牛子宮內膜炎病原菌鑒定與藥敏試驗

文│金元山（青海省海東工業園區互助綠色產業園管理委員會）

牛子宮內膜炎是子宮黏膜受到損傷引發的一種生殖障礙疾病，該病主要是繁殖母牛群易發，是引起母牛不孕不育的主要疾病之一。牛子宮內膜炎可以分為急性和慢性，急性的誘發因素主要是在母牛產后病原微生物入侵，大量繁殖產生毒素使得子宮出現炎癥病變；慢性病因主要是因為急性子宮內膜炎治療不及時或藥物使用不當導致牛子宮內還存在大量病原菌。近幾年，人們在治療子宮內膜炎時盲目選擇藥物，導致抗生素的耐藥情況越發頻繁，同時，藥物殘留問題也越來越嚴重，嚴重危害人類的食品安全，而且不同地區不同環境下的子宮內膜炎的致病菌有所不同。因此，應對牛的致病菌進行分離鑒定，同時選用合理的抗生素進行治療顯得尤為重要。本研究選用某規?；龌加凶訉m內膜炎的牛進行病原菌分離，同時對分離的病原菌進行藥敏試驗，旨在為養殖戶提供治療的參考方法，同時為臨床合理使用抗生素提供試驗參考。

一、試驗材料與方法

1.試驗材料。試驗牛選自某規?；膛龌甲訉m內膜炎的15頭奶牛；普通營養肉湯培養基、FungiMedium真菌培養基、MH血瓊脂基礎培養基、麥康凱瓊脂培養基購于北京陸橋；營養瓊脂、伊紅美藍瓊脂購于北京奧博星；SS瓊脂購于青島海博；藥敏紙片紅霉素、克林霉素、米諾環素、諾氟沙星、頭孢吡肟、復方新諾明、克拉霉素、頭孢他啶、氨芐西林購于自杭州天和微生物試劑有限公司。

2.試驗方法。

（1）病料采集。選用臨床上已確診為患有子宮內膜炎的奶牛，利用一次性輸精管，經過75%酒精消毒處理后采用直腸把握法將輸精管插入患病牛子宮，然后在輸精管的另外一側接上注射器，通過注射器抽吸子宮內膜分泌物，最后把分泌物放入無菌的5毫升離心管中，密封保存待用，整個過程要做好標記，并保證無菌操作，避免交叉污染。

（2）病原菌分離培養和純化。試驗所用的培養基按照配置說明書事先制備好；在生物安全柜按照無菌操作要求取出100微升子宮內膜液，置于普通營養培養基內，用無菌棉簽涂抹均勻，靜置3分鐘后置于37℃恒溫培養箱中培養24小時后觀察記錄菌落形態和生長情況；之后挑取菌落形態不一致的進行染色涂片鏡檢，根據鏡檢特征標記菌株號，并進行純化處理，純化后再接種于營養肉湯中進行染色鏡檢，并置于冰箱冷藏保存。

（3）分離的病原菌鑒定。對（2）步驟分離的純化菌種進行革蘭氏染色，并分別接種于FungiMedium真菌培養基、MH血瓊脂基礎培養基、麥康凱瓊脂培養基、伊紅美藍瓊脂、SS瓊脂培養基上進行培養，在此基礎上參照高玉梅等所述的方法進行發酵型細菌、非發酵型細菌及各科細菌的分類，并按照各科、屬細菌、真菌的生化鑒定編碼冊得出鑒定結果。

（4）藥敏試驗。參照《動物及其制品中細菌耐藥性的測定—紙片擴散法》，以其為標準，選擇上述購買的藥敏片進行藥敏試驗，試驗方法參照吳文德等所述的方法進行。

二、結果

1.病原菌鑒定結果。對15頭患病奶牛子宮內容物的病原菌進行分離鑒定，共分離到35株菌株，13種病原菌，具體的菌株明細和檢出率詳見表1。從表上可以看出，葡萄球菌屬分離到的菌株數最多，共17株，占比48.6%，其中木糖葡萄球菌占比17.1%，表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌占比為14.3%，金黃色葡萄球菌為2.9%；其次是惡臭假單胞菌和黃桿菌，占比為11.4%；所有分離菌株中沒有發現真菌。

表1 分離菌株明細及檢出率

2.藥敏試驗結果。由表2可知，葡萄球菌屬對紅霉素、米諾環素、克林霉素、諾氟沙星、頭孢吡肟高度敏感，抑菌圈直徑＞20毫米；對復方新諾明有耐藥性，抑菌圈＜10毫米；奈瑟氏菌、非發酵菌和腸桿菌金黃奈瑟氏菌、惡臭假單胞菌、類產堿假單胞菌、醋酸鈣不動桿菌氏菌、卡他布蘭漢氏菌、大腸桿菌對頭孢吡肟和頭孢他啶高度敏感，抑菌圈直徑＞20毫米，對氨芐西林、氧氟沙星產生了不同程度的耐藥性，抑菌圈＜10毫米。

表2 藥敏試驗結果 毫米

三、結論

從本研究可以發現，牛子宮內膜炎是由多種病原菌引起的，屬于混合感染；通過對比發現，不同牛群分離的致病菌不同，如高玉梅等在南寧地區105頭患病奶牛中共分離出200個菌株，35種病原菌，本研究共分離35株菌株，13種病原菌，且分離的菌株對藥物的敏感度也不同，其原因和選取的患病牛頭數不同有關，試驗牛頭數越多病原菌數量越多，但也直接說明了不同牛場子宮內膜炎感染的菌株不一樣，和牛場的飼養管理和環境衛生有關；至于具體哪種菌是牛子宮內膜炎的致病菌，還有待進一步驗證。藥敏試驗結果表明，分離到的葡萄球菌對紅霉素、克林霉素、米諾環素、諾氟沙星、頭孢吡肟高度敏感；奈瑟氏菌、非發酵菌和腸桿菌金黃奈瑟氏菌、惡臭假單胞菌、類產堿假單胞菌、醋酸鈣不動桿菌氏菌、卡他布蘭漢氏菌、大腸桿菌對頭孢吡肟和頭孢他啶高度敏感，通過以上分析以頭孢吡肟作為該奶牛場患病牛的治療藥物首選。

綜上所述，不同地區的牛子宮內膜炎致病菌不同，有必要進行致病菌分離，利用藥敏試驗選出適宜的抗生素進行治療，這樣可防止抗生素的濫用，同時也能提高養殖戶的經濟效益。