溫陽振衰顆粒對慢性心力衰竭大鼠血清Hcy及cTnT的影響

湖南中醫藥大學中西醫結合學院，湖南 長沙 410208

慢性心力衰竭(congestive heart failure,CHF)簡稱慢性心衰，為各種心臟疾病的終末階段，是導致心血管疾病患者死亡的重要原因之一，給患者家庭帶來巨大的經濟負擔[1]。因此對CHF發生和發展機制的研究一直是心血管病防治的重點。本課題采取動物實驗，觀察溫陽振衰顆粒對CHF大鼠血清同型半胱氨酸(Hcy)、心肌肌鈣蛋白T(cTnT)的影響，進而探討溫陽振衰顆粒治療CHF的作用機制，為臨床CHF的綜合治療提供理論和實驗依據。

1 儀器與材料

1.1 實驗動物 健康雄性SD大鼠60只，體重(200±20)g，由湖南中醫藥大學實驗室動物中心提供，動物合格證編號為：SCXK(湘)2016-0002。

1.2 藥物與試劑 溫陽振衰顆粒(批準文號：201709，規格8 g/包，湖南中醫藥大學第一附屬醫院藥劑科)；馬來酸依那普利片(批準文號：H32026567，規格：10 mg/片，揚子江藥業集團江蘇制藥股份有限公司)；鹽酸阿霉素(批準文號：H44024359，規格 10 mg/瓶，深圳萬樂藥業有限公司)。大鼠Hcy 酶聯免疫分析試劑盒(批號：YZR965611，上海研尊生物科技有限公司)；大鼠cTnT 酶聯免疫分析試劑盒(批號：YS-H5461，上海研生實業有限公司)。

1.3 儀器 GE LOGIQ-3彩色多普勒超聲診斷儀(美國)；MB-530多功能酶標分析儀(深圳市匯松科技發展公司)；TGL-16臺式高速冷凍離心機(湘儀離心機儀器有限公司)。

2 實驗方法

2.1 造模 將注射用的鹽酸阿霉素，用0.9%NaCl注射液稀釋成1.0 mg/mL溶液，進行腹腔注射，每次2 mg/kg，每周注射1次，連續注射6周，總累計藥量12 mg/kg。每次注射前均應重新測量體重，并作為該次用藥劑量的計算標準。6周后對大鼠進行心功能測定以確定心衰模型是否復制成功[2]。

2.2 分組與給藥 SD大鼠60只，隨機選取10只為正常組，其余的SD大鼠按照“2.1造模”方法進行CHF模型復制。造模成功后對存活的SD大鼠做心臟彩超檢查進行心功能測定，根據心功能分層隨機分成5組：模型組、陽性對照組、溫陽振衰顆粒低劑量組(溫陽低劑組)、溫陽振衰顆粒中劑量組(溫陽中劑組)和溫陽振衰顆粒高劑量組(溫陽高劑組)。

第7周開始灌胃給藥，劑量參照人鼠體表面積法進行換算[3]，溫陽低、中、高劑量組分別給予溫陽振衰顆粒0.72 g/kg、1.44 g/kg、2.88 g/kg用蒸餾水稀釋后灌胃，陽性對照組給予依那普利 1.8 mg/kg 用蒸餾水配成混懸液灌胃，正常組和模型組給予等量蒸餾水灌胃，每天2次，各組均連續灌胃4周[2]。

2.3 心臟彩超檢查 將大鼠麻醉滿意后，行心臟彩超檢查。計算左室射血分數(LVEF)、左室短軸縮短率 (LVFS)、左心室舒張末期內徑(LVDD)、左室收縮末期內徑(LVSD)。取5個心動周期求平均值[4]。

2.4 血清Hcy、cTnT的測定 處死大鼠前對各組大鼠進行腹主動脈采血，經肝素鈉抗凝，全血靜置30 min后，離心(3000 r/min，15 min)，分離血清置-80 ℃冰箱保存。Hcy、cTnT的測定均采用ELISA檢測，操作步驟嚴格按試劑盒說明進行。

3 結果

3.1 一般情況 正常組大鼠反應靈敏，活動良好，進食活躍、體質量明顯增長；模型組大鼠在造模初期體質量略有上升，造模后期，與正常組比較，模型組大鼠飲食、活動明顯減少，出現腹瀉、體質量降低、肢體浮腫等心功能不全癥狀；各治療組大鼠飲食活動較正常組減少，體質量略有下降，與模型組比較，各治療組大鼠的心功能不全癥狀明顯較輕。在實驗結束前，模型組，陽性對照組，溫陽低、中、高劑量組因腹瀉各死亡1只，因麻醉意外模型組死亡2只，溫陽低劑組死亡1只。

3.2 大鼠心功能指標的變化 模型組大鼠的LVEF、LVFS均顯著降低，LVDD、LVSD均顯著升高，與正常組比較，差異均有統計學意義(P<0.01)；各治療組大鼠的LVEF、LVFS均明顯升高，LVDD、LVSD均顯著降低，與模型組比較，其差異具有統計學意義(P<0.01，P<0.05)。結果見表1。

3.3 各組大鼠血清Hcy、cTnT的變化 實驗后各組大鼠血清Hcy、cTnT的變化情況見表1。與正常組比較，模型組大鼠血清中Hcy和cTnT的含量均顯著增高，差異具有統計學意義(P<0.01)；與模型組相比較，陽性對照組和溫陽各劑量組大鼠血清中Hcy和cTnT的含量均明顯減少，差異具有統計學意義(P<0.01)。結果見表2。

表1 溫陽振衰顆粒對各組大鼠心功能指標的影響

組別nLVEF/%LVFS/%LVDD/mmLVSD/mm正常組1071.81±3.5643.92±2.985.89±0.222.92±0.25模型組740.55±4.13?26.59±2.84?7.20±0.29?4.97±0.19?陽性對照組961.68±3.23?△39.98±2.0?△6.29±0.14?△3.89±0.26?△溫陽低劑組848.49±3.31?△□32.84±1.21?△□6.88±0.14?▲□4.58±0.17?△□溫陽中劑組954.99±2.37?△□☆36.13±1.05?△□★6.62±0.10?△■★4.23±0.17?△■★溫陽高劑組960.76±3.59?△☆◆39.56±1.57?△☆◆6.30±0.20?△☆◆3.89±0.23?△☆◆

表2 實驗后各組大鼠血清Hcy和cTnT的變化

組別nHcy/pmoL/mLcTnT/pg/mL正常組1016.54±2.46596.98±26.56模型組767.49±9.81?1236.18±39.06?陽性對照組927.42±5.21?△878.12±28.63?△溫陽低劑組845.81±4.21?△□1100.29±31.35?△□溫陽中劑組935.83±2.59?△■☆986.09±33.15?△□☆溫陽高劑組926.36±3.92?△☆◆885.76±15.79?△☆◇

4 討論

CHF屬于中醫“心悸”“喘證”“水腫”“痰飲”等范疇。其病機主要是心氣(陽)虧虛，陰陽失調，瘀血水飲痰濁互結所致，治宜益氣溫陽、利水消腫為主[4]。溫陽振衰顆粒秉承扶陽宗旨，化裁于仲景經方[5]，具有溫陽益氣、利水消腫之功，主要由附子、紅參、干姜、甘草等中藥組成。前期實驗發現溫陽振衰顆粒能有效改善CHF動物的癥狀，調控心室重構，延緩CHF的病程。

同型半胱氨酸是蛋氨酸與半胱氨酸在代謝過程中產生的一個重要的中間產物。正常情況下，Hcy在血清內呈低表達，一旦其水平表達升高，將損害機體血管基質及內皮細胞，對動脈血管壁造成不利影響[6]。Hcy主要通過致炎癥因子、氧化應激和內質網應激、DNA低甲基化、免疫應答等多種細胞機制激活炎癥細胞因子、細胞分化介質，從而損傷內皮細胞功能，進而導致動脈粥樣硬化的發生與發展[7]。大量研究發現血漿HCY水平在CHF患者中明顯增加，高同型半胱氨酸血癥(HHCY)與心力衰竭的嚴重程度呈現出明顯的相關性，Hcy水平能夠反應左室功能受損和慢性心功能不全的程度[8-9]。在心力衰竭嚴重的患者中，HCY還可以作為心力衰竭死亡率的預測指標。HHCY伴心衰患者的3年死亡率是HCY正常的心衰患者的2倍[10]。實驗研究[11]表明，HHcy可促使心室肌細胞膠原纖維過度增加，導致心室肥厚。心臟結構改變最終轉變為功能障礙，并同時損害心臟的左室收縮和(或)舒張功能[12]。

cTnT是一種30-35kDa的蛋白質，主要存在于心肌細胞中，其作用主要是調節心肌收縮，通過抑制肌動蛋白中ATP酶活性松弛心肌，是一種高靈敏度、高特異度的心肌損傷的監測指標[13]。正常人在無心肌損傷時血清中cTnT含量極低，當心衰發生后，心肌組織受到損傷或生化刺激時，心肌缺血缺氧導致肌纖維溶解、壞死，細胞膜損傷破壞均可導致cTnT大量釋放進入血液[14]。因此，血清中檢測到的cTnT濃度可用來評價心力衰竭的發生和嚴重程度，也是評估心衰預后的重要指標[15]。有研究[16]指出，心衰患者可能有持續性的心肌損傷壞死，在大多數心衰患者血清中檢測到cTnT水平升高可證實這個推測。動物實驗表明，急性心衰大鼠的血清中cTnT水平顯著升高[17]，也有臨床報道心衰患者接受β受體阻斷劑治療后，血清中cTnT水平明顯下降[18]。

實驗結果顯示，模型組大鼠血清Hcy和cTnT的水平與正常組比較明顯升高。當給予溫陽振衰顆粒和依那普利灌胃給藥后，大鼠血清Hcy和cTnT的水平明顯降低，且溫陽高劑組療效優于中、低劑組，與依那普利療效相當。由此可見，溫陽振衰顆粒改善心功能的作用機制可能與抑制炎癥因子Hcy和心肌生化標志物cTnT有關。