貴州地區(qū)奶牛弓形蟲(chóng)病血清學(xué)調(diào)查與分析

張 海 ， 楊 源 ， 劉 艷 ， 徐春志 ， 袁翠霞 ， 藺俐仲 ， 鄧珊珊 ，景書(shū)灝 ， 李照偉 ， 楊 峰

(1.貴陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 ， 貴州 貴陽(yáng) 550081 ； 2. 貴陽(yáng)市鄉(xiāng)村振興服務(wù)中心 ， 貴州 貴陽(yáng) 550081 ；3.清鎮(zhèn)市養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展服務(wù)中心 ， 貴州 貴陽(yáng) 551400 ； 4.貴州省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 ， 貴州 貴陽(yáng) 550081)

弓形蟲(chóng)病(Toxoplasmasis)是由剛地弓形蟲(chóng)(Toxoplasmagondii)引起的一種人獸共患寄生蟲(chóng)病[1]，貓、犬、牛、羊、豬等動(dòng)物均可感染。據(jù)統(tǒng)計(jì)，弓形蟲(chóng)已經(jīng)在全球范圍內(nèi)的200多種動(dòng)物體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)。奶牛感染主要途徑有弓形蟲(chóng)感染貓進(jìn)入奶牛場(chǎng)排出卵囊污染飼料和飲水，奶牛感染弓形蟲(chóng)后的流產(chǎn)胎衣及羊水等污染圈舍、草料等[2]。最早在1908年首先從剛地梳趾鼠的單核細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)并命名為剛地弓形體[3]。我國(guó)研究人員于恩庶1955年首次從兔和貓的體內(nèi)分離到弓形蟲(chóng)，后來(lái)又從豬和豚鼠體內(nèi)分離到蟲(chóng)體[4]。我國(guó)人的弓形蟲(chóng)感染率介于0.1%～34.0%，動(dòng)物弓形蟲(chóng)感染率介于5%～15%[5]，嚴(yán)重危害人和動(dòng)物健康，公共衛(wèi)生學(xué)危害較大。近年來(lái)，貴州省大力發(fā)展生態(tài)畜牧養(yǎng)殖和奶業(yè)振興，省內(nèi)固有的自繁自養(yǎng)模式顯然已遠(yuǎn)不能滿足奶牛業(yè)發(fā)展的需求，需要從國(guó)外和省外大量引進(jìn)奶牛。貴州省的奶牛養(yǎng)殖主要集中在貴陽(yáng)市、遵義市、黔南州和黔東南州，其中貴陽(yáng)市的奶牛養(yǎng)殖量占比為全省的90%左右。為了了解貴州省奶牛弓形蟲(chóng)病感染情況，本試驗(yàn)于2019—2020年采集貴州省貴陽(yáng)、黔南、遵義和黔東南4個(gè)市(州)20個(gè)(次)奶牛場(chǎng)2 469份奶牛血清樣本，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)奶牛血清弓形蟲(chóng)抗體，以期為貴州地區(qū)奶牛弓形蟲(chóng)病的防控提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 血清樣本 2019—2020年共采集貴州地區(qū)(貴陽(yáng)、遵義、黔南、黔東南)20個(gè)(次)奶牛場(chǎng)2 469份奶牛血清樣本(2019年1 439份，2020年1 030份)。通過(guò)尾根靜脈采血約3 mL，靜置30 min，4 ℃ 4 000 r/min離心5 min，吸取血清置于1.5 mL無(wú)菌離心管中，標(biāo)記血清來(lái)源的地區(qū)、養(yǎng)殖場(chǎng)規(guī)模、奶牛年齡、生產(chǎn)階段等信息，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 血清檢測(cè) 取出血清，室溫放置解凍，待血清恢復(fù)至常溫后，按照弓形蟲(chóng)間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒(美國(guó)愛(ài)德士生物科技公司)說(shuō)明書(shū)操作，在450 nm的吸光值下測(cè)量OD值，參照試劑盒說(shuō)明書(shū)公式計(jì)算結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 不同地區(qū)感染情況 對(duì)2019—2020年間采自貴陽(yáng)、遵義、黔南、黔東南地區(qū)共20個(gè)(次)奶牛場(chǎng)的2 469份血清進(jìn)行弓形蟲(chóng)抗體檢測(cè)，結(jié)果如表1所示，貴州省貴陽(yáng)、遵義、黔南、黔東南地區(qū)均存在不同程度的感染，總體陽(yáng)性率為10.09%(249/2 469)，其中貴陽(yáng)地區(qū)陽(yáng)性率為13.38%(189/1 413)，遵義地區(qū)陽(yáng)性率為9.00%(18/200)，黔南地區(qū)陽(yáng)性率為2.88%(12/416)，黔東南地區(qū)陽(yáng)性率為6.82%(30/440)。貴陽(yáng)地區(qū)陽(yáng)性率最高，黔南地區(qū)陽(yáng)性率最低。

表1 貴州地區(qū)奶牛弓形蟲(chóng)血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果Table 1 Serological test results of Toxoplasma gondii in dairy cows in Guizhou area

2.2 不同年齡階段感染情況 對(duì)20個(gè)(次)奶牛場(chǎng)采集的血清樣本按照年齡進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)，奶牛年齡從幾月齡到6歲左右。奶牛弓形蟲(chóng)抗體檢測(cè)結(jié)果如表2所示，1歲以內(nèi)血清樣本未檢測(cè)到血清抗體陽(yáng)性樣本，5～6歲樣本抗體陽(yáng)性率最高，為19.32%(51/264)；其余年齡段陽(yáng)性率分別為：1～2歲7.35%(20/272)，2～3歲8.72%(45/516)，3～4歲10.55%(73/692)，4～5歲10.77%(60/557)。結(jié)果表明奶牛弓形蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率與奶牛年齡成正比。

表2 奶牛不同年齡弓形蟲(chóng)血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果Table 2 Serological test results of Toxoplasma gondii in dairy cows of different ages

2.3 不同生產(chǎn)階段感染情況 按照奶牛不同的生產(chǎn)階段進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)，結(jié)果如表3所示，奶牛的育成期沒(méi)有檢測(cè)到弓形蟲(chóng)血清抗體陽(yáng)性樣本，其余各生產(chǎn)階段均呈現(xiàn)不同程度的感染，其中妊娠泌乳期的血清抗體陽(yáng)性率最高，為22.84%(45/197)，妊娠干奶期次之，陽(yáng)性率為17.70%(20/113)，其次是空懷泌乳期，陽(yáng)性率為11.57%(73/631)。

表3 奶牛不同生產(chǎn)階段弓形蟲(chóng)血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果Table 3 Serological test results of Toxoplasma gondii in dairy cows at different production stages

2.4 不同月份感染情況 按照樣本采集時(shí)間進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)，采樣時(shí)間主要集中在5～12月份，結(jié)果如表4所示，11月份樣本陽(yáng)性率最高，為16.67%(30/180)，5月份樣本陽(yáng)性率最低，為6.44%(15/233)；其余月份分別為：6月份8.40%(21/250)，7月份6.67%(30/450)，9月份8.19%(56/684)，10月份14.00%(42/300)，12月份14.78%(55/372)。結(jié)果表明樣本抗體陽(yáng)性率呈現(xiàn)出冬季陽(yáng)性率最高、秋季次之、夏季最低。

表4 不同月份弓形蟲(chóng)血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果Table 4 Serological test results of Toxoplasma gondii in different months

3 討論

本試驗(yàn)對(duì)2019—2020年在貴州省貴陽(yáng)、黔南、遵義和黔東南4個(gè)市(州)20個(gè)(次)奶牛場(chǎng)采集的2 469份奶牛血清樣本，采用ELISA方法進(jìn)行奶牛弓形蟲(chóng)血清學(xué)調(diào)查。共檢測(cè)出弓形蟲(chóng)抗體陽(yáng)性樣本249份，弓形蟲(chóng)感染抗體陽(yáng)性率為10.09%。按照不同地區(qū)、不同年齡階段、不同生產(chǎn)階段和不同樣本采集月份統(tǒng)計(jì)，貴陽(yáng)地區(qū)弓形蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率最高(13.38%)，5～6歲年齡階段樣本弓形蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率最高(19.32%)，妊娠泌乳期血清抗體陽(yáng)性率最高(22.84%)，11月份采集的樣本抗體陽(yáng)性率最高(16.67%)。

弓形蟲(chóng)是人和多種動(dòng)物易感的人獸共患傳染病，對(duì)人和動(dòng)物危害較大，我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部將其列為二類動(dòng)物疫病。通過(guò)血清學(xué)調(diào)查或病原學(xué)分離發(fā)現(xiàn)，自然感染弓形蟲(chóng)的動(dòng)物有豬、黃牛、水牛、馬、山羊、兔、綿羊、貓、狗等[4]。蔣業(yè)慧等[6]于2013年5—11月對(duì)新疆北疆地區(qū)11個(gè)規(guī)模化奶牛場(chǎng)采用間接血凝試驗(yàn)(IHA)方法進(jìn)行奶牛弓形蟲(chóng)抗體調(diào)查，陽(yáng)性率為15.30%。曹文博等[7]對(duì)河北省部分地區(qū)規(guī)模化奶牛場(chǎng)采用間接血凝和ELISA方法進(jìn)行奶牛弓形蟲(chóng)抗體調(diào)查，陽(yáng)性率為3.5%。陳益等[8]對(duì)河南省部分地區(qū)奶牛場(chǎng)采用IHA方法進(jìn)行奶牛弓形蟲(chóng)抗體調(diào)查，陽(yáng)性率為12.05%。Zhou等[9]對(duì)廣州奶牛場(chǎng)弓形蟲(chóng)抗體進(jìn)行調(diào)查，陽(yáng)性率為5.7%。Qiu等[10]采用IHA方法對(duì)黑龍江部分奶牛場(chǎng)進(jìn)行弓形蟲(chóng)抗體調(diào)查，陽(yáng)性率為2.3%。葉勇剛等[11]對(duì)四川地區(qū)部分奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行弓形蟲(chóng)調(diào)查，總陽(yáng)性率為4.59%。董保豫等[12]采用IHA方法進(jìn)行的調(diào)查結(jié)果顯示，貴州黔南奶牛弓形蟲(chóng)感染抗體陽(yáng)性率為26.92%。上述調(diào)查結(jié)果表明各地的奶牛場(chǎng)都存在不同程度的弓形蟲(chóng)感染。

本試驗(yàn)對(duì)檢測(cè)結(jié)果按不同地區(qū)分類統(tǒng)計(jì)，貴陽(yáng)地區(qū)陽(yáng)性率最高，為13.38%(189/1 413)，黔南地區(qū)陽(yáng)性率最低，為2.88%(12/416)。貴陽(yáng)市海拔高度在1 100 m左右，屬于亞熱帶濕潤(rùn)溫和型氣候，年平均氣溫為15.3 ℃，年平均相對(duì)濕度為77%，全年濕度比較高，且近年來(lái)貴陽(yáng)市部分奶牛場(chǎng)奶牛群存在頻繁的調(diào)運(yùn)，導(dǎo)致牛群弓形蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率較高。按照不同奶牛年齡統(tǒng)計(jì)，1歲以內(nèi)未檢測(cè)到陽(yáng)性樣本，5～6歲抗體陽(yáng)性率最高，為19.32%(51/264)，可能與該年齡階段奶牛處于高產(chǎn)階段，抵抗力降低有關(guān)。按奶牛不同生產(chǎn)階段統(tǒng)計(jì)，妊娠泌乳期血清抗體陽(yáng)性率最高，為22.84%(45/197)，可能與泌乳期間奶牛泌乳負(fù)荷較大，牛只抵抗力下降有關(guān)。按不同采樣月份統(tǒng)計(jì)，冬季奶牛弓形蟲(chóng)病感染最嚴(yán)重，可能與冬季溫度下降造成牛群應(yīng)激，抵抗力下降有關(guān)。因此，奶牛場(chǎng)需要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，冬春季節(jié)注意保暖，減少應(yīng)激源，保持干凈的飼養(yǎng)環(huán)境，及時(shí)開(kāi)展消毒工作。做好口蹄疫等強(qiáng)制免疫疫病的基礎(chǔ)免疫工作，根據(jù)牛病毒性腹瀉、牛鼻氣管炎等流行情況開(kāi)展疫苗免疫。消滅奶牛場(chǎng)鼠類，禁止飼養(yǎng)貓。定期開(kāi)展牛群檢疫工作，及時(shí)發(fā)現(xiàn)病牛并進(jìn)行隔離治療，環(huán)境徹底消毒，對(duì)病死牛和流產(chǎn)胎盤(pán)等進(jìn)行無(wú)害化處理。同時(shí)注意飼養(yǎng)人員弓形蟲(chóng)的感染情況。