墊狀卷柏中化學成分的分離及其抑制腫瘤細胞增殖活性

蔡 蕊，于遠洋，謝 寧，徐 強，萬慧慧，王世盛,4*

1大連理工大學分析測試中心，大連 116024；2大連市檢驗檢測認證技術服務中心，大連 116081；3大連理工大學化工學院，大連 116024；4大連理工大學寧波研究院，寧波 315016

墊狀卷柏Selaginellapulvinata(Hook. & Grev.) Maxim．為卷柏科卷柏屬多年生草本植物，又名萬年青、長生草、九死還魂草等。卷柏屬植物在中國約有50余種，廣泛分布于廣西、遼寧、云南、福建、浙江、山東、吉林、湖南、陜西，河北等地?！侗静萸笳妗酚涊d其治有分生熟，生則微寒，力能破血通經，故治癥瘕淋結等癥；炙則辛溫，能以止血，故治腸紅脫肛等癥[1,2]?，F代藥理研究表明，墊狀卷柏具有清熱解毒、抗炎、抗腫瘤、抗衰老、免疫調節、治療心血管疾病等作用[3,4]。墊狀卷柏主要成分有雙黃酮類、黃酮類、炔酚類、生物堿類、有機酸類等[5,6]，其中雙黃酮和炔酚類化合物是墊狀卷柏主要的活性成分，而且selaginellin類化合物是目前僅在墊狀卷柏屬植物中發現的新型炔酚骨架類化合物。因此，對墊狀卷柏中雙黃酮類和炔酚類化合物進行純化，對其進行深入藥理作用機制研究具有重要的意義。

由于selaginellin類及雙黃酮類化合物結構相近，用常規的分離手段難以分離[7,8]。因此利用質譜引導的自動純化分離技術，通過質譜對selaginellin類及雙黃酮類化合物的分子及碎片的分子量進行檢出，然后將相應的化合物進行在線液相制備，同時結合減壓、常壓柱層析等手段，從墊狀卷柏95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分中，對雙黃酮和炔酚類化合物進行選擇性分離，得到四個雙黃酮類化合物和七個selaginellin類化合物，通過化學和波譜數據確定了它們的結構，并評價了這些化合物對人非小細胞肺癌細胞(NSCLC)H322的體外增殖抑制活性。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters自動分離純化系統(2767樣品管理器，2545二元梯度泵，2489紫外檢測器，515補償泵，系統流路管理器，SQD2質譜，MassLynx 和 FractionLynx 操作系統)；HPLC色譜柱：Unitary C18(250 mm × 4.6 mm，5 μm)；制備液相色譜柱：Unitary C18(250 mm × 4.6 mm，10 μm)。EYELA N-3010、N-1000旋轉蒸發儀(東京理化器械株式會社)；Milli-Q Direct16純水/超純水的一體化系統；Bruker Avance 400 MHz核磁共振儀；Agilent 1200型液相色譜儀。

薄層層析硅膠及柱層析硅膠(青島海洋化工有限公司)；HPLC所用水為超純水，甲醇為色譜甲醇(天津市光復精細化工研究所)，其余試劑均為分析純(西隴化工股份有限公司)；墊狀卷柏藥材2014

圖1 組分Ⅰ的制備液相色譜圖Fig.1 Chromatograms of preparative-scale separation of Fr.I注：A、C：優化前、后LC-UV圖；B、D：優化前、后LC-MS圖，下同。Note:A and C:LC-UV chromatograms before and after optimization;B and D:LC-MS chromatograms before and after optimization,the same below.

年3月購自安徽省亳州市龍輝藥業銷售有限公司，經大連藥檢所鑒定為墊狀卷柏的干燥全草，樣本存放于大連理工大學化工學院藥學系。

1.2 提取與分離

干燥的墊狀卷柏粉末1 kg用95%乙醇5 000 mL回流提取2 h，提取2次，乙醇提取液濃縮干燥后得到浸膏69 g。浸膏加水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，并分別濃縮，得到乙酸乙酯萃取層浸膏21 g。取乙酸乙酯部分16 g，經減壓硅膠柱層析分離，二氯甲烷/甲醇梯度洗脫得到化合物1(89 mg)、化合物2(6 mg)及組分Ⅰ(90 mg)、組分Ⅱ(592 mg)、組分Ⅲ(417 mg)。

組分Ⅰ、組分Ⅱ和組分Ⅲ分別用Waters自動分離純化系統進一步分離。樣品分析與制備所用流動相均為甲醇-水體系。自動純化系統色譜、質譜條件：流速為1 mL/min，柱溫為23 ℃，分流比為1/1 000，補償液為質譜級甲醇，補償液流速1 mL/min，以ESI源為離子化源進行負模式檢測，毛細管電壓：3.0 kV，錐孔電壓：30 V，離子源溫度：150 ℃，脫溶劑氣溫度：500 ℃，錐孔氣體流速：50 L/h，脫溶劑氣流速：1 000 L/h。

1.2.1 組分Ⅰ的分離純化

組分Ⅰ(54 mg)用甲醇溶解后，進行制備LC-MS分析，流動相為80%甲醇等度洗脫15 min，檢測波長為365 nm，ESI(-)模式下在保留時間6.98 min的色譜峰中，獲得的質荷比m/z551信號(圖1A、1B)。針對性優化制備色譜條件，選擇制備流動相82%甲醇等度洗脫8 min(圖1C、1D)，收集保留時間為5.28 min的組分，得到化合物3(8 mg)。

1.2.2 組分Ⅱ的分離純化

組分Ⅱ(427 mg)甲醇溶解后進行LC-MS分析。流動相：65%～80%甲醇梯度洗脫15 min，檢測波長為254 nm，在保留時間依次為4.47、5.92和11.38 min的色譜峰中，ESI(-)模式下依次獲得的質荷比分別為m/z511、511、537信號(圖2A、2B)。針對性優化制備色譜條件，制備液相色譜流動相：60%～80%甲醇梯度洗脫15 min(圖2C、2D)，依次收集保留時間5.58、7.73、11.92 min的組分，得到化合物4(19 mg)、化合物5(17 mg)和化合物6(20 mg)。

圖2 組分II的制備液相色譜圖Fig.2 Chromatograms of preparative-scale separation of Fr.II

1.2.3 組分Ⅲ的分離純化

組分Ⅲ(298 mg)，甲醇溶解后進行LC-MS分析。流動相：75%～85%甲醇梯度洗脫12 min，檢測波長為254 nm，在保留時間為5.18、6.15、6.85、7.83 和9.48 min的色譜峰中，ESI(-)模式下獲得的質荷比分別為m/z509、555、509、481、495信號(圖3A、3B)。針對性優化制備色譜條件，用75%甲醇等度洗脫14 min(圖3C、3D)，根據關注的MS信號，依次收集保留時間5.20、6.38、7.20、8.73和11.70 min的組分，分別得到化合物7(8 mg)、化合物8(6 mg)、化合物9(8 mg)、化合物10(17 mg)、化合物11(6 mg)。

圖3 組分III的制備液相色譜圖Fig.3 Chromatograms of preparative-scale separation of Fr.III

1.3 體外腫瘤細胞增殖抑制活性測試

化合物1～11分別配成終濃度為100 μmol/L受試樣品母液(DMSO)，-4 ℃保存。采用MTT方法對上述化合物進行體外腫瘤細胞增殖抑制活性測試。取處于對數生長期人非小細胞肺癌細胞H322，接種于96孔培養板中，每孔8 000個細胞，體積為100 μL。37 ℃孵育，培養24 h，顯微鏡觀察，細胞貼壁生長，狀態正常。取終濃度為100 μmol/L的受試樣品母液，用含小牛血清的DMEM培養液分別稀釋，濃度梯度為100、80、60、40、20 μmol/L。同時設置空白組(含培養液、無細胞)和對照組(培養細胞不加藥)，重復三次，采用MTT方法進行活性測試[9]。抑制率計算公式如下：

細胞生長抑制率=

[1-(OD實驗-OD空白)/(OD對照-OD空白)]×100%

1.4 數據統計分析

統計分析采用SPSS 13.0方法，用t檢驗分析不同組間差異，P<0.05則視為差異顯著，用SPSS 13.0進行IC50的計算。

2 結果與討論

2.1 樣品分析純化

制備高效液相色譜與質譜聯用技術分離效率高，但是天然產物成分復雜，直接用乙醇提取物分離制備化合物單體較難實現。墊狀卷柏中的炔酚類化合物含量較低，且結構差異很小，常規色譜方法分離效率極低。所以首先用石油醚萃取乙醇提取物，除去其中的脂溶性色素等雜質，然后用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯部分經LC-MS分析，主要成分的分子量為512、510、538、556、482、496、552。其中分子量為538的化合物，推測分子式是C30H18O10，經查閱文獻與穗花杉雙黃酮的分子式相同。在此基礎上，分子量552的化合物，推測為分子量是538的雙黃酮類化合物中一個羥基被甲氧基取代而成。分子量為512的化合物，分子式為C34H24O5，與已報道的炔酚類化合物selaginellin分子式相同。在此基礎上，推測分子量為510的化合物，應該是此類結構中脫去-2H，增加一個不飽和度的結構；分子量為556的化合物是在510的基礎上，結構中原子數增加了C2H6O；分子量為482的化合物是在510的基礎上，分子量減少28，推測為脫去C2H4或CO；分子量為496的化合物是在510的基礎上，結構中原子數減少了CH2形成的；故確定乙酸乙酯部分主要含有雙黃酮和炔酚類化合物。針對LC-MS分析發現的這兩類結構的組分，通過減壓硅膠柱層析進行分段，并采用質譜引導的制備液相色譜對組分I～III進行精細分離，快速高效得到雙黃酮及炔酚類化合物1～11。

2.2 化合物結構鑒定

分離得到的化合物1～11，均通過HPLC確定純度，化合物1～11的純度分別為：98.0%、87.6%、89.2%、99.6%、99.7%、99.2%、93.6%、68.2%、92.6%、98.4%、98.7%。經MS及NMR數據分析，鑒定了11個化合物的結構。

化合物1土黃色固體；ESI-MS：m/z537[M-H]-，分子式為C30H18O10。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：8.02(2H，d，J=8.8 Hz，H-2′/6′)，7.98(2H，d，J=8.8 Hz，H-2?/6?)，7.04(2H，d，J=8.8 Hz，H-3′/5′)，6.95(2H，d，J=8.8 Hz，H-3?/5?)，6.87(2H，s，H-3/3″)，6.74(1H，s，H-8″)，6.49(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：164.2(C-2)，103.8(C-3)，181.8(C-4)，160.6(C-5)，98.9(C-6)，163.1(C-7)，94.6(C-8)，157.1(C-9)，103.9(C-10)，124.2(C-1′)，128.3(C-2′/6′)，115.3(C-3′/5′)，161.3(C-4′)，164.2(C-2″)，102.6(C-3″)，182.1(C-4″)，153.1(C-5″)，124.7(C-6″)，157.4(C-7″)，94.0(C-8″)，153.7(C-9″)，104.2(C-10″)，121.1(C-1?)，128.6(C-2?/6?)，116.0(C-3?/5?)，161.4(C-4?)。經與文獻[10]對照，鑒定化合物1為扁柏雙黃酮(結構見圖4)。

化合物2土黃色無定型粉末；ESI-MS：m/z551[M-H]-，分子式為C31H20O10。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：8.02(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′/6′)，8.01(2H，d，J=8.8 Hz，H-2?/6?)，7.13(1H，s，H-8″)，7.04(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′/5′)，6.96(2H，d，J=8.8 Hz，H-3?/5?)，6.94(1H，s，H-3)，6.86(1H，s，H-3″)，6.49(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，3.89(3H，s，7″-OCH3)。經與文獻[11]對照，鑒定化合物2為異柳杉雙黃酮。

化合物3黃色無定型粉末；ESI-MS：m/z551[M-H]-，分子式為C31H20O10。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：8.08(1H，d，J=2.4 Hz，H-2′)，8.03(1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6′)，7.65(2H，d，J=8.8 Hz，H-2?/6?)，7.24(1H，d，J=8.8 Hz，H-5′)，6.83(2H，d，J=8.8 Hz，H-3?/5?)，6.71(1H，s，H-3)，6.67(1H，s，H-3″)，6.60(1H，s，H-6″)，6.52(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.25(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，3.92(3H，s，7″-OCH3)。經與文獻[12]對照，鑒定化合物3為蘇鐵雙黃酮。

化合物4黃色粉末；ESI-MS：m/z537[M-H]-，分子式為C30H18O10。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：8.13(1H，d，J=2.4 Hz，H-2′)，8.03(1H，dd，J=2.4，8.4 Hz，H-6′)，7.65(2H，d，J=8.8 Hz，H-2?/6?)，7.25(1H，d，J=8.8 Hz，H-5′)，6.83(2H，d，J=8.8 Hz，H-3?/5?)，6.73(1H，s，H-3)，6.66(1H，s，H-3″)，6.45(1H，s，H-6″)，6.52(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.24(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)；13C NMR(100 MHz，(CD3)2CO)δ：163.4(C-2)，104.4(C-3)，183.5(C-4)，160.3(C-5)，99.8(C-6)，99.8(C-8)，165.1(C-7)，158.9(C-9)，104.4(C-10)，123.4(C-1′)，132.7(C-2′)，123.5(C-3′)，161.8(C-4′)，117.6(C-5′)，128.9(C-6′)，164.9(C-2″)，103.8(C-3″)，183.1(C-4″)，94.8(C-6″)，158.9(C-5″)，162.6(C-7″)，105.4(C-8″)，156.2(C-9″)，105.6(C-10″)，120.9(C-1?)，129.2(C-2?/6?)，116.8(C-3?/5?)，162.8(C-4?)。經與文獻[13]對照，鑒定化合物4為穗花杉雙黃酮。

化合物5紫紅色粉末；ESI-MS：m/z511[M-H]-，分子式為C34H24O5。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：7.78(1H，d，J=8.0 Hz，H-16)，7.36(1H，d，J=8.0 Hz，H-17)，7.14(2H，d，J=8.6 Hz，H-3/5)，7.14(2H，d，J=8.6 Hz，H-8/12)，7.08(2H，d，J=8.4 Hz，H-28/32)，6.86(2H，d，J=8.4 Hz，H-20/24)，6.74(2H，d，J=8.4 Hz，H-29/31)，6.64(2H，d，J=8.4 Hz，H-21/23)，6.52(2H，d，J=8.6 Hz，H-2/6)，6.52(2H，d，J=8.6 Hz，H-9/11)，5.00(2H，s，H-34)；13C NMR(100 MHz，(CD3)2CO)δ：173.5(C-1)，122.2(C-2/6)，137.2(C-3/5)，131.3(C-4)，160.4(C-7)，137.2(C-8/12)，122.2(C-9/11)，173.5(C-10)，131.3(C-13)，122.5(C-14)，143.4(C-15)，127.8(C-16)，130.5(C-17)，142.1(C-18)，141.8(C-19)，130.7(C-20/24)，115.5(C-21/23)，157.5(C-22)，132.5(C-25)，84.7(C-26)，99.8(C-27)，133.9(C-28/32)，116.4(C-29/31)，159.0(C-30)，114.3(C-33)，63.0(C-34)。經與文獻[14]對照，鑒定化合物5為selaginellin。

化合物6紅色粉末；ESI-MS：m/z511[M-H]-，分子式為C34H24O5。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：7.75(1H，d，J=7.8 Hz，H-17)，7.67(1H，d，J=8.2 Hz，H-24)，7.59(1H，d，J=7.8 Hz，H-16)，7.16(2H，d，J=8.7 Hz，H-3/5)，7.16(2H，d，J=8.7 Hz，H-8/12)，6.99(2H，d，J=8.6 Hz，H-28/32)，6.84(1H，dd，J=8.2，2.0 Hz，H-23)，6.81(2H，d，J=8.6 Hz，H-29/31)，6.80(1H，d，J=2.0 Hz，H-21)，6.67(2H，d，J=8.7 Hz，H-2/6)，6.67(2H，d，J=8.7 Hz，H-9/11)，4.83(2H，s，H-34)；13C NMR(100 MHz，(CD3)2CO)δ：156.8(C-1/10)，115.1(C-2/6)，131.0(C-3/5)，134.7(C-4/13)，65.7(C-7)，131.0(C-8/12)，115.1(C-9/11)，119.6(C-14)，142.8(C-15)，126.7(C-16)，119.4(C-17)，140.6(C-18)，152.8(C-19)，157.2(C-20)，113.3(C-21)，158.7(C-22)，115.5(C-23)，121.4(C-24)，131.7(C-25)，85.2(C-26)，102.0(C-27)，133.4(C-28/32)，116.4(C-29/31)，158.7(C-30)，115.2(C-33)，63.1(C-34)。經與文獻[15]對照，鑒定化合物6為selaginpulvilin A。

化合物7黃色粉末；ESI-MS：m/z509[M-H]-，分子式為C34H22O5。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：7.92(1H，d，J=8.0 Hz，H-16)，7.89(1H，d，J=8.0 Hz，H-17)，7.82(1H，d，J=8.3 Hz，H-24)，7.18(2H，d，J=8.8 Hz，H-3/5)，7.18(2H，d，J=8.8 Hz，H-8/12)，7.03(2H，d，J=8.7 Hz，H-28/32)，6.91(1H，dd，J=8.3，2.2 Hz，H-23)，6.85(1H，d，J=2.2 Hz，H-21)，6.82(2H，d，J=8.7 Hz，H-29/31)，6.70(2H，d，J=8.8 Hz，H-2/6)，6.70(2H，d，J=8.8 Hz，H-9/11)，10.54(1H，s，H-34)；13C NMR(100 MHz，(CD3)2CO)δ：157.1(C-1/10)，115.3(C-2/6)，131.0(C-3/5)，133.8(C-4/13)，65.8(C-7)，131.0(C-8/12)，115.3(C-9/11)，125.3(C-14)，134.8(C-15)，128.1(C-16)，119.6(C-17)，147.7(C-18)，153.8(C-19)，158.9(C-20)，113.3(C-21)，160.3(C-22)，116.2(C-23)，123.1(C-24)，130.4(C-25)，83.5(C-26)，104.6(C-27)，133.8(C-28/32)，116.5(C-29/31)，159.4(C-30)，114.2(C-33)，191.3(C-34)。經與文獻[15]對照，鑒定化合物7為selaginpulvilin B。

化合物8紅色粉末；ESI-MS：m/z509[M-H]-，分子式為C34H20O5。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：10.70(1H，s，H-34)，8.02(1H，d，J=8.0 Hz，H-16)，7.50(1H，d，J=8.0 Hz，H-17)，7.17(2H，m，H-3/5)，7.17(2H，m，H-8/12)，7.17(2H，m，H-28/32)，6.94(2H，d，J=8.4 Hz，H-20/24)，6.76(2H，d，J=8.6 Hz，H-29/31)，6.68(2H，d，J=8.4 Hz，H-21/23)，6.51(2H，d，J=8.6 Hz，H-2/6)，6.51(2H，d，J=8.6 Hz，H-9/11)。經與文獻[14]對照，鑒定化合物8為selaginellin O。

化合物9紅色粉末；ESI-MS：m/z555[M-H]-，分子式為C36H28O4。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：7.74(1H，d，J=8.0 Hz，H-16)，7.36(1H，d，J=8.0 Hz，H-17)，7.12(2H，m，H-3/5)，7.12(2H，m，H-8/12)，7.12(2H，m，H-28/32)，6.87(2H，d，J=8.4 Hz，H-20/24)，6.75(2H，d，J=8.4 Hz，H-29/31)，6.65(2H，d，J=8.4 Hz，H-21/23)，6.52(2H，d，J=8.6 Hz，H-2/6)，6.52(2H，d，J=8.6 Hz，H-9/11)，5.86(1H，s，H-34)，3.48(6H，s，OCH3)。經與文獻[16]對照，鑒定化合物9為selaginellin E。

化合物10紫紅色粉末；ESI-MS：m/z481[M-H]-，分子式為C33H22O4。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：7.64(1H，d，J=8.0 Hz，H-15)，7.54(1H，t，J=7.6 Hz，H-16)，7.34(1H，d，J=8.0 Hz，H-17)，7.13(2H，d，J=8.6 Hz，H-3/5)，7.13(2H，d，J=8.6 Hz，H-8/12)，7.06(2H，d，J=8.4 Hz，H-28/32)，6.86(2H，d，J=8.4 Hz，H-20/24)，6.73(2H，d，J=8.4 Hz，H-29/31)，6.64(2H，d，J=8.4 Hz，H-21/23)，6.52(2H，d，J=8.6 Hz，H-2/6)，6.52(2H，d，J=8.6 Hz，H-9/11)；13C NMR(100 MHz，(CD3)2CO)δ：157.7(C-1/10)，122.3(C-2/6)，137.1(C-3/5)，131.1(C-4)，132.5(C-7)，137.1(C-8/12)，122.3(C-9/11)，131.1(C-13)，125.6(C-14)，131.1(C-15)，130.0(C-16)，130.8(C-17)，144.0(C-18)，142.0(C-19)，130.7(C-20/24)，115.6(C-21/23)，159.0(C-22)，115.6(C-25)，87.4(C-26)，94.5(C-27)，134.0(C-28/32)，116.3(C-29/31)，159.7(C-30)，114.3(C-33)。經與文獻[17]對照，鑒定化合物10為selaginellin A。

化合物11紅色粉末；ESI-MS：m/z495[M-H]-，分子式為C34H24O4。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：7.45(1H，d，J=8.0 Hz，H-16)，7.23(1H，d，J=8.0 Hz，H-17)，7.13(2H，d，J=9.2 Hz，H-3/5)，7.13(2H，d，J=9.2 Hz，H-8/12)，7.09(2H，d，J=8.6 Hz，H-28/32)，6.85(2H，d，J=8.6 Hz，H-20/24)，6.73(2H，d，J=8.6 Hz，H-29/31)，6.63(2H，d，J=8.4 Hz，H-21/23)，6.50(2H，d，J=9.2 Hz，H-2/6)，6.50(2H，d，J=9.2 Hz，H-9/11)；13C NMR(100 MHz，(CD3)2CO)δ：157.5(C-1/10)，122.3(C-2/6)，137.0(C-3/5)，131.2(C-4)，132.6(C-7)，137.0(C-8/12)，122.3(C-9/11)，131.2(C-13)，125.1(C-14)，139.3(C-15)，130.4(C-16)，131.0(C-17)，142.1(C-18)，141.2(C-19)，130.7(C-20/24)，115.5(C-21/23)，158.9(C-22)，115.5(C-25)，87.4(C-26)，94.5(C-27)，133.9(C-28/32)，116.3(C-29/31)，159.9(C-30)，114.6(C-33)，21.2(C-34)。經與文獻[17]對照，鑒定化合物11為selaginellin B。

圖4 化合物1～11的化學結構Fig.4 Structures of compound 1～11

2.3 抑制腫瘤細胞增殖活性

采用MTT法測定化合物1～11體外抑制腫瘤細胞增殖活性，結果如表1所示。

表1 化合物1～11對人非小細胞肺癌細胞H322細胞抑制作用結果

IC50結果顯示，化合物4和7對人非小細胞肺癌細胞H322細胞抑制活性較低，其余化合物均有較好的抑制活性，尤其是化合物3(蘇鐵雙黃酮)和10(selaginellin A)對人非小細胞肺癌細胞H322細胞抑制活性最強，顯示此兩類結構的化合物具有潛在的抗腫瘤應用前景。據文獻[18]報道，炔酚類化合物(selaginellin A)具有抑制細胞增殖活性，其中對U251、Hela以及MCF-7細胞系的IC50值分別約為56、47、102 μmol/L，對比發現，炔酚類化合物對人非小細胞肺癌細胞H322細胞抑制作用更強。

3 結論

利用質譜引導的PHPLC-MS分離技術，結合減壓、常壓柱層析等手段，對墊狀卷柏中的雙黃酮類和炔酚類化合物進行了選擇性制備分離，得到了四個雙黃酮類化合物(1～4)和七個炔酚類化合物(5～11)，該方法可快速、高效地得到高純度的雙黃酮類和炔酚類化合物。抑制腫瘤細胞增殖活性評價結果顯示，這些天然化合物對人非小細胞肺癌細胞H322細胞均有較好的增殖抑制活性，其中化合物3和10的IC50值分別為16.70 μmol/L和9.54 μmol/L。雙黃酮及炔酚類化合物在抗腫瘤及抑制COX-2等方面都顯示出較強的活性[19]，炔酚類化合物顯示出對氟康唑、酮康唑的抗念珠菌活性的體外增效作用[20]。因此,本文制備得到的化合物具備進一步研究及結構改造的價值。尤其是炔酚類結構目前僅在卷柏屬植物中發現，建立的快速制備方法，也為墊狀卷柏中雙黃酮及炔酚類化合物的快速及規模化分離純化提供了有效的手段。