化學與生物工程學院細胞室保存)；CCK-8細胞增殖檢測試劑盒(漢恒生物科技(上海)有限公司)；DMEM培養基和胎牛血清(美國Gibco公司)；細胞周期檢測試劑盒和Annexin V-FITC/PI雙染細胞凋亡試劑盒(南京建成生物工程研究所)；P53、Bax、Bcl-2 ELISA試劑盒(上海優選生物科技有限公司);5-氟尿嘧啶(5-FU，上海士鋒生物科技有限公司)；二甲基亞砜(DMSO，上海國藥集團化學試劑有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 提取與分離

鞘花寄生藥材粗粉50.0 kg，用乙醇回流提取，回收溶劑得乙醇總提取物，總提取物用水溶解后，再用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇依次萃取并回收溶劑，分別得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位浸膏1 450、860、2 650 g。用硅膠柱色譜分離石油醚部位浸膏103 g，用石油醚-乙酸乙酯=100∶1→1∶1梯度洗脫，得到11個流分經石油醚-乙酸乙酯反復硅膠柱色譜分離，得化合物1(5 mg)、2(90 mg)、3(415 mg)、4(560 mg)、5(725 mg)、6(1 450 mg)。取乙酸乙酯部位浸膏107 g用硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇(100∶0→0∶100)梯度洗脫，得12個流分經硅膠、聚酰胺、MCI、ODS、Sephadex LH-20及高效制備液相色譜分離，制備液相條件為色譜柱(ZORBAX Eclipse XDB，21.2 mm×150 mm，5 μm)；λ=268 nm；進樣量：100 μL；流速：5 mL/min；流動相：甲醇/水(5%→100%)；梯度洗脫45 min，得到化合物7(270 mg)、8(325 mg)、9(55 mg)、10(215 mg)。用AB-8孔吸附樹脂柱色譜分離正丁醇部位浸膏2 600 g，用水-乙醇作為洗脫劑梯度洗脫。聚酰胺、MCI Gel、DS、Sephadex LH-20柱色譜及高效制備液相色譜法進行分離純化，制備條件為色譜柱(ZORBAX Eclipse XDB，21.2 mm×150 mm，5 μm)；λ=254 nm；進樣量：200 μL；流速：5 mL/min；流動相：甲醇/水(5%→55%)；梯度洗脫50 min，得到化合物11(625 mg)、12(560 mg)、13(130 mg)、14(3 120 mg)。

1.2.2 細胞培養

A549細胞株培養于含10%胎牛血清和1%雙抗(100 U/mL青霉素、100 mg/L鏈霉素)的DMEM培養液中，37 ℃，5%CO2培養箱中傳代培養。用0.25%胰蛋白酶胰酶消化貼壁細胞進行傳代，取對數生長期細胞進行試驗。

1.2.3 細胞活力檢測

取對數生長期A549細胞，用10%胎牛血清的DMEM培養液調整細胞數為5×105個/mL，接種于96孔細胞培養板，每孔0.2 mL，待細胞貼壁70%～80%時，吸棄舊培養液，分別加入含不同濃度化合物1～14(1.5、3.0、6.0、12.0、24.0、48.0、96.0、192 μg/mL)的培養液0.2 mL，每組設3個重復，即每個劑量組設3個平行孔取平均值。培養24 h后，每孔加入10 μL CCK-8溶液，繼續培養4 h，用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。按照以下公式計算各組細胞增殖抑制率：細胞增殖抑制率=(1-A實驗組/A對照組)×100%，用SPSS18.0軟件計算半數抑制濃度(IC50)。

1.2.4 細胞凋亡率檢測

取對數生長期A549細胞，以2×105個/孔的密度接種于6孔細胞培養板中。待細胞貼壁70%～80%時，吸棄舊培養液，分別加入含不同濃度化合物(10、20、30、40、50、60、70、80 μmol/L)的培養液2 mL，每組設5個重復。處理24 h以后，吸棄舊培養液，用0.25%胰蛋白酶消化收集細胞，冷PBS(磷酸鹽緩沖液，pH7.4)洗滌細胞3次，并調整細胞數至1×106個/mL。根據試劑盒說明書操作用流式細胞儀測定細胞凋亡率。

1.2.5 Bcl-2、Bax、p53蛋白表達水平檢測

細胞培養、分組與化合物處理同“1.2.4”項。隨后1 000 r/min，4 ℃離心5 min收集細胞，小心吸除上清，每個EP管加入100 μL細胞裂解液，重懸沉淀，冰浴裂解30 min。4 ℃，12 000 r/min離心15 min。將上清轉移到冰浴預冷的EP管中。按試劑盒說明書測定Bcl-2、Bax、p53蛋白表達水平。

1.2.6 數據分析

2 結果與分析

2.1 化合物結構鑒定

化合物1白色粉晶(CHCl3)；ESI-MS：m/z491[M + Na]+，分子式為C32H52O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.17(1H，t，J= 3.4 Hz，H-12)，4.49(1H，dd，J= 9.0，7.0 Hz，H-3)，2.06(3H，s，COCH3)，1.15(3H，s，H-27)，1.08(3H，s，H-26)，1.03(3H，s，H-25)，0.97(3H，s，H-30)，0.97(3H，s，H-24)，0.96(3H，s，H-29)，0.83(3H，s，H-23)，0.79(3H，s，H-28)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：38.3(C-1)，26.9(C-2)，80.9(C-3)，37.7(C-4)，55.2(C-5)，18.2(C-6)，32.6(C-7)，39.8(C-8)，47.6(C-9)，36.8(C-10)，23.5(C-11)，121.6(C-12)，145.2(C-13)，41.7(C-14)，28.4(C-15)，26.1(C-16)，32.6(C-17)，47.5(C-18)，46.8(C-19)，31.1(C-20)，34.7(C-21)，37.2(C-22)，28.4(C-23)，16.8(C-24)，15.7(C-25)，16.7(C-26)，26.1(C-27)，27.3(C-28)，33.3(C-29)，23.6(C-30)，170.9(C-31)，21.3(C-32)。以上數據與文獻[4]報道基本一致，故鑒定化合物1為β-香樹脂醇乙酸酯。

化合物2白色粉末狀結晶(CHCl3)；EI-MS：m/z426[M]+，分子式為C30H50O；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.18(1H，d，J= 4.8 Hz，H-12)，3.21(1H，m，H-3)，1.20、1.10、0.99、0.96、0.93、0.86、0.82、0.78(3H，s，CH3×8)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：38.5(C-1)，26.9(C-2)，79.0(C-3)，38.9(C-4)，55.1(C-5)，18.3(C-6)，32.7(C-7)，39.8(C-8)，47.6(C-9)，36.9(C-10)，23.5(C-11)，121.7(C-12)，145.2(C-13)，41.7(C-14)，26.1(C-15)，26.9(C-16)，32.5(C-17)，47.2(C-18)，46.8(C-19)，31.1(C-20)，34.7(C-21)，37.2(C-22)，28.0(C-23)，15.5(C-24)，15.6(C-25)，16.8(C-26)，26.0(C-27)，28.4(C-28)，33.3(C-29)，23.7(C-30)。以上數據與文獻[5]報道基本一致，故鑒定化合物2為β-香樹脂醇。

格拉斯說，“在中國，由于老齡化加劇和醫保體系尚未完善，阿爾茨海默病的防治將要面對更為復雜的困境，這是任何公共衛生專家和政策制定者都需要著力應對的局面。”

化合物3白色粉末(CHCl3)；EI-MS：m/z426[M]+，分子式為C30H50O；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：4.68(1H，s，H-29)，4.56(1H，s，H-29)，3.21(1H，dd，J= 11.6，5.1 Hz，H-3)，1.67(3H，s，H-30)，1.02(3H，s，H-26)，0.97(3H，s，H-23)，0.96(3H，s，H-27)，0.82(3H，s，H-25)，0.78(3H，s，H-28)，0.78(3H，s，H-24)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：38.7(C-1)，28.0(C-2)，79.0(C-3)，39.0(C-4)，55.3(C-5)，18.3(C-6)，34.2(C-7)，40.8(C-8)，50.4(C-9)，37.1(C-10)，20.8(C-11)，25.1(C-12)，38.0(C-13)，43.0(C-14)，27.4(C-15)，35.5(C-16)，43.0(C-17)，48.3(C-18)，48.0(C-19)，150.6(C-20)，29.8(C-21)，40.0(C-22)，28.5(C-23)，15.3(C-24)，16.1(C-25)，16.2(C-26)，14.6(C-27)，18.0(C-28)，109.3(C-29)，19.8(C-30)。以上數據與文獻[6]報道基本一致，鑒定化合物3為羽扇豆醇。

化合物4白色固體(CHCl3)；EI-MS：m/z426，分子式為C30H50O；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：3.21(1H，m，H-3)，1.72(1H，m，Ha-2)，1.62(1H，m，Hb-2)，1.56(1H，m，Ha-1)，1.56(1H，m，H-8)，1.56(1H，m，Ha-11)，1.56(1H，m，Ha12)，1.55(1H，m，Ha-15)，1.31(1H，m，Hb-1)，1.31(1H，m，Hb-11)，1.31(1H，m，Hb-12)，1.30(1H，m，Hb-15)，1.25(1H，m，H-5)，1.25(18H，m，H-18、20、26、27、29、30)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：31.3(C-1)，32.8(C-2)，76.6(C-3)，43.3(C-4)，44.5(C-5)，24.7(C-6)，27.3(C-7)，46.9(C-8)，21.9(C-9)，29.5(C-10)，27.2(C-11)，35.3(C-12)，45.3(C-13)，48.9(C-14)，32.8(C-15)，25.2(C-16)，52.2(C-17)，17.8(C-18)，29.5(C-19)，19.1(C-20)，36.1(C-21)，35.0(C-22)，30.8(C-23)，156.9(C-24)，34.8(C-25)，23.5(C-26)，22.0(C-27)，105.9(C-28)，18.3(C-29)，14.4(C-30)。以上數據與文獻[7]報道基本一致，故鑒定化合物4為環桉樹醇。

化合物5白色針狀結晶(CHCl3)；EI-MS：m/z400[M]+，分子式為C28H48O；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.35(1H，d，J= 5.2 Hz，H-6)，3.52(1H，m，H-3α)，1.01(3H，s，H-19)，0.92(3H，d，J= 6.6 Hz，H-28)，0.85(3H，d，J= 6.6 Hz，H-27)，0.82(3H，d，J= 1.3 Hz，H-25)，0.81(3H，d，J= 6.9 Hz，H-21)，0.68(3H，s，H-18)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：37.3(C-1)，28.3(C-2)，71.8(C-3)，42.3(C-4)，140.8(C-5)，121.7(C-6)，31.6(C-7)，29.2(C-8)，50.1(C-9)，36.5(C-10)，21.1(C-11)，42.3(C-12)，45.8(C-13)，56.8(C-14)，23.1(C-15)，24.3(C-16)，56.1(C-17)，11.9(C-18)，19.4(C-19)，36.2(C-20)，19.1(C-21)，34.0(C-22)，26.1(C-23)，39.8(C-24)，30.9(C-25)，18.8(C-26)，19.8(C-27)，12.0(C-28)。以上數據與文獻[8]報道基本一致，故鑒定化合物5為菜油甾醇。

化合物6無色針狀結晶(CHCl3)；ESI-MS：m/z453[M+K]+，分子式為C29H50O；mp.129～130 ℃；Liebermann-Burchard反應陽性；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.34(1H，d，J= 4.6 Hz，H-6)，3.51(1H，m，H-3)，0.96、0.82、0.80、0.78、0.67(5×CH3)，0.90(3H，d，H-21)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：37.3(C-1)，31.7(C-2)，71.8(C-3)，42.4(C-4)，140.8(C-5)，121.8(C-6)，32.1(C-7)，32.1(C-8)，50.2(C-9)，36.6(C-10)，21.2(C-11)，39.9(C-12)，42.4(C-13)，56.8(C-14)，24.4(C-15)，28.3(C-16)，56.1(C-17)，11.9(C-18)，19.5(C-19)，36.2(C-20)，18.9(C-21)，34.0(C-22)，26.1(C-23)，45.9(C-24)，29.2(C-25)，19.9(C-26)，19.1(C-27)，23.1(C-28)，12.1(C-29)。以上數據與文獻[9]報道基本一致，故鑒定化合物6為β-谷甾醇。

化合物7黃色針狀結晶(CH3OH)；mp.313～314 ℃；ESI-MS：m/z303[M+H]+，分子式為C15H10O7；1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：12.48(1H，s，5-OH)，9.39(1H，br s，OH)，7.65(1H，s，H-2′)，7.52(1H，d，J= 8.5 Hz，H-6′)，6.86(1H，d，J= 8.5 Hz，H-5′)，6.38(1H，s，H-8)，6.16(1H，s，H-6)。以上數據與文獻[10]報道基本一致，與槲皮素對照品共薄層Rf值一致，故鑒定化合物7為槲皮素。

化合物8黃色粉末(CH3OH)；ESI-MS：m/z449[M+H]+，分子式為C21H20O11；1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.32(1H，d，J= 2.1 Hz，H-2′)，7.25(1H，d，J= 2.0 Hz，H-6′)，6.85(1H，d，J= 8.3 Hz，H-5′)，6.35(1H，d，J= 2.0 Hz，H-8)，6.19(1H，d，J= 2.0 Hz，H-6)，5.26(1H，s，Rha-H-1)，0.85(3H，d，J= 6.2 Hz，Rha-CH3)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：156.7(C-2)，134.2(C-3)，178.1(C-4)，159.8(C-5)，98.9(C-6)，165.1(C-7)，94.9(C-8)，157.4(C-9)，104.1(C-10)，122.9(C-1′)，115.5(C-2′)，145.6(C-3′)，148.9(C-4′)，116.1(C-5′)，121.1(C-6′)，103.7(C-1″)，72.2(C-2″)，72.3(C-3″)，73.4(C-4″)，72.1(C-5″)，17.8(C-6″)。以上數據與文獻[11]報道基本一致，故鑒定化合物8為槲皮苷。

化合物9白色針晶(CH3OH)；ESI-MS：m/z171[M+H]+，分子式為C7H6O5；1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：9.22(3H，br s，OH)，7.06(2H，s，H-2，6)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：121.0(C-1)，110.1(C-2)，146.0(C-3)，138.7(C-4)，146.0(C-5)，110.1(C-6)，168.0(C-7)。以上數據與文獻[12]報道基本一致，故鑒定化合物9為沒食子酸。

化合物10黃色粉末(CH3OH)；ESI-MS：m/z633[M+Na]+，分子式為C27H30O16；1H NMR(500 MHZ，DMSO-d6)δ：12.58(1H，br s，5-OH)，10.91(1H，s，7-OH)，9.75(1H，s，4-OH)，7.52(2H，m，H-2′，H-6′)，6.83(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5′)，6.37(1H，d，J= 2.1 Hz，H-8)，6.18(1H，d，J= 2.1 Hz，H-6)，5.33(1H，d，J= 7.5 Hz，H-1″)，4.37(1H，d，J= 1.1Hz，H-1′′′)，3.40(10H，m)，0.98(3H，d，J= 6.2 Hz，H-6′′′)；13C NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：156.6(C-2)，133.3(C-3)，177.3(C-4)，161.2(C-5)，98.7(C-6)，164.1(C-7)，93.6(C-8)，156.6(C-9)，103.9(C-10)，121.2(C-1′)，115.2(C-2′)，144.7(C-3′)，148.4(C-4′)，116.2(C-5′)，121.6(C-6′)，101.2(C-1″)，74.1(C-2″)，76.4(C-3″)，70.4(C-4″)，75.9(C-5″)，67.0(C-6″)，100.8(C-1′′′)，70.5(C-2′′′)，70.0(C-3′′′)，71.8(C-4′′′)，68.2(C-5′′′)，17.8(C-6′′′)。以上數據與文獻[13]報道一致，故鑒定化合物10為蘆丁。

化合物11淡黃色針晶(DMSO)；ESI-MS：m/z303[M+H]+，分子式為C14H6O8；1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：7.45(2H，s，H-5)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：107.7(C-1，1′)，139.6(C-2，2′)，136.4(C-3，3′)，148.1(C-4，4′)，110.3(C-5，5′)，112.3(C-6，6′)，159.1(C-7，7′)。以上數據與文獻[14]報道基本一致，故鑒定化合物11為鞣花酸。

化合物12黃色針晶(CH3OH)；ESI-MS：m/z247[M-H]-，分子式為C12H8O6；1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：7.27(1H，s，H-7)，3.17(2H，t，J= 3.8 Hz，H-10)，2.50(2H，t，J= 3.8 Hz，H-9)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：145.0(C-2)，140.1(C-3)，115.5(C-3a)，144.2(C-4)，141.4(C-5)，149.3(C-6)，108.0(C-7)，113.3(C-7a)，160.6(C-8)，23.9(C-9)，33.0(C-10)，195.6(C-11)。以上數據與文獻[14]報道基本一致，故鑒定化合物12為短葉蘇木酚。

化合物13黃色無定形粉末(DMSO)；ESI-MS：m/z485[M+Na]+，分子式為C21H18O12；1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：8.40(1H，s，H-5′)，8.07(1H，s，H-5)，5.80(1H，d，J= 7.0 Hz，H-1″)，4.39(4H，m，H-2″、3″、4″、5″a)，4.30(3H，s，3′-OCH3)，4.22(3H，s，3-OCH3)，3.92(1H，m，H-5″b)；13C NMR(125 MHz，C5D5N)δ：111.7(C-1)，142.4(C-2)，141.4(C-3)，60.4(3-OCH3)，151.9(C-4)，112.5(C-5)，112.3(C-6)，158.6(C-7)，114.5(C-1′)，142.5(C-2′)，141.9(C-3′)，61.9(3′-OCH3)，152.5(C-4′)，112.6(C-5′)，115.1(C-6′)，159.2(C-7′)，103.7(C-1″)，74.5(C-2″)，78.2(C-3″)，70.7(C-4″)，67.4(C-5″)。以上數據與文獻[14,15]報道基本一致，故鑒定化合物13為鞣花酸-3，3′-二甲醚-4′-O-β-D-木糖苷。

化合物14黃色無定形粉末(DMSO)；ESI-MS：m/z485[M+Na]+，分子式為C21H18O12；1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：10.8(1H，s，OH)，7.74(1H，s，H-5′)，7.52(1H，s，H-5)，5.49(1H，d，J= 3.8 Hz，H-1″)，5.18(1H，d，J= 5 Hz，H-2″)，5.14(1H，d，J= 10 Hz，H-3″)，5.11(1H，d，J= 5 Hz，H-4″)，4.06(3H，s，-OCH3)，4.03(3H，s，-OCH3)，3.80～3.20(2H，m，H-5″)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：114.2(C-1)，141.6(C-2)，141.9(C-3)，151.2(C-4)，12.8(C-5)，111.8(C-6)，158.4(C-7)，111.1(C-1′)，141.0(C-2′)，140.6(C-3′)，152.9(C-4′)，111.9(C-5′)，111.6(C-6′)，158.4(C-7′)，101.8(C-1″)，76.2(C-2″)，73.1(C-3″)，69.3(C-4″)，65.8(C-5″)，61.7(3-OCH3)，61.0(3′-OCH3)。以上數據與文獻[16]報道基本一致，故鑒定化合物14為鞣花酸-3，3′-二甲醚-4-O-β-D-木糖苷。

2.2 化合物1～14對A549細胞的抑制活性

以5-氟尿嘧啶(5-FU)作為陽性對照測定化合物1～14對A549細胞的抑制活性，由表1可見，除了化合物1、2和4外，其余化合物對A549細胞均有不同程度的抑制作用，其中以化合物14作用最強。其促進A549細胞凋亡的作用及機制值得進一步深入研究。

表1 化合物1～14對A549細胞的抑制活性

2.3 化合物14對A549細胞凋亡的影響

隨著化合物14處理濃度的升高，處理組細胞凋亡率逐漸升高。結果表明化合物14對A549細胞的凋亡具有誘導效應，并呈現一定的劑量依賴性(見圖1)。

圖1 化合物14對A549細胞凋亡的影響

2.4 化合物14對A549細胞凋亡相關基因表達的影響

用化合物14處理A549細胞24 h后，隨著化合物14濃度的增加，Bcl-2蛋白表達量降低，而Bax和p53蛋白表達量逐漸增高。上述結果表明化合物14可能通過抑制肺癌A549細胞Bcl-2蛋白表達，并增強Bax和p53蛋白表達，進而誘導細胞凋亡(見圖2～4)。

圖2 化合物14對A549細胞Bax蛋白影響

3 結論

鞘花植物中共分離得到14個化合物，主要為萜類、甾醇、黃酮、酚酸、鞣花酸等類型化合物，均為首次從該植物中分離得到。經體外細胞毒活性測定后，發現除了化合物1、2和4外，其余化合物對A549細胞均有不同程度的抑制作用，其中以化合物14作用最強。對化合物14誘導非小細胞肺癌A549細胞凋亡的作用研究發現，其能抑制A549肺癌細胞增殖，其機制可能是通過阻滯細胞周期從而誘導細胞凋亡。

圖3 化合物14對A549細胞Bcl-2蛋白影響

圖4 化合物14對A549細胞P53蛋白影響