二維實時剪切波彈性成像與血清微小核糖核酸-122評估乙型肝炎患者肝纖維化的作用

王立美 張玉卓 李潔 谷培 秘景慧

乙型肝炎患者肝臟的去氧化，儲存肝糖原，合成分泌性蛋白質等功能異常，隨著肝纖維化程度的加重，嚴重者會進展為肝硬化，造成不可逆的肝臟損傷，嚴重降低患者的生存率及生存質量[1，2]。因此在肝纖維化早期明確疾病診斷及分期，及時采取有效的治療手段，將有助于阻止病情進展，提高治療效果，改善患者預后。既往對乙肝肝纖維化的診斷，多采用肝組織病理學活檢，并將檢查結果作為乙肝肝纖維化診斷及分期的金標準。但肝臟穿刺活檢屬于創傷性的檢查手段，存在一定的并發癥，部分并發癥可危及生命，使得患者對該檢查方法接受程度較低，并且肝臟穿刺活檢存在一定的主觀性差異性和取樣誤差，造成該檢查結果重復性差、不能動態觀察肝纖維化進展情況[3]。近年來，對乙肝肝纖維化的診斷技術越來越完善，其中二維實時剪切波彈性成像，并配合血清微小核糖核酸-122檢測的診斷技術也在不斷成熟[4，5]，能有效反應乙型肝炎肝纖維化的疾病程度及進展。對此，本研究探討了二維實時剪切波彈性成像與血清微小核糖核酸-122測定評估乙型肝炎患者肝纖維化的應用價值，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2019年10月至2022年2月收治的80例乙型肝炎患者，作為觀察組，根據肝纖維化分期對觀察組進行分組(S0組、S1組、S2組、S3組)。另選取同期60例健康體檢者作為對照組，2組均接受二維實時剪切波彈性成像檢查以及血清微小核糖核酸-122檢測。觀察組男46例，女34例；年齡22～69歲，平均年齡(45.38±9.26)歲；病程2～10年，平均病程(5.35±2.65)年。對照組中男30例，女30例；年齡22～70歲，平均年齡(45.25±10.55)歲。納入對象的性別比、年齡差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準：觀察組患者均符合慢性乙型肝炎防治指南中對該疾病診斷的相關標準[6]；觀察組患者經肝組織活檢確診為乙型肝炎；觀察組患者血清學指標及肝功能檢查資料完整；觀察組患者在6個月內無降酶、抗病毒、免疫調節、抗纖維化藥物的用藥史；所有納入對象及其家屬對研究的方法與目的知情，自愿簽署知情同意書；研究通過本院倫理委員會批準。

1.2.2 排除標準：同時感染丁型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒、戊型肝炎病毒、丙型肝炎病毒者；患代謝性、血吸蟲性、酒精性、膽汁淤積性肝病者；自身免疫性疾病者；中途退出或不配合研究者。

1.3 方法 觀察組乙型肝炎患者進行肝穿刺活檢，參照METAVIR分級，將患者分為S0組(無肝纖維化)、S1組(輕度肝纖維化)、S2組(明顯肝纖維化)、S3組(進展性肝纖維化)及S4組(肝硬化)[7]。

1.4 二維實時剪切波彈性成像檢查 觀察組與對照組均接受二維實時剪切波彈性成像檢查。檢查前告知受檢者空腹≥6 h。采用mindray ResonanceR9超聲診斷儀，腹部SC6-1凸陣探頭，調整探頭頻率至1～6 MHz。患者處平臥位，右上肢上舉置于頭部。于肝S5、S6段肋間隙，避開肝臟大血管、腫塊及膽囊等結構，選擇SWE模式，將 4 cm×3 cm取樣框上緣置于肝包膜下約1 cm。囑患者屏氣，待圖像穩定且顏色均勻填充90%以上時選取直徑≥1 cm感興趣區測量LSM值，測5次后取中位數作為結果。

1.5 實驗室檢查 清晨抽取受試者靜脈血,利用miRNA試劑盒提取血清總RNA；miRNA-122 采用美國ABI ProFlexTM PCR系統進行分析；miRNA-122反轉錄采用美國GeneCopoeia 試劑盒進行反應,將miRNA反轉錄生成cDNA,所有操作均在試劑盒說明的指導下進行。根據PCR 儀配備系統，得到miRNA-122的Ct值。

2 結果

2.1 觀察組與對照組LSM值比較 S0組與對照組LSM值差異無統計學意義(P>0.05)；S1、S2、S3、S4組LSM值均顯著高于對照組，S4組顯著高于S0、S1、S2、S3組，S3組顯著高于S0、S1、S2組，S2顯著高于S0、S1組，S1組顯著高于S0組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 觀察組與對照組LSM值比較

2.2 觀察組與對照組血清miRNA-122指標比較 觀察組中S0、S1、S2組肝纖維化(輕中度纖維化)患者血清miRNA-122水平比S3、S4組(重度纖維化)患者顯著增高(P<0.05)。見表2。

2.3 二維實時剪切波彈性成像肝臟纖維化分期相關性分析 經過相關性分析得出，二維實時剪切波彈性成像與肝纖維化分期呈正相關。見表3。

2.4 二維實時剪切波彈性成像診斷效能分析 以活檢穿刺病理結果為金標準，各個觀察組分期AUC結果分別為0.800、0.791、0.774、0.814，≥S1閾值為80.61，≥S2閾值為88.39，≥S3閾值為90.77，s4閾值為 94.59。見表4。

表2 觀察組與對照組血清miRNA-122指標比較

表3 二維實時剪切波彈性成像肝臟纖維化分期相關性分析

表4 二維實時剪切波彈性成像診斷效能分析

2.5 血清miR-122對肝纖維化的預測價值 以活檢穿刺病理結果為金標準，各個觀察組分期血清miR-122的AUC結果分別為0.795、0.782、0.761、0.802，≥S1最佳界值為80.61，≥S2最佳界值為88.39，≥S3最佳界值為90.77，S4最佳界值為3.483。見表5。

表5 血清miR-122對肝纖維化的預測價值

3 討論

乙肝患者的肝臟纖維化，是乙型肝炎向肝硬化發展的必經階段，是一個發展變化的病理過程。如果能在發病早期就明確診斷并給予對癥治療，可及時阻止疾病向中-重度發展，減少患者醫療成本，減輕痛苦、延長壽命[8，9]。近年來實時二維剪切波彈性成像技術在臨床廣泛應用，并逐漸成為監測肝纖維化程度及評價治療后反應的重要診斷手段[10]。該技術原理為利用高速聲輻射脈沖使不同深度的組織同時產生橫向位移，繼而在聚焦部位產生剪切波來評估肝臟的硬度值，彈性數值越大，表示肝組織硬度值越大[11]。

本次研究結果顯示，乙肝肝纖維化患者的肝臟硬度測定值顯著高于對照組與觀察組中的S0組者(P<0.05)；二維實時剪切波彈性成像與肝纖維化分期、LSM指標呈正相關；患者的肝硬度值隨著肝纖維化病理分期加重而增大，實時二維剪切波彈性成像技術，通過剪切波獲知組織彈性模量，量化表現出肝纖維化的程度，提升了檢查結果的精準度。已有研究發現該檢測方法和肝活組織檢查的檢查結果無顯著性差異，不能接受肝穿的患者可通過二維剪切波彈性成像檢查獲得準確的檢測結果[12，13]。本研究中觀察組患者血清miRNA-122水平顯著高于對照組(P<0.05)；觀察組中S0、S1、S2組肝纖維化(輕、中度纖維化)患者血清miRNA-122水平比S3、S4組(重度纖維化)患者顯著增高(P<0.05)。血清 miRNA-122已成為肝臟活動性損傷和組織修復的潛在生物標志物之一。血清中miRNA-122含量可作為肝硬化、肝纖維化患者分級的生化標記物。乙肝肝纖維化患者血清中miRNA-122含量降低，可能是因為肝細胞在疾病影響下數量大幅減少，抗肝纖維化的作用降低，使得肝纖維化加重[14，15]。臨床常用患者丙氨酸氨基轉移酶和天門冬氨酸氨基轉移酶來評估肝功能，但這2個標志物用于臨床診斷肝損傷，并不能區分引起慢性肝病的原因。有研究表明乙型肝炎病毒及肝癌等引起的慢性肝病中，miRNA均出現不同程度的變化，其中miRNA-122是變化特征最顯著的指標之一[16]。miRNA-122在肝臟特有，特異性表達在成人肝臟總miRNA中接近七成，肝病患者血清中miRNA-122表達量升高，是因為miRNA對翻譯進程產生了干擾。慢性肝炎、肝細胞癌患者血清中miRNA-122表達量顯著較高,對肝纖維化有重要影響。miRNA-122對肝纖維化發生風險有預測價值，未來臨床有望通過檢測miRNA-122,分析乙肝患者肝纖維化、肝硬化的發生風險,且可考慮將miRNA-122作為肝纖維化新的治療靶基因。

結合以上分析內容，可見對乙型肝炎肝纖維化者進行二維實時剪切波彈性成像與miRNA-122檢查，對于客觀評估肝纖維化程度有一定的診斷價值，且能動態觀察抗病毒及抗纖維化藥物治療的效果，臨床應用價值較高。本研究為實時二維剪切波彈性成像與血清miR-122應用于乙肝肝纖維化的診斷提供了一定科學依據。