豬脾轉移因子對豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（CH-1R株）免疫抗體的影響

陳上永 福建省壽寧縣農業農村局 福建 壽寧 355500

轉移因子（Transfer Factor，TF）是由T淋巴細胞釋放的可透析小分子物質（分子量≤10 kD），是一種細胞因子，能夠轉移致敏信息，具有特異性和非特異性免疫功能，已用于人類醫學中對免疫抑制疾病和無法治療疾病的標準療法[1-2]，于1979年引入到動物免疫和獸醫臨床治療中，可提高動物的免疫功能，具有較大的應用價值和研究意義[3-7]。

本研究旨在明確TF對豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）活疫苗（CH-1R株）免疫抗體的影響，用具有自主知識產權的中國發明專利以豬脾臟為原料制備3批豬脾TF[8-11]，通過ELISA方法檢測PRRS活疫苗（CH-1R株）單獨免疫或與TF聯合免疫后豬PRRS免疫抗體水平的變化情況，以明確本發明專利所制備的TF對PRRS活疫苗免疫效果的影響，為TF的臨床應用和PRRS防控提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗動物3～4周齡PRRS抗體陰性的健康杜長大仔豬，由福建某豬場提供。

1.2 TF制備 由福建農業職業技術學院動物疫病研究室制備3批豬脾TF，具體如下：按照具有自主知識產權發明專利方法[8-11]，選取經外觀檢查、外源病毒檢驗、原輔材料檢查等均合格的豬脾臟，通過搗碎凍融、滅活、切向流過濾、濾膜除菌后制成3批豬脾TF，分別為：TF-1、TF-2、TF-3。經檢驗，所制備3批TF的多肽含量（2.85 mg/mL、2.78 mg/mL和2.98 mg/mL）、脫E受體法效力（15.8%、16.1%和17.3%）、核 糖 含 量 （62.2 μg/mL、59.5 μg/mL和58.8 μg/mL）、細菌內毒素含量（≤10 EU/mL）、pH值（6.91、6.95和6.94）、鑒別檢驗、外源病毒檢驗、支原體檢驗、安全檢驗等各項質量標準檢驗均合格。

1.3 試劑PRRS抗體檢測ELISA試劑盒，購自美國IDEXX公司；PRRS活疫苗（CH-1R株），購自國內某生物制品企業。

1.4 儀器 酶標儀為美國Thermo公司產品，型號Multiskan MK3。

1.5 試驗分組與設計 選取50頭PRRS抗體陰性的健康杜長大仔豬，隨機分成5組，每組10頭，分別為聯合免疫組1、聯合免疫組2、聯合免疫組3、單獨免疫組和空白組。其中，聯合免疫組1、聯合免疫組2、聯合免疫組3分別采用TF-1、TF-2、TF-3稀釋PRRS活疫苗（CH-1R株），進行頸部肌肉注射（聯合免疫）；單獨免疫組采用生理鹽水稀釋PRRS活疫苗（CH-1R株），進行頸部肌肉注射（單獨免疫），設立空白組（僅注射生理鹽水），見表1。分別于免疫前3 d及免疫后第7 d、14 d、28 d、42 d和56 d采血，分離血清，采用ELISA方法測定PRRS免疫抗體水平。

表1 試驗分組與設計

1.6 PRRS免疫抗體測定 按照ELISA方法進行PRRS抗體測定，操作按PRRS抗體檢測ELISA試劑盒說明書進行，記錄各組豬血清樣本和ELISA試驗對照的OD650nm，計算樣本 （Sample）/陽性對照（Positive control）比率（S/P）。若S/P＜0.4，則PRRS抗體陰性；若S/P≥0.4，則PRRS抗體陽性。

2 結 果

結果顯示（見表2），免疫后第7 d的PRRS抗體陽性率，聯合免疫組1、聯合免疫組2及聯合免疫組3（50%、60%及50%）高于單獨免疫組（30%）。免疫后第14 d的PRRS抗體陽性率，聯合免疫組1、聯合免疫組2及聯合免疫組3（90%、70%及80%）高于單獨免疫組（50%）。免疫后第28 d的PRRS抗體陽性率，聯合免疫組1、聯合免疫組2及聯合免疫組3（100%、100%及100%）高于單獨免疫組（80%）。免疫后第42 d的PRRS抗體陽性率，聯合免疫組1、聯合免疫組2及聯合免疫組3（100%、100%及100%）高于單獨免疫組（70%）。免疫后第56 d的PRRS抗體陽性率，聯合免疫組1、聯合免疫組2及聯合免疫組3（100%、100%及100%）高于單獨免疫組（60%）。本試驗中，空白組的PRRS抗體陽性率始終為0%。結果表明，聯合免疫組的PRRS抗體陽性率比單獨免疫組高20%～40%。

表2 免疫前后不同時間PRRS抗體水平

3 結 論

全球于1987年在美國首次發生PRRS。我國于1996年在北京地區首次暴發PRRS，并迅速傳播至我國各?。ㄗ灾螀^）豬群，導致我國畜牧業損失巨大，嚴重危害我國養豬業健康發展[12]。PRRS疫苗佐劑的研發是PRRS防控研究的熱點，已有研究顯示[13-15]，短肽佐劑對PRRS活疫苗（CH-1R株）的免疫保護力具有較好的增強作用，可將106.0TCID50PRRS活疫苗（CH-1R株）對3×105.0TCID50高致病性PRRS TJ-F5株的攻毒保護率提高40%。TF就是一種重要的短肽佐劑，是主要由多肽和核糖組成的分子量小于10 kD的小分子多肽混合物，具有較好的免疫增強作用[15-26]。本研究結果顯示，TF可將PRRS活疫苗（CH-1R株）免疫豬的PRRS抗體陽性率提高20%～40%。表明TF可以提高PRRS活疫苗（CH-1R株）的免疫抗體水平。

致 謝感謝福建農業職業技術學院與派生特（福州）生物科技有限公司共建福建省動物保健與食品安全應用技術協同創新中心的余勛信教授、徐磊博士、劉毅發獸醫師、鐘云欽獸醫師、蔣鈴獸醫師和謝杼絰獸醫師對試驗的指導和幫助。