川楝子亞急性毒性實(shí)驗(yàn)研究*

烏日漢，畢力格，烏日罕，阿如娜，麗 麗，白梅榮

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

川楝子蒙藥名為巴茹日，性涼，具有清巴達(dá)干希拉、燥熱性希拉烏素、殺蟲止痛等功效。載于《認(rèn)藥白晶鑒》，《無誤蒙藥鑒》附注為“藏楝”。《觀者之喜》：稱其“對巴達(dá)干希拉合并癥、熱性希拉烏素、皮膚瘙癢、新陳濁熱等癥有良效”[1]。川楝子有小毒，故使臨床應(yīng)用受限。研究表明，川楝子炒制和乙醇提取物可產(chǎn)生肝腎毒性，短期內(nèi)大劑量使用或長期連續(xù)使用容易蓄積中毒，肝毒性機(jī)制與自由基、炎癥因子和脂肪酸的代謝輪廓有關(guān)[2-6]。目前鮮有川楝子生藥對肝腎亞急性毒性的研究報(bào)道。

亞急性毒性為染毒期不長，或接觸毒物時間數(shù)十天對機(jī)體的重要器官功能或結(jié)構(gòu)引起的損害，估量發(fā)生毒性影響的劑量[7]。肝臟、腎臟是體內(nèi)藥物代謝和排泄的重要場所，也是藥物毒性反應(yīng)的易感靶器官。由藥物所致的肝腎損傷和急慢性肝腎功能衰竭日益加劇[8]。本研究以生川楝子為示例藥物，以大鼠為研究對象，采用亞急性毒性評價川楝子的的毒性、劑量及對肝、腎組織的損傷程度，闡明川楝子的肝、腎毒性作用，為其毒性的深入研究提供工作基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 動物 SD雄性大鼠，體重為(200±20)g，由遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司提供(SCXK(遼)2015-0001)。飼養(yǎng)條件：自由進(jìn)食飲水，光照12 h，室溫24 h維持23±1 ℃。

1.1.2 藥品與試劑 川楝子由內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院蒙藥制劑室提供；血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總蛋白(TP)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(CHO)、尿素氮(UREA)、肌酐(CREP)試劑盒均購自上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司。

1.1.3 儀器 羅氏全自動生化分析儀(cobas c 311，上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司)；移液器(Eppendorf N13462C，德國Eppendorf公司)；小型離心機(jī)(Eppendorf5430R，德國Eppendorf公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 川楝子溶液的制備 取川楝子藥材，進(jìn)行粗粉后，過80目篩，備用。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動物分組及樣本收集 取SD大鼠32只，按體重隨機(jī)分為正常組、川楝子高(2.5714 g/kg)、中(1.2857 g/kg)、低劑量組(0.6429 g/kg)，每組8只。給藥前禁食12 h，自由飲水。除正常組外給藥組灌胃相應(yīng)的川楝子溶液，每日灌胃1次，連續(xù)至21 d。末次給藥24 h后，禁食不禁水的條件下，異氟烷麻醉各組動物，從腹主動脈取血，3500 r/min離心10 min分離血清，測肝、腎功能指標(biāo)。采集肝、腎組織固定于10%甲醛，對其進(jìn)行常規(guī)脫水、浸蠟、石蠟包埋、切片厚度4 um、進(jìn)水、蘇木精-伊紅(HE)染色，中性樹膠封片，光鏡下觀察各組大鼠肝腎病理變化。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 22.0進(jìn)行分析。采用t檢驗(yàn)、單因素方差分析分別進(jìn)行組間比較。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般行為學(xué)表現(xiàn) 川楝子高劑量組大鼠自發(fā)行為減少、行動緩慢、毛發(fā)聳立、尿量多且發(fā)黃、個別死亡等；中劑量組體重?zé)o明顯變化、行動緩慢、毛發(fā)聳立、飲食排便較正常、無死亡現(xiàn)象；低劑量組未出現(xiàn)明顯反應(yīng)。

2.2 肝、腎生化指標(biāo)檢測結(jié)果 與正常組比較，川楝子高劑量組ALT、AST顯著升高(P<0.05)，低劑量組AST顯著下降(P<0.01)；與正常組比較，川楝子高、中、低劑量組CHO、TP顯著下降(P<0.05)；川楝子中劑量組TG顯著升高(P<0.05)，CREA下降(P<0.05)。提示，川楝子對肝臟具有一定的毒性。血清TG升高，CHO、TP降低，可能是營養(yǎng)和吸收能力減弱，也提示肝功能受損，腎功能紊亂。結(jié)果見表1，圖1。

表1 川楝子對肝功能生化指標(biāo)的影響

圖1 肝、腎功能生化指標(biāo)

2.3 肝腎組織臟器指數(shù)結(jié)果 采集大鼠相應(yīng)臟器，進(jìn)行精密稱定，按臟器指數(shù)(mg/g)計(jì)算公式：臟器重量(mg)/體重(g)，進(jìn)行計(jì)算，與正常組比較，川楝子高、中、低劑量組肝臟指數(shù)明顯增加(P<0.01)，對腎臟指數(shù)無影響。結(jié)果見表2。

表2 川楝子對SD大鼠肝腎組織臟器指數(shù)的影響

2.4 病理檢測結(jié)果 肝組織病理檢測結(jié)果顯示，正常組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，中央為中央靜脈，肝細(xì)胞索和肝血竇大致呈放射狀排列，肝細(xì)胞圓潤、飽滿，肝板排列整齊。川楝子高劑量組肝細(xì)胞明顯水脹，可見大小不一的水泡；中劑量組個別肝細(xì)胞水脹，胞質(zhì)疏松淡染；低劑量組未見明顯異常(見圖2)。

圖2 肝臟HE圖(HE×200)

腎組織病理檢測結(jié)果顯示，正常組腎小球毛細(xì)血管較清晰，腎小管排列緊密，上皮細(xì)胞形態(tài)正常。川楝子高劑量組腎小管上皮細(xì)胞有明顯水腫；中劑量組部分腎小管上皮細(xì)胞水腫；低劑量組未見明顯異常。見圖3。

圖3 腎臟HE圖(HE×200)

3 結(jié)論

川楝子2.5714 g/kg劑量時具有明顯肝毒性；在1.2857 g/kg劑量時未見明顯的肝臟毒性，對腎功能有一定影響；在0.6429 g/kg劑量對肝腎未見明顯異常。

4 討論

川楝子是蒙醫(yī)臨床療效顯著的清巴達(dá)干協(xié)日，燥熱性協(xié)日烏素，新濁熱等癥的常用蒙藥之一。藥物的毒性成分即是發(fā)揮藥效的主要成分，川楝子含小毒因而極大的限制其藥用價值。

川楝子生藥對肝腎亞急性毒性的研究報(bào)道較少，對肝、腎組織的損傷程度及肝、腎中毒劑量及毒性作用機(jī)制尚不完全清楚[9]。

血清AST、ALT是評價肝功能損傷程度的關(guān)鍵指標(biāo)[10]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常組比較，川楝子高、中劑量組ALT和AST升高，低劑量組AST和AST水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。川楝子高劑量組能明顯增加ALT、AST活性，說明川楝子的毒性已造成大鼠肝臟損傷和功能障礙。血清UREA、CREP是腎功能受損敏感指標(biāo)。與正常組比較，川楝子高劑量組UREA呈升高，中劑量組CREP下降(P<0.05)。本研究表明，川楝子可引起肝功能病理損害，腎功能未出現(xiàn)明顯的改變。提示，在不同等條件下對川楝子毒性肝臟敏感性要高于腎臟。

綜上，川楝子亞急性暴露可引起大鼠不同程度的肝臟損害，而腎功能指標(biāo)未出現(xiàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的顯著改變，表明在2.5714 g/kg，1.2857 g/kg劑量時川楝子可能會觸發(fā)大鼠潛在的腎毒性反應(yīng)，可能與其給藥劑量緊密相關(guān)。但其確切的作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。