膽木木質部中一個新的酚酸苷

楊 婷，黃圣卓，陳惠琴，蔡彩虹，王 婷，蓋翠娟，梅文莉，戴好富,*

1黑龍江八一農墾大學生命科學技術學院，大慶 163319；2中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所 海南省黎藥資源天然產物研究與利用重點實驗室；3中國熱帶農業科學院海南熱帶農業資源研究院，海口 571101

膽木Naucleaofficinalis(Pierre ex Pitard Merr.et Chun)又名烏檀、山熊膽、熊膽木等，為茜草科(Rubiaceae)烏檀屬(NaucleaL.)植物，主產海南，并零星分布于廣東和廣西等地，是我國僅有的一種原生烏檀屬植物[1]。膽木為海南特色黎藥，是海南省重點研究傳統黎族藥用植物之一，其味苦性寒，具有清熱解毒，消腫止痛等功效，黎族人民將其廣泛用于感冒和外用抗菌消毒等方面。現在臨床上常用于感冒發熱，急性扁桃體炎、咽喉炎、支氣管炎和肺炎等疾病的治療[2]。其主要成分為生物堿、酚酸類、五環三萜類和黃酮類化合物等[3]。現代藥理實驗研究表明，膽木具有抗炎[4]、抗細胞增殖[5]和抑制胃酸分泌[6]等作用。目前對膽木的研究主要集中在生物堿部分，而對其非生物堿部分，特別是臨床應用的膽木制劑中含量較多的大極性化合物(正丁醇提取物)及其生物活性關注較少。本研究從膽木正丁醇提取物中分離鑒定化合物，以酚酸類化合物為主，前人報道該類成分對抗腫瘤與降血糖有較好的功效[7-8]。因此，為了進一步探究膽木藥用部位木質部中正丁醇提取物的化學成分及活性，對其進行了化學成分的分離與結構鑒定，并進行了α-葡萄糖苷酶抑制活性與細胞毒活性的研究，旨在為該植物開發利用與發現新用途提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

Agilent 1260高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；Bruker Amazon SL質譜儀(德國Bruker公司)；Bruker AV-500超導核磁共振波譜儀(德國Bruker公司)，TMS為內標；Agilent Infinity 1260 Ⅱ半制備高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；旋轉蒸發儀(德國Heidolph Labo-rota公司)；分析型色譜柱(C18和Cholester，250 mm × 4.6 mm，5 μm)和半制備色譜柱(C18和Cholester，250 mm × 10.0 mm，5 μm)(日本COSMOSIL公司)；ELX-800 酶標儀(美國Bio-Tek公司)；α-葡萄糖苷酶、阿卡波糖、4-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(上海源葉生物科技公司)；人肺癌細胞株A549、宮頸癌細胞株HeLa和慢性髓原白血病細胞株K562(中國科學院上海生命科學研究院細胞庫)；RP-18填料(20 μm～45 μm)(日本Fuji Silysia Chemical Ltd公司)；Sephadex LH-20(美國GE公司)；柱層析硅膠 G(200～300目和60～80目)及柱層析硅膠 H(青島海洋化工廠)；檢測用GF254薄層色譜板(青島海洋化工廠)，展開劑展開后，254 nm紫外光下觀察后，10% 硫酸乙醇顯色劑噴霧，烘烤顯色。

膽木于2018年10月采自海南省澄邁縣，經中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所黃圣卓副研究員鑒定其為茜草科(Rubiaceae)烏檀屬植物烏檀Naucleaofficinalis(Pierre ex Pitard Merr.et Chun)，標本(HUANG0002018)保存于中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所。

1.2 實驗方法

1.2.1 提取分離

干燥的膽木木質部(290.0 kg)晾干粉碎后，用70% 乙醇提取后得到粗浸膏13.9 kg，提取物分散于水中成懸濁液，用50%鹽酸調節pH至2.0，用石油醚萃取，再用1 mol/L NaOH調節pH至10.0后用二氯甲烷萃取，接著用50% 鹽酸調節pH至7.0，再分別用乙酸乙酯和正丁醇萃取，正丁醇萃取液濃縮回收正丁醇，得到正丁醇組分268.0 g。正丁醇組分經硅膠柱色譜，以二氯甲烷∶甲醇(50∶1→1∶1，V/V)、丙酮梯度洗脫，得到18個流分(Fr.1～Fr.18)。Fr.3(1.3 g)經過重結晶得到化合物14(6.6 mg)。

Fr.4(9.0 g)經ODS柱色譜以甲醇∶水(2∶8→1∶0，V/V)梯度洗脫得到19個流分(Fr.4.1～Fr.4.19)。Fr.4.8部分經過重結晶得到化合物9(3.3 mg)。Fr.4.12(223.6 mg)經硅膠減壓柱色譜以二氯甲烷∶甲醇(20∶0.7→1∶1，V/V)梯度洗脫得到4個流分(Fr.4.12.1～Fr.4.12.4)。Fr.4.12.1(159.2 mg)使用半制備高效液相色譜(Cholester柱，乙腈∶水 = 24∶76恒梯度洗脫；流速：4 mL/min；檢測波長：220/254 nm)，得到化合物8(8.1 mg，tR= 15.0 min)。

Fr.12(13.6 g)經ODS柱色譜以甲醇∶水(2∶8→1∶0，V/V)梯度洗脫得到15個流分(Fr.12.1～Fr.12.15)。其中流分Fr.12.2(1.2 g)經減壓柱色譜以二氯甲烷∶甲醇(15∶1→1∶1，V/V)梯度洗脫得到3個流分(Fr.12.2.1～Fr.12.2.3)。Fr.12.2.2(255.5 mg)使用半制備高效液相色譜(C18柱，甲醇∶水 = 25∶75恒梯度洗脫；流速：4 mL/min；檢測波長：210 nm)，得到化合物11(11.7 mg，tR= 16.0 min)和化合物12(7.8 mg，tR= 20.0 min)。Fr.12.2.1(29.8 mg)使用半制備高效液相色譜(C18柱，甲醇∶水 = 25∶75恒梯度洗脫；流速：4 mL/min；檢測波長：220/260 nm)，得到化合物13(8.1 mg，tR= 18.0 min)。Fr.12.3(623.7 mg)經硅膠減壓柱色譜以二氯甲烷∶甲醇(15∶0.18→1∶1，V/V)梯度洗脫得到6個流分(Fr.12.3.1～Fr.12.3.6)。Fr.12.3.2(104.3 mg)使用半制備高效液相色譜(Cholester柱，乙腈∶水 = 10∶90恒梯度洗脫；流速：4 mL/min；檢測波長：220/254 nm)，得到兩個流分(Fr.12.3.2.1-Fr.12.3.2.2)。Fr.12.3.2.1經 Sephadex LH-20 凝膠柱色譜(甲醇)分離得到化合物15(3.5 mg)。Fr.12.3.2.2經 Sephadex LH-20 凝膠柱色譜(甲醇)分離得到化合物6(42.9 mg)。Fr.12.3.3(623.7 mg)經 Sephadex LH-20 凝膠柱色譜(甲醇)分離得到化合物7(3.7 mg)。Fr.12.6(1.2 g)經硅膠減壓柱色譜以二氯甲烷∶甲醇(15∶1→1∶1，V/V)梯度洗脫得到9個流分(Fr.12.6.1～Fr.12.6.9)。Fr.12.6.4(78.0 mg)使用半制備高效液相色譜(C18柱，甲醇∶水 = 23∶77恒梯度洗脫；流速：4 mL/min；檢測波長：220 nm)，得到化合物4(13.5 mg，tR= 13.0 min)、化合物2(12.3 mg，tR= 17.0 min)和化合物3(4.9 mg，tR= 25.0 min)。Fr.12.6.5(65.0 mg)使用半制備高效液相色譜(Cholester柱，乙腈∶水 = 28∶72恒梯度洗脫；流速：4 mL/min；檢測波長：220/254 nm)，得到化合物1(5.5 mg，tR= 22.0 min)。Fr.12.13(2.4 g)經減壓柱色譜以石油醚∶二氯甲烷∶甲醇(1∶2∶0.2→0.5∶1∶1，V/V)梯度洗脫得到6個流分(Fr.12.13.1～Fr.12.13.6)，Fr.12.13.3結晶純化得到化合物10(50.0 mg)。Fr.12.13.4(45.0 mg)使用半制備高效液相色譜(C18柱，甲醇∶水 = 20∶80恒梯度洗脫；流速：4 mL/min；檢測波長：220/260 nm)，得到化合物5(3.7 mg，tR= 22.0 min)。

1.2.2 生物活性測試

采用pNPG法[9]和MTT法[10]分別測定化合物1～15的α-葡萄糖苷酶抑制活性和細胞毒活性。

2 結果與分析

本實驗從膽木中共分離得到15個化合物，其中化合物1為新化合物，并命名為膽木酚苷 A(naucleaphenol A)。其結構根據HR-ESI-MS、1D和2D核磁共振結合參考文獻對照結構相似的已知化合物鑒定，確定新穎性在于一個少見的(2E,6R)-8-羥基-2,6-二甲基-2-辛酸(含2個異戊二酸單位)取代在葡萄糖C-6位上。其余已知化合物結構均通過核磁共振和質譜數據對照參考文獻鑒定，化合物結構見圖1。

圖1 化合物1～15結構Fig.1 Structures of compounds 1-15

2.1 結構鑒定

表1 化合物1的1H(500 MHz)和 13C NMR(125 MHz)核磁數據(CD3OD)

取而代之，該推斷通過HMBC譜中關鍵信號：4.53(1H，dd，J= 11.8，2.2 Hz，H-6′α)，4.20(1H，dd，J= 11.8，7.5 Hz，H-6′β)與169.4 s(C-1′′)的相關，及高分辨質譜確定分子式C24H34O11驗證了該酸連接于糖的6′位與之成酯。其余關鍵信號均通過HMBC譜相關信號(見圖2)驗證，從而確定了其結構，最終鑒定化合物為膽木酚苷A(naucleaphenol A)。化合物1的詳細結構鑒定數據原始圖譜可從本刊官網免費下載(www.trcw.ac.cn)。

化合物2白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z481 [M + H]+，分子式為C22H24O12。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.60(1H，d，J= 2.0 Hz，H-2)，7.58(1H，dd，J= 8.3，2.0 Hz，H-6″)，7.53(1H，d，J= 2.0 Hz，H-2″)，7.43(1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-6)，7.14(1H，d，J= 8.5 Hz，H-5)，6.88(1H，d，J= 8.3 Hz，H-5″)，5.07(1H，d，J= 7.4 Hz，H-1′)，4.71(1H，dd，J= 11.9，2.2 Hz，H-6′β)，4.37(1H，dd，J= 11.9，7.6 Hz，H-6′α)，3.89(3H，s，3-OCH3)，3.86(3H，s，3″-OCH3)，3.82(1H，m，H-5′)，3.58(1H，dd，J= 9.0，7.4 Hz，H-2′)，3.54(1H，dd，J= 9.3，9.0 Hz，H-3′)，3.47(1H，d，J= 9.3 Hz，H-4′)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：126.0(s，C-1)，114.3(d，C-2)，150.4(s，C-3)，151.7(s，C-4)，116.4(d，C-5)，124.6(d，C-6)，169.4(s，C-7)，56.6(q，3-OCH3)，101.7(d，C-1′)，74.7(d，C-2′)，77.7(d，C-3′)，72.0(d，C-4′)，75.8(d，C-5′)，65.0(t，C-6′)，122.4(s，C-1″)，113.7(d，C-2″)，148.8(s，C-3″)，153.0(s，C-4″)，116.0(d，C-5″)，125.2(d，C-6″)，167.8(s，C-7″)，56.5(q，3″-OCH3)。以上數據與文獻[12]報道基本一致，故鑒定化合物2為4-O-β-D-香草酸-6-O-香草酰基吡喃葡萄糖苷。

圖2 化合物1關鍵的HMBC及1H-1H COSY信號Fig.2 Key HMBC and 1H-1H COSY correlations of compound 1

化合物3白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z467 [M + H]+，分子式為C22H26O11。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.56(1H，dd，J=8.3，2.0 Hz，H-6″)，7.52(1H，d，J= 2.0 Hz，H-2″)，7.03(1H，dd，J= 8.1 Hz，H-5)，6.99(1H，d，J= 1.9 Hz，H-2)，6.86(1H，d，J= 8.3 Hz，H-5″)，6.63(1H，d，J= 8.1 Hz，H-6)，4.89(1H，d，J= 8.5 Hz，H-1′)，4.66(1H，dd，J= 11.8，2.2 Hz，H-6′α)，4.49(2H，s，H-7)，4.38(1H，dd，J= 11.8，7.4 Hz，H-6′β)，3.85(3H，s，3″-OCH3)，3.84(3H，s，3-OCH3)，3.74(1H，ddd，J= 9.7，7.4，2.2 Hz，H-5′)，3.53(1H，dd，J= 8.9，8.5 Hz，H-2′)，3.51(1H，dd，J= 8.9，8.5 Hz，H-3′)，3.43(1H，dd，J= 9.7，8.5 Hz，H-4′)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：136.3(s，C-1)，111.2(d，C-2)，149.4(s，C-3)，145.6(s，C-4)，116.5(d，C-5)，119.1(d，C-6)，63.6(t，C-7)，55.2(q，3-OCH3)，101.3(d，C-1′)，73.5(d，C-2′)，76.4(d，C-3′)，70.6(d，C-4′)，74.2(d，C-5′)，63.5(t，C-6′)，121.0(s，C-1″)，112.4(d，C-2″)，147.4(s，C-3″)，151.6(s，C-4″)，114.6(d，C-5″)，123.9(d，C-6″)，166.5(s，C-7″)，55.1(q，3″-OCH3)。以上數據與文獻[13]報道基本一致，故鑒定化合物3為saccharumoside B。

化合物4白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z533 [M + Na]+，分子式為C23H26O13。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：7.42(1H，d，J= 1.9 Hz，H-2′)，7.30(1H，dd，J= 8.5，1.9 Hz，H-6′)，7.18(1H，d，J= 8.5 Hz，H-5′)，7.16(2H，s，H-2″，6″)，5.10(1H，d，J= 7.4 Hz，H-1)，4.59(1H，dd，J= 12.0，2.0 Hz，H-6α)，4.12(1H，dd，J= 12.0，7.6 Hz，H-6β)，3.80(1H，m，H-5)，3.76(3H，s，3′-OCH3)，3.73(6H，s，3″，5″-OCH3)，3.31(1H，m，H-2)，3.28(1H，m，H-3)，3.20(1H，dd，J= 8.5，8.3 Hz，H-4)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：99.1(d，C-1)，73.0(d，C-2)，76.6(d，C-3)，70.1(d，C-4)，74.1(d，C-5)，64.0(t，C-6)，124.2(s，C-1′)，112.7(d，C-2′)，150.0(s，C-3′)，147.6(s，C-4′)，114.7(d，C-5′)，122.5(d，C-6′)，166.9(s，C-7′)，55.6(q，3′-OCH3)，119.2(s，C-1″)，107.1(d，C-2″，6″)，148.4(s，C-3″，5″)，141.0(s，C-4″)，165.4(s，C-7″)，56.2(q，3″，5″-OCH3)。以上數據與文獻[14]報道基本一致，故鑒定化合物4為1-O-香草酸-6-(3″,5″-二甲氧基沒食子酰)-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物5黃色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z359 [M + H]+，分子式為C16H22O9。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.62(1H，d，J= 2.5 Hz，H-3)，5.57(1H，d，J= 1.7 Hz，H-1)，5.55(1H，dd，J= 17.0，10.0 Hz，H-8)，5.33(1H，dd，J= 17.2，1.8 Hz，H-10β)，5.29(1H，dd，J= 10.0，1.8 Hz，H-10α)，4.71(1H，d，J= 7.9 Hz，H-l′)，4.47(1H，m，H-7β)，4.40(1H，dd，J= 11.9，2.6 Hz，H-7α)，3.88(1H，d，J= 12.0 Hz，H-6′β)，3.68(1H，dd，J= 12.0，6.0 Hz，H-6′α)，3.40～3.29(3H，m，H-3′，4′，5′)，3.21(1H，dd，J= 9.0，7.9 Hz，H-2′)，3.16(1H，m，H-5)，2.72(1H，ddd，J= 9.6，5.5，1.8 Hz，H-9)，1.77～1.70(2H，m，H-6)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：98.0(d，C-1)，154.0(d，C-3)，106.0(s，C-4)，28.4(d，C-5)，25.9(t，C-6)，69.7(t，C-7)，133.3(d，C-8)，43.8(d，C-9)，120.8(t，C-10)，168.5(s，C-11)，99.7(d，C-l′)，74.7(d，C-2′)，77.9(d，C-3′)，71.5(d，C-4′)，78.4(d，C-5′)，62.7(t，C-6′)。以上數據與文獻[15,16]報道基本一致，故鑒定化合物5為獐牙菜苷。

化合物6白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z571 [M + Na]+，分子式為C25H40O13。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：5.88(1H，d，J= 1.5 Hz，H-4)，5.86(1H，s，H-7)，5.73(1H，dd，J= 15.5，6.5 Hz，H-8)，4.42(1H，dq，J= 6.5，2.5 Hz，H-9)，4.35(1H，d，J= 8.0 Hz，H-1″)，4.28(1H，d，J= 7.7 Hz，H-1′)，3.85(2H，d，J= 11.7 Hz，H-6″α，6″β)，3.64(2H，m，H-6′α，6′β)，3.37～3.14(8H，m，H-2′，2″，3′，3″，4′，4″，5′，5″)，2.16(2H，d，J= 4.0 Hz，H-2)，1.91(3H，d，J= 1.5 Hz，H-13)，1.28(3H，d，J= 6.5 Hz，H-10)，1.03(6H，s，H-11，12)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：42.5(s，C-1)，50.6(t，C-2)，201.3(s，C-3)，127.1(d，C-4)，167.3(s，C-5)，80.0(s，C-6)，131.5(d，C-7)，135.2(d，C-8)，77.3(d，C-9)，21.2(q，C-10)，23.5(q，C-11)，24.7(q，C-12)，19.6(q，C-13)，101.2(d，C-1′)，75.2(d，C-2′)，77.9(d，C-3′)，71.6(d，C-4′)，78.1(d，C-5′)，62.7(t，C-6′)，102.6(d，C-1″)，77.3(d，C-2″)，78.0(d，C-3″)，74.9(d，C-4″)，78.3(d，C-5″)，62.7(t，C-6″)。以上數據與文獻[17]報道基本一致，故鑒定化合物6為phoenixoside A。

化合物7白色針狀結晶(甲醇)；ESI-MS：m/z389 [M + H]+，分子式為C21H24O7。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.00(1H，d，J= 2.0 Hz，H-2)，6.86(1H，dd，J= 8.1，2.0 Hz，H-6)，6.79(1H，d，J= 8.1 Hz，H-5)，6.68(2H，s，H-2′，6′)，4.74(2H，d，J= 4.2 Hz，H-7，7′)，4.25(2H，m，H-9β，9′β)，3.87(2H，m，H-9α，9′α)，3.82(3H，s，3-OCH3)，3.79(6H，s，3′，5′-OCH3)，3.15(2H，m，H-8，8′)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：133.8(s，C-1)，110.7(d，C-2)，149.2(s，C-3)，147.8(s，C-4)，115.1(d，C-5)，120.5(d，C-6)，87.5(d，C-7)，56.9(d，C-8，8′)，72.1(t，C-9)，56.7(3-OCH3)，130.1(s，C-1′)，104.6(d，C-2′，6′)，149.5(s，C-3′，5′)，133.9(s，C-4′)，87.9(d，C-7′)，72.9(d，C-9′)，54.5(q，3′-OCH3)，56.4(q，5′-OCH3)。以上數據與文獻[18]報道基本一致，故鑒定化合物7為杜仲樹脂酚。

化合物8白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z313 [M + H]+，分子式為C15H20O7。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：8.00(1H，d，J= 16.0 Hz，H-4)，6.25(1H，d，J= 16.0 Hz，H-5)，5.82(1H，s，H-2)，3.54(1H，m，H-3′)，3.44(1H，m，H-4′)，2.31(1H，dd，J= 14.5，7.3 Hz，H-2′β)，2.06(3H，s，3-CH3)，1.83(1H，dd，J= 14.5，10.1 Hz，H-2′α)，1.34(3H，s，1′-CH3)，1.18(3H，s，5′-CH3)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：170.6(s，C-1)，121.5(d，C-2)，149.0(s，C-3)，133.6(d，C-4)，131.7(d，C-5)，21.0(q，3-CH3)，89.3(s，C-1′)，40.7(t，C-2′)，72.4(d，C-3′)，76.8(d，C-4′)，59.0(s，C-5′)，179.0(s，C-6′)，82.9(s，C-8′)，18.5(q，1′-CH3)，10.4(q，5′-CH3)。以上數據與文獻[19,20]報道基本一致，故鑒定化合物8為rel-5-(1R,5S-dimethyl-3R,4R,8S-trihydroxy-7-oxa-6-oxobicyclo-[3,2,1]oct-8-yl)-3-methyl-2Z,4E-pentadienoic acid。

化合物9白色結晶(甲醇)；ESI-MS：m/z209 [M + H]+，分子式C11H12O4。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.72(1H，d，J= 15.0 Hz，H-7)，7.16(1H，d，J= 8.0 Hz，H-6)，7.04(1H，s，H-2)，6.82(1H，s，J= 8.0 Hz，H-5)，6.30(1H，d，J= 15.0 Hz，H-8)，3.85(3H，s，4-OCH3)，3.83(3H，s，3-OCH3)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：125.5(s，C-1)，108.4(d，C-2)，148.9(s，C-3)，152.7(s，C-4)，113.1(d，C-5)，123.3(d，C-6)，148.8(d，C-7)，116.0(d，C-8)，170.5(s，C-9)，56.9(q，3-OCH3)，56.6(q，4-OCH3)。以上數據與文獻[21]報道基本一致，故鑒定化合物9為3,4-二甲氧基-肉桂酸。

化合物10白色針狀結晶(甲醇)；ESI-MS：m/z149 [M + H]+，分子式C9H8O2。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.67(1H，d，J= 16.0 Hz，H-7)，7.60(2H，m，H-2，6)，7.40(2H，m，H-3，5)，7.38(1H，m，H-4)，6.46(1 H，d，J= 16.0 Hz，H-8)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：135.9(s，C-1)，130.0(d，C-2，6)，129.2(d，C-3，5)，131.4(d，C-4)，146.3(d，C-7)，119.4(d，C-8)，170.4(s，C-9)。以上數據與文獻[22]報道基本一致，故鑒定化合物10為反式肉桂酸。

化合物11白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z339 [M + Na]+，分子式為C14H20O8。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：6.85(1H，d，J= 8.0 Hz，H-6)，6.82(1H，d，J= 2.7 Hz，H-2)，6.67(1H，dd，J= 8.0，2.7 Hz，H-5)，4.78(1H，d，J= 7.1 Hz，H-1′)，3.90(1H，dd，J= 12.0，2.0 Hz，H-6′α)，3.81(3H，s，4-OCH3)，3.78(3H，s，3-OCH3)，3.69(1H，dd，J= 12.0，6.0 Hz，H-6′β)，3.47～3.33(4H，m，H-2′，H-3′，H-4′，H-5′)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：153.9(s，C-1)，104.0(d，C-2)，151.1(s，C-3)，146.0(s，C-4)，113.9(d，C-5)，109.3(d，C-6)，57.1(q，3-OCH3)，56.4(q，4-OCH3)，103.5(d，C-1′)，75.0(d，C-2′)，78.5(d，C-3′)，71.5(d，C-4′)，78.0(d，C-5′)，62.6(t，C-6′)。以上數據與文獻[15]報道基本一致，故鑒定化合物11為3,4-二甲氧基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物12白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z369 [M + Na]+，分子式為C15H22O9。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：6.38(2H，s，H-2，H-6)，4.77(1H，d，J= 7.6 Hz，H-1′)，3.72(6H，s，3，5-OCH3)，3.69(1H，m，H-6′α)，3.57(3H，s，4-OCH3)，3.40(1H，m，H-6′β)，3.34(1H，t，J= 8.8 Hz，H-5′)，3.30(1H，m，H-3′)，3.19(1H，t，J= 7.6 Hz，H-2′)，3.08(1H，t，J= 9.2 Hz，H-4′)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：154.0(s，C-1)，94.3(d，C-2，6)，153.1(s，C-3，5)，132.4(s，C-4)，55.7(q，3-OCH3)，60.1(q，4-OCH3)，55.7(q，5-OCH3)，101.0(d，C-1′)，73.3(d，C-2′)，76.8(d，C-3′)，70.1(d，C-4′)，77.3(d，C-5′)，60.9(t，C-6′)。以上數據與文獻[15,23]報道基本一致，故鑒定化合物12為3,4,5-三甲氧基苯酚-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物13白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z123 [M + H]+，分子式為C7H6O2。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：8.03(1H，m，H-2)，7.99(1H，m，H-6)，7.58(1H，d，J= 7.4 Hz，H-4)，7.46(2H，d，J= 7.4 Hz，H-3，H-5)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：130.5(s，C-1)，129.3(d，C-2，6)，128.1(d，C-3，5)，132.6(d，C-4)，168.5(s，C-7)。以上數據與文獻[24]報道基本一致，故鑒定化合物13為苯甲酸。

化合物14白色針狀結晶(甲醇)；ESI-MS：m/z155 [M + H]+，分子式為C7H6O4。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.43(1H，m，H-2)，7.40(1H，m，H-6)，6.80(1H，d，J= 8.0 Hz，H-5)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：123.2(s，C-1)，115.8(d，C-2)，146.1(s，C-3)，151.5(s，C-4)，117.7(d，C-5)，123.9(d，C-6)，170.3(s，C-7)。以上數據與文獻[25]報道基本一致，故鑒定化合物14為原兒茶酸。

化合物15白色結晶(甲醇)；ESI-MS：m/z191 [M + Na]+，C9H12O3。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.33(3H，s，H-2，4，6)，3.88(9H，s，1，3，5-OCH3)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：148.9(s，C-1，3，5)，108.4(d，C-2，4，6)，56.4(q，1，3，5-OCH3)。以上數據與文獻[25]報道基本一致，故鑒定化合物15為1,3,5-三甲氧基苯。

2.2 活性測試結果

2.2.1 α-葡萄糖苷酶抑制活性篩選結果

本實驗以阿卡波糖(acarbose,100 μmol/L)為陽性對照，對膽木中分離所得的15個化合物進行了α-葡萄糖苷酶抑制活性篩選。結果如表2所示，當濃度為0.05 mg/mL時，化合物3、7、8、13和14顯示出α-葡萄糖苷酶抑制活性。

表2 化合物3、7、8、13和14的α-葡萄糖苷酶抑制活性

2.2.2 細胞毒活性結果

通過化合物1～15對人肺癌細胞株A549、宮頸癌細胞株HeLa和慢性髓原白血病細胞株K562的細胞毒活性實驗，發現在濃度為20 μmol/L，對3種細胞株均未表現出細胞毒活性。

3 結果與討論

膽木藥用部位為木質部，在制藥工藝上主要采用水提取制備膽木浸膏[26]作為藥用部位，前期研究表明，膽木中的主要成分為生物堿[27]，但對其他類型化合物研究相對較少，因此大極性非生物堿類成分也值得深入研究。本次研究中，通過膽木木質部粉碎分離得到15個化合物，其中化合物1～4、9～14為酚酸類化合物，化合物5、6為環烯醚萜類化合物，化合物7為木質素類化合物，化合物8為倍半萜類化合物，化合物15為苯丙素類化合物。化合物1為新化合物，化合物1～4、6～8均為首次從該屬植物中分離得到。體外活性篩選結果表明，化合物3、7、8、13和14顯示出弱的α-葡萄糖苷酶抑制活性，且所有化合物均無細胞毒活性。本研究結果首次開展了膽木中大極性非生物堿部分化學成分的α-葡萄糖苷酶抑制與細胞毒活性研究，豐富了膽木中化學成分的多樣性，發現其顯示出弱的α-葡萄糖苷酶抑制活性，為該海南特色黎藥膽木開發利用，以及拓寬膽木的新應用提供參考。