P53、CDC7蛋白在多原發肺腺癌中表達的研究

張克劍，楊金禮，閆 陽，姜 慧，趙 輝

（吉林省腫瘤醫院胸部腫瘤外一科，長春 130021）

多原發性肺癌 （multipleprimary lungcancer，MPLC）是指在同一患者肺內同時或先后發生兩個或兩個以上原發性惡性腫瘤[1]，分為同時性（synchronous）和異時性 （metachronous）兩種。然而關于MPLC發病機制及診斷始終沒有一個金標準，研究表明多原發肺癌的發生、發展和轉移與P53基因突變及P53基因信號傳導通路密切相關[2]，現以P53蛋白、CDC7蛋白在多原發肺腺癌原發灶中表達，探討其與多原發肺癌臨床病理學特征關系和發病機制。

1 資料和方法

1.1 一般資料

收集吉林省腫瘤醫院2017年1月－2020年12月接受手術治療且病理為腺癌（排除轉移癌）的多原發肺癌患者56例（每例均有 2個或2個以上獨立病灶），術前均未做任何治療。56例中男20例，女36例；年齡 36～76歲，平均56歲。臨床癥狀表現為無癥狀體檢發現18例，咳嗽20例，胸痛8例，胸悶10例。同時性38例中病灶位于同側右肺內的12例，同側左肺內的10例，左右兩側肺內均有16例。異時性18例中病灶位于同側右肺內的6例，同側左肺內的4例，對側肺內均有8例。

1.2 實驗方法

病變組織、正常肺組織分別采用免疫組化二步法，P53蛋白、CDC7蛋白抗體的工作稀釋度分別為1: 200、1: 100、1: 50，以半定量法判定結果。P53 主要表達于癌細胞核，CDC7主要表達于癌細胞胞漿，陽性細胞呈棕黃色或棕褐色顆粒。每例標本隨機選取5個不同高倍視野（各計 100 個細胞），計算腫瘤細胞中 P53、CDC7表達的陽性細胞數。P53、CDC7蛋白陽性細胞的計算：1）首先，按陽性細胞數計分： 0%～5%為0分，5%＜1分＜25%，25%＜2分＜50%，50%＜3分＜75%，＞75%為4分。2）再按陽性細胞染色強度計分：無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深棕黃/棕褐色為3分。兩者之和所得總分進行判斷，0-2分為陰性（-），3-7 分為陽性（+）。每例患者有2個病灶，將（-、-）記為陰性，（-、+）和（+、+）記為陽性結果。病變組織、正常肺組織行Western blotting檢測腫瘤組織中P53蛋白、CDC7蛋白的表達。結果應用 Phoretix ID 軟件灰度掃描，其數值為相應蛋白與內參蛋白（GAPDH）相除得到的相對光密度值。

1.3 統計學方法

所有數據采用統計學軟件采用SPSS 17.0軟件包分析，采用均數±標準差（±s）表示，組內兩兩比較采用t檢驗，百分率差異檢驗采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 56例NSCLC患者臨床基線資料

見表1。

表1 56例NSCLC患者臨床基線資料

2.2 P53、CDC7蛋白免疫組化檢測結果

P53 表達陽性染色主要顯示為細胞核呈棕色。56例肺癌組織中P53 陽性率為42%。56例正常肺組織中P53、CDC7蛋白不表達或幾乎不表達。與正常肺組織相比，P53蛋白的表達水平差異有顯著統計學意義（P＜0.01）。CDC7蛋白陽性染色主要顯示為細胞核內出現棕黃色或棕褐色顆粒，陽性率為56%。與正常肺組織相比，CDC7蛋白的表達水平差異有顯著統計學意義（P＜0.01）（見圖1）。

圖1 P53蛋白、CDC7蛋白在正常組織及肺癌組織中的表達

2.3 多原發肺癌中P53蛋白、CDC7蛋白的表達水平

見表2。

表2 多原發肺癌中P53蛋白、CDC7蛋白的表達水平

3 討論

Spurgers等[3]研究發現高表達的CDC7和P53缺失相關，很多研究表明P53的缺失和靶基因的轉錄激活相關，P53能夠選擇性的抑制靶基因，影響細胞應答，而且這種抑制對于P53誘導的細胞凋亡和細胞周期阻滯是非常重要的。最近的研究表明很多涉及DNA復制的基因可能都受到P53抑制，包括CDC6、CDC2和 CDC7等。Bonte等[4]引對57個腫瘤細胞系進行對比之后發現，CDC7蛋白表達和P53突變之間具有顯著相關性，過表達CDC7的細胞系中大約90%都伴有P53突變。許丹丹等[5]報道CDC7作為一種蛋白激酶，在正常細胞中表達很低，但在細胞周期中發揮重要的作用。隨著研究的不斷深入，越來越多的證據表明它與腫瘤密切相關。寧暉等[6]P53、HER2和K-ras在多原發性肺癌原發灶中過度表達率分別為 37.26%、47.06%和39.22%，38例正常肺上皮組織中P53、HER2、K-ras不表達或幾乎不表達。

本研究通過檢測多原發肺癌中P53、CDC7蛋白的表達水平，發現多原發肺癌患者腫瘤組織中P53蛋白和CDC7蛋白的表達均增高，但P53表達的水平與患者年齡、性別、吸煙史及腫瘤的分期無關（P＞0.05）。多原發肺癌患者腫瘤組織中CDC7蛋白表達的水平與患者年齡、性別及吸煙史因素無關（P＞0.05）。在多原發肺癌中P53、CDC7的表達均明顯表達，說明在多原發肺癌的發生過程中至少存在2種蛋白的參與。P53、CDC7蛋白的共同表達，說明這兩種蛋白可能有協同致癌作用。多原發肺癌患者腫瘤組織中CDC7蛋白表達的水平與患者病理分期因素有關，中晚期肺癌患者腫瘤組織中CDC7蛋白表達明顯高于早期。在多原發肺癌中P53蛋白的表達水平的高低與淋巴結轉移無明顯關系，CDC7蛋白的表達水平的高低與淋巴結轉移有明顯關系，CDC7蛋白在有淋巴結轉移的多原發肺癌組織中，陽性率明顯高于無淋巴結轉移者。這說明CDC7蛋白的表達水平高與患者術后預后有關，是多原發肺癌預后不良的指標。在多原發肺癌中CDC7的表達高低是否受P53蛋白的調節和影響，暫無法確定，有待于進一步研究。