BCL 11A在乳腺癌中的表達及其臨床病理學意義

蔣逸婷 鄭巧靈 楊映紅 馮昌銀 陳瑚 林琳

乳腺癌是全世界女性最為普遍的惡性腫瘤之一，最近幾年時間以來患病比例逐步增加并且表現年輕化的發展趨勢[1]。依據乳腺癌遺傳分子基因生物表達譜，就能夠劃分為幾大類重要的乳腺癌亞型，最具備特點性的被叫做管腔A型、管腔B型、HER2過表達型和三陰性乳腺癌。即使伴隨著醫療綜合應用水平的持續提升，乳腺癌的治療獲得了非常大的發展進度，但是由于其異質性強，預后及生存差異很大。鑒于此，臨床上要更加關注于乳腺癌的發生和進展機制，了解乳腺癌病變的發生發展情況，研究腫瘤的發展過程和影響因素，通過分析生物學行為，為治療方案的制定尋找并確定全新的靶點，這也可以為乳腺癌的早期診斷、治療和預后提供豐富并且堅實可靠的基本概念原理。B慢性淋巴生物細胞白血病/淋巴瘤11A遺傳物質基因是BCL家族的組員，位于人類2P 16.1染色體，在惡性實體腫瘤中存在異常表達，與多種腫瘤的發生有關[2-3]。本次深入研究分析經過檢測BCL 11A遺傳物質基因在乳腺癌病例中的基因傳達實際狀況，全面研究和探索討論BCL 11A遺傳分子基因生物表達和乳腺癌產生發展相互之間已有的內部相互聯系，為乳腺癌的產生機理供應一些可能的理論參考依據，為乳腺癌的靶向治療供應新發展思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

病例納入標準：（1）2013年1月—2020年12月于福建省醫科大學附屬協和醫院手術治療的乳腺癌患者；（2）研究中歸類于的所有患者均經病理學檢測，且均已經證實為乳腺癌；（3）術前所有患者均未接受任何治療；（4）研究中的所有患者均有完整的臨床及隨訪資料；（5）本次研究無論是病例納入還是研究方法均通過醫院倫理委員會批準，符合醫學研究的倫理要求。全面去除參考標準：（1）復發性乳腺癌；（2）術前接受了治療的患者。收集乳腺癌的組織122例，其對應的癌旁組織中隨機抽取29例。患者均為女性；年齡29～83歲，中位年齡48歲。

1.2 實驗方法

（1）實時熒光定量聚合酶鏈反應（RT-qPCR）。實驗材料：BCL 11A引物、GAPDH 引物都是購買于上海生工生物有限公司，RT-PCR逆轉錄試劑盒、Real time qPCR試劑盒均購自美國Promega公司，BCL 11A鼠抗人單克隆Ig抗體購自美國Abcam公司。

隨機選取所收集病例中的44例乳腺癌組織以及16例癌旁乳腺組織。查閱相關文獻獲得的引物序列[4]，由Promega公司GoTaq?提供qPCR Master Mix化學試劑盒，在檢測過程中嚴格按照試劑盒上的要求進行操作，對乳腺癌組織及癌旁乳腺組織做實時熒光定量PCR反應操作。最后可知3個復孔Ct數值相差均低于1個周期性循環，溶解處理曲線都表現出銳利對稱的單峰。

（2）免疫組織化學染色。收集病例中的乳腺癌的組織122例，癌旁乳腺組織29例所有展開免疫組織化學染色，操作步驟按說明書進行。

1.3 觀察指標

實時熒光定量聚合酶鏈反應中參照國外參考數據文獻，內參遺傳分子基因選擇管家遺傳分子基因GAPDH，ΔCt= CtGAPDH平均數值-CtBCL11A平均數值，ΔΔCt=ΔCt實驗組-ΔCt對照組。

陰性對照是PBS替代一抗，陽性對比分析是預實驗篩出的相互對應陽性生物組織，內對照是切片里的癌旁導管上皮。BCL 11A分子有機蛋白陽性生成物定位在乳腺癌細胞漿和細胞核，表現平均彌漫的棕黃色或者棕褐色的基因表達；癌旁生物組織中BCL 11A分子有機蛋白呈均勻分布的細胞膜棕黃色或者棕褐色的基因表達[5]，HER-2免疫生物組織化學染色結果判斷參考《乳腺癌HER2檢測指南（2019版）》[6]。

1.4 統計學處理

分析數據的軟件是SPSS 25.0，非正態分布所得計量資料的表示方法是[M（P25，P75）]，計數資料表示為n（%），用χ2檢驗，多個標準樣品比較用Kruskal-WallisH秩和檢測，P＜0.05是差異有統計學意義。

2 結果

2.1 BCL 11A mRNA在乳腺癌病例及癌旁中的遺傳表達

BCL 11A mRNA在4成分子分種類型的乳腺癌病例生物個體組織和癌旁中均有生物特征遺傳表達，參考表1和表2數據。

表1 BCL 11A mRNA在44例乳腺癌及16例正常乳腺組織中的相對表達量P值

表2 三陰性乳腺癌與其他4組組織的組間比較

2.2 BCL 11A mRNA與蛋白表達的關系

對44例乳腺癌16例癌旁生物組織展開免疫組織化學染色檢測，最終分析結果可知，參考表3數據，BCL 11A mRNA表達高者，其BCL 11A蛋白表達陽性超過陰性者，差異有統計學意義（P＜0.05）。

表3 44例乳腺癌和16例癌旁組織BCL 11A mRNA與蛋白表達的關系

2.3 BCL 11A蛋白在乳腺癌組織中的表達

BCL 11A分子蛋白在不同分子分型的乳腺癌里具有不同水平的生物表達，參考表4數據，在這其中結構三陰性乳腺癌中BCL 11A分子蛋白的基因表達（41/67）顯著超過管腔A型（3/17）、管腔B型（3/18）和Her-2過表達（4/20）型乳腺癌，差異有統計學意義（P＜0.05）。

表4 BCL 11A蛋白在122例乳腺癌組織中的表達

2.4 BCL 11A表達與臨床及病理學指標的關系

BCL 11A蛋白在生物組織學Ⅲ級組織中的基因表達要顯著超過Ⅰ級和Ⅱ級，其差異有統計學意義（χ2=5.876、12.541，P＜0.05）。有淋巴結轉移的表達水平更高，ER陰性組、PR陰性組、Her-2陰性組的基因表達水平均明顯超過陽性組，差異有統計學意義（P＜0.05）。而年紀和腫瘤大小和BCL 11A分子有機蛋白的基因表達水平并沒有明顯的關聯性。參考表6數據。

表6 122例乳腺癌組織中BCL 11A 免疫組化表達與臨床及病理學指標的關系（例）

3 討論

BCL 11A遺傳物質基因處于人類2P 16.1遺傳染色體，最開始從鼠類的白血病遺傳物質基因中脫離出來[7-8]，主要調控胎兒型血紅蛋白向成人血紅蛋白轉換的過程，在淋巴造血系統腫瘤的發生發展中起著關鍵作用[9]。近年研究[10]發現BCL11A在惡性實體腫瘤的發生發展中起著重要的作用，是一種轉錄因子輔助因子，可促進腫瘤的發生和發展，并與患者的不良預后相關[11-12]。

BCL 11A對乳腺干生物細胞及祖生物細胞的分化和成長發育發揮著關鍵的影響作用。在青春發展期，乳腺終端乳芽的帽生物細胞里具有BCL 11A的基因表達[13]。在成年乳腺成長發育階段，懷孕最開始階段其生物表達會明顯增高[14-15]。

乳腺癌參考依據其遺傳分子基因生物表達譜的不同能夠劃分為幾大類主要亞型，在這其中，最具備特點性的被叫做管腔A型、管腔B型、Her-2過表達型和三陰性型。上述亞型在遺傳分子基因生物表達方式、臨床特點、治療反應和預后上都會有不同。而三陰性乳腺癌，其具備特點性的生物組織學轉變，包含生物組織學等級較高、腫瘤界限較清、實性的組成構造、推擠性的邊緣和（或者）里心纖維組織化等。在這期間，三陰性乳腺癌的ER、PR、HER2都是表現出了陰性。

表5 BCL 11A蛋白在122例乳腺癌生物組織中的基因表達組間對比

本次應用的生物標本，是福爾馬林固定石蠟包埋（formalin fixed paraffin encapsulation，FFPE）生物標本，RT-qPCR檢測結果和參考數據文獻公開發布一致[16-17]。實驗最終分析結果可知，BCL 11A mRNA在三陰性乳腺癌生物組織中的基因表達顯著超過管腔A型、管腔B型和Her-2過表達型乳腺癌以及癌旁生物組織，說明其可能在推動結構三陰性乳腺癌的產生過程里參加了在這其中的某一個控制環節。Walid T. Khaled等[18]，探究分析了敲除BCL 11A遺傳物質基因的小鼠乳腺癌病例模種類型，發現BCL 11A遺傳物質基因的敲除對生物細胞活力具有直接性影響。

經過逐漸的實驗研究，Walid T.Khaled等[18]指出三陰性乳腺癌病例中，BCL 11A生物表達水平較高的機理可能是復制數目的畸變作用，經過對乳腺癌病例數據信息展開研究，3大約三分之一的三陰性乳腺癌都會有BCL 11A復制數目的增長，和剩余患者對比，其生存比例非常差，并且其復發和轉化比例也相比較高[19]。

本次深入研究分析確定了乳腺癌里BCL 11A遺傳分子基因和蛋白水平的基因傳達之后，還與此同時研究分析了BCL 11A蛋白和乳腺癌的臨床病理學參考指標的相互影響關系，結果提醒BCL 11A和乳腺癌的分化作用程度、侵襲轉化能力緊密相互聯系。三陰性乳腺癌為非常具有侵襲力的惡性腫瘤，預后差、生存比例低并且缺少展開高效鑒別的生物標記物[20]。BCL 11A會產生轉化。BCL11A能夠明顯向上自動調整β-catenin，從而將Wnt/β-catenin信號通路激活，從而促進腫瘤的發生和發展，引起乳腺癌的侵襲與轉移，在腫瘤形成中發揮重要的作用[21-22]。

綜上所述，在三陰性乳腺癌病例中，轉錄影響因子BCL 11A的遺傳分子基因遺傳表達水平非常高，作為一個十分關鍵的調節控制影響因子，BCL 11A可能逐漸發展成為結構三陰性乳腺癌靶向治療的全新的遺傳分子基因，遏制BCL 11A遺傳分子基因有可能逐漸發展成為新治療方向，為未來乳腺癌免疫治療標準制定提供了借鑒內容，對完善乳腺癌患者的預后有深遠的影響作用。