藍金口服液治療上呼吸道感染（風熱表證）的作用研究

劉學武，張樂佳，宋 軍，吳 穎，鄒振興，徐康平，陳 靜*，張宗利*

（1.新藥藥效與安全性評價湖南省重點實驗室，湖南 長沙410331；2. 湖南普瑞瑪藥物研究中心有限公司，湖南 長沙 410331；3.湖南中嘉生物醫藥有限公司，湖南 長沙 410336；4.中南大學湘雅藥學院，湖南 長沙 410013）

上呼吸道感染俗稱普通感冒，是指自鼻腔至喉部之間的急性炎癥的總稱，是最常見的呼吸系統疾病[1-2]，該病四季、任何年齡均可發病，其病原體多以病毒為主，并在疾病后期常伴有細菌和真菌的繼發性感染。 臨床上對于上呼吸道感染主要采用抗感染和改善癥狀（如發熱、咳嗽、頭痛及全身酸痛等）相結合[3-4]，西藥能獲得直接抗感染的作用或降溫、鎮痛作用，但單一用藥往往不能同時獲得上述效果，中藥則可能達到兩者兼顧的治療效果，但在用藥時需遵循中醫證候特異性[5-6]。 因此，快速而有效的中醫辨證用藥治療成為研究熱點。 上呼吸道感染按中醫證候分型可分為風熱表證、風寒表證、外寒里熱證、暑濕證等[7-9]，其中以風熱表證和風寒表證居多[8-10]。目前，市售的上呼吸道感染中成藥多選用清熱解毒為主[11]，但清熱解毒藥多適用于上呼吸道感染熱毒壅盛證[12-15]，為滿足更廣泛的臨床需求，開發疏散風熱，以透邪外出解表的中成藥可能更具有臨床適用性。 藍金口服液是由板藍根、金銀花、連翹、射干、柴胡等配伍組成，兼具有清熱解毒、疏風透表之功效，主治外感溫邪疫毒，邪在衛表，證見發熱較甚，微惡風寒，頭身痛而無汗，或有微汗，咽痛口干，或頤腫，舌苔薄白或薄黃，脈浮數等，適用于風熱表證型上呼吸道感染的治療，同時可用于流行性感冒、流行性腮腺炎、急性咽炎、扁桃體炎等上述見癥者。 本研究通過觀察藍金口服液對體內外的抗菌、抗病毒作用以及解熱、發汗、鎮痛作用，考察藍金口服液的直接抗感染作用和改善風熱表證所伴有的高熱、無汗而頭身痛等癥狀的藥效功能。

1 材料

1.1 實驗動物

SPF 級ICR 小鼠370 只，雌性225 只，雄性145 只，動 物 合 格 證 號：43004700024175、4300470005721、43004700026564、43004700014322、43004700019800；SPF 級BALB/C 小鼠90 只，雌雄各半，動物合格證號：430047000035323；SPF 級SD 大鼠100 只，雌雄各半，動物合格證號：43004700019800、43004700019800。以上動物均購于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，實驗動物生產許可證號：SCXK（湘）2011-0003、SCXK（湘）2016-0002；在湖南省藥物安全評價研究中心屏障環境實驗室飼養，實驗動物使用許可證號：SYXK（湘）2015-0016。

1.2 菌種、病毒與細胞株

標準菌種：金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus（ATCC25923）、大腸埃希菌Escherichiacoli（ATCC25922）、肺炎鏈球菌Strptococous pneumoniae（ATCC49619）、乙型溶血性鏈球菌Strptococoushemolyticus（ATCC32210）、白假絲酵母菌Monilia albicans（ATCC10231），均購于南京便診生物科技有限公司。臨床分離菌：金黃色葡萄球菌（18 株）、肺炎鏈球菌（19 株）、乙型溶血性鏈球菌（15 株）、大腸埃希桿菌（19 株）、肺炎克雷伯菌（20 株）、白假絲酵母菌（6 株），均系湖南中醫藥大學第一附屬醫院細菌室、湖南中醫藥大學第三附屬醫院檢驗科、湖南省兒童醫院檢驗科分離細菌，所有細菌均經過西門子細菌鑒定系統鑒定。

病毒株：甲型流感病毒亞甲型鼠肺適應株H1N1（A/PR/8/34），由湖南師范大學生命科學院病毒研究室贈送，在湖南中醫藥大學微生物教研室進行培養和傳代。 呼吸道合胞病毒株（RSV Lon 株）購自中國預防醫學科學院病毒研究所及兒科研究所。

細胞株：人喉癌細胞株（Hep-2）、犬腎細胞株（DMCK），均購自中南大學湘雅醫學院細胞供應中心。

1.3 試劑與試藥

藍金口服液（濃縮液），2.703 g 生藥/mL，批號：20150127，由湖南中嘉藥物開發有限公司提供。諾氟沙星片，批號：15032332，由湖南新匯制藥股份有限公司生產。氨芐西林膠囊，批號：14022366，由珠海聯邦制藥股份有限公司中山分公司生產。 氟康唑片，批號：20140201，由海南中化聯合制藥工業股份有限公司生產。阿莫西林膠囊，批號：151121，由安徽安科恒益藥業有限公司生產。 雙黃連口服液， 批號：20150127， 河南福森藥液有限公司生產。 利巴韋林片，批號：1605016，由江西匯仁藥業有限公司提供。板藍根顆粒，批號：WXMB16109，由廣州云南白藥集團股份有限公司提供。 硝酸毛果蕓香堿滴眼液，批號：14120401，由武漢五景藥業有限公司生產。 羅通定片，批號：A140701，由山西云鵬制藥有限公司生產；阿司匹林片，批號：ZKA1407，由云南白藥集團股份有限公司生產。 上述受試物或陽性對照藥用于體內實驗時，于使用前加蒸餾水稀釋至所需濃度藥液，進行給藥；體外抗菌、抗病毒實驗用滅菌注射用水稀釋至相應濃度后，用0.22 μm 的濾膜過濾，然后添加至體外培養體系中。 RPMI-1640 培養基，購自美國Sigma 公司。活性干酵母粉，批號：12000222，安琪酵母股份有限公司產品。 小牛血清，購自杭州四季青生物有限公司。

1.4 主要儀器

移液器（德國Eppendorf 公司）；CJ-1F 型醫用凈化工作臺（蘇州馮氏實驗動物設備有限公司）；BSC1300-Ⅱ-B2 型生物安全柜（山東新華醫療器械股份有限公司）；DMIL 倒置顯微鏡（德國Leica 公司）；SpectraMaxi3x 型多功能酶標儀[美谷分子儀器（上海）有限公司]；艾科浦超純水儀（重慶頤洋企業發展有限公司）；ME1002E 型電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]。

2 方法

2.1 體外抗菌作用

2.1.1 瓊脂擴散法測定藥物抗菌作用 取對數生長期菌液0.1 mL（菌液濃度1×108CFU/mL），加入制備好的含無菌培養基的平皿中，均勻鋪開菌液后，取直徑6 mm 金屬滅菌打孔器于平皿中均勻且垂直打孔，每孔用移液器移取受試藥液200 μL，每個菌重復2 次，每次做3 個平行復孔。于37 ℃培養箱中培養24 h，測量每個抑菌圈兩個垂直方向的直徑，以抑菌圈的直徑大小表示藥物的抗菌作用強弱。

2.1.2 試管稀釋法測定藥物的最低抑菌濃度 取10 支無菌試管，每管加入1.0 mL 液體培養基，第一管加入200 mg/mL 受試藥與液體培養基混勻后，采用連續2 倍稀釋法，用液體培養基對藥物進行稀釋，使各管實驗藥物終濃度分別為200、100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.57 mg/mL（各管最終總容量為1 mL），各實驗管分別加入濃度1×108CFU 的各菌株對數生長期培養物0.1 mL。另設置加等量不含任何藥物與細菌或真菌的培養基對照、含細菌或真菌不含藥培養基的空白對照。細菌于37 ℃培養24 h，真菌于28 ℃培養48 h，肉眼觀察不同菌株生長情況，以未見細菌或真菌生長的藥物最高稀釋度為藥物的最低抑菌濃度（minimum inhibitory concentration, MIC）。

2.2 體內抗菌保護作用

ICR 小鼠240 只，雌雄各半，隨機分為8 組，每組30 只（每種細菌10 只/組），分別為模型對照組、阿莫西林膠囊組（0.26 g/kg）、雙黃連口服液組（7.8 mL/kg）、藍 金 口 服 液 劑 量1、2、3、4、5 組（1.6、3.1、6.2、12.5、25.0 g 生藥/kg）。各組小鼠每天給藥1 次，連續7 d，模型對照組每天灌胃給予等體積蒸餾水。 于第4 天給藥前，各組小鼠分別腹腔注射引起小鼠90%以上死亡的金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌（用5%活性酵母溶液配制，其中金黃色葡萄球菌為7.5×107CFU/只，肺炎鏈球菌為1.9×105CFU/只，溶血性鏈球菌為2.5×108CFU/只），菌液體積每只0.6 mL，阿莫西林膠囊組小鼠自注射細菌當日起，連續灌胃給藥3 d。 各組小鼠自注射細菌后連續觀察7 d，記錄動物的死亡情況。

2.3 體外抗病毒作用

2.3.1 藥物的細胞毒性作用 用細胞維持液將1.2 g/mL的藍金口服液、雙黃連口服液分別用細胞維生長持 液 按 連 續 對 倍 稀 釋 成1200、600、300、150、75、37.5 mg/mL；將100 mg/mL 利巴韋林按用細胞生長維持液連續對倍稀釋為5、2.5、1.25、0.63、0.32、0.16 mg/mL，分別加入96 孔板已長成單層的Hep-2 或DMCK 細胞中，每個稀釋度接種8 個復孔，每孔加入100 μL，置于37 ℃CO2培養箱中培養48 h 后， 棄培養液上清液，每孔加入100 μL 細胞維持液（含5 mg/mL 的MTT，但不含血清的1640 液），繼續培養2～3 h 后，棄上清液，PBS 洗3 次，每孔加DMSO 溶解液150 μL，振蕩5～10 min，待結晶完全溶解，酶標儀測得細胞在570 nm處OD 值。計算各稀釋度的藥物對細胞存活的影響，并計算細胞死亡率/%=（1-實驗孔OD 均值/對照孔OD 測定值均值）×100%，根據細胞死亡率計算細胞毒性半數中毒濃度（CC50）。

2.3.2 藥物對病毒的抑制作用 分別取已長成單層Hep-2 細胞或DMCK 細胞的培養板，倒掉培養液，每孔分別接種100TCID50 的不同病毒液50 μL，置37 ℃含5% CO2的培養箱中吸附1 h 后，吸去未吸附的病毒液，用PBS 洗細胞2 次后，每孔加入相應稀釋度的藥物（藍金口服液、雙黃連口服液分別用細胞維持液按連續對倍稀釋成10、5、2.5、1.25、0.63、0.31 mg/mL；利巴韋林用細胞維持液按連續對倍稀釋成25、12.5、6.3、3.2、1.6、0.8 μg/mL）100 μL，每個稀釋度接種8 個復孔，觀察藥物對病毒感染細胞后的抑制作用。 同時，設病毒對照、陽性對照藥物及正常細胞對照。 置于37 ℃、5% CO2培養箱中培養，每日倒置微鏡下觀察細胞病變，并記錄空斑數，根據病變情況及空白數計算藥物對病毒感染細胞的半數有效抑制濃度（IC50），并根據CC50計算安全指數SI=CC50/IC50。

2.4 體內抗病毒保護作用

BALB/C 小鼠90 只，雌雄各半，體質量19.0～24.3 g，先按性別、體質量隨機分為9 組，每組10只，分別為正常對照組、模型對照組、利巴韋林片組（117 mg/kg）、板藍根顆粒組（2.6 g/kg）、藍金口服液1、2、3、4、5 組（1.6、3.1、6.2、12.5、25.0 g 生藥/kg）。除正常對照組外，每只小鼠經鼻滴入10LD50 （10-5.5）的甲型流感病毒鼠肺適應株，各組小鼠于感染前一天開始灌胃給藥，每天1 次，連續7 d，正常對照組和模型對照組每天灌服等體積蒸餾水。 從病毒感染即日起，逐日觀察動物發病癥狀，死亡數，共14 d，計算各組小鼠的死亡率、平均存活天數以及肺指數。 肺指數指機體肺質量與體質量的百分比，以肺指數值的大小表示肺部炎性病變的嚴重程度。

2.5 解熱作用

試驗大鼠于檢疫結束后測肛溫2 次，選取體溫波動小于0.5 ℃的健康SD 大鼠50 只，雌雄各半，體質量160.1～199.4 g，按性別、體質量隨機分為5組，每組10 只，分別為模型對照組、雙黃連口服液組（5.4 mL/kg）以及藍金口服液低、中、高劑量組（2.16、4.32、8.64 g 生藥/kg）。各組大鼠按10 mL/kg 灌胃給予相應濃度藥液，1 次/d，連續7 d，空白對照組灌胃給予等體積蒸餾水。各組大鼠于給藥第5、第6 天分別測定肛溫一次使之適應。 于末次給藥前動物禁食不禁水12 h，造模前測定基礎肛溫值，測定后各鼠背部皮下注射20%干酵母-生理鹽水懸液10 mL/kg，于造模后4 h 按組別灌胃給予對應藥物或蒸餾水，于造模后1、2、4、5、6、8、10 h 分別檢測各組大鼠肛溫，并計算體溫波動值△T =T基礎體溫-T造模后體溫。

2.6 發汗作用

SD 大鼠50 只，雌雄各半，體質量190.4～217.5 g，按性別、體質量隨機分為5 組，分別為空白對照組、毛果蕓香堿組（40 mg/kg）以及藍金口服液組低、中、高劑量組（2.16、4.32、8.64 g 生藥/kg）。 各組大鼠按10 mL/kg 灌胃給予相應濃度藥液，1 次/d，連續7 d，空白對照組灌胃給予等體積蒸餾水。 于末次給藥后30 min，各組大鼠用75%乙醇擦拭干凈右足跖，然后涂上和田-高垣氏A 液，待充分干燥后，再薄薄涂上和田-高垣氏B 液，20 min 后，用40 倍放大鏡計數足跖部的深紫色著色點（汗點）。

2.7 鎮痛作用

2.7.1 對小鼠醋酸扭體反應的影響 ICR 小鼠50只，體質量18.0～24.8 g，雌雄各半，按性別體重隨機分為5 組，每組10 只，分別為模型對照組、阿司匹林片組（287 mg/kg）以及藍金口服液低、中、高劑量組（3.1、6.2、12.5 g 生藥/kg）。 各組小鼠按20 mL/kg 灌胃給予相應濃度藥液，每天1 次，連續7 d，模型對照組灌胃給予等體積蒸餾水。 末次給藥后30 min，各組小鼠按0.2 mL/只腹腔注射0.7%冰乙酸，記錄15 min 內各組小鼠扭體反應次數和首次出現扭體反應的潛伏期。

2.7.2 對小鼠熱板痛閾值的影響 ICR 小鼠80 只，雌性。 將智能熱板測痛儀溫度調節到（55±0.5） ℃作為熱刺激源，記錄小鼠自投入熱板至出現舔后足的潛伏期時間，作為該鼠的痛閾值。給藥前先測定每只小鼠的痛閾，把痛閾值小于5 s 或大于30 s 的小鼠剔除。 篩選合格小鼠50 只，按痛閾值兼顧體質量隨機分為5 組，每組10 只，分別為模型對照組、羅通定組（20 mg/kg）及藍金口服液低、中、高劑量組（3.1、6.2、12.5 g 生藥/kg）。 每日給藥前將羅通定片（碾磨成粉末）及藍金口服液用蒸餾水按劑量配制成相應濃度，現配現用。 各組小鼠按20 mL/kg 灌胃給予相應濃度藥液，1 次/d，連續7 d，模型對照組灌胃給予等體積蒸餾水。于末次給藥前及末次給藥后30、60、120 min 測定各組小鼠痛閾值。

2.8 統計方法

3 結果

3.1 體外抗菌作用

3.1.1 瓊脂擴散法測定藥物抗菌作用 藍金口服液具有較強的抑菌作用，藍金口服液對革蘭氏陽性菌的抑菌作用強于革蘭氏陰性菌。 藍金口服液對金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、乙型溶血鏈球菌的抑菌圈明顯大于陽性對照藥（氨芐西林）（P＜0.05）。藍金口服液對大腸埃希氏菌的抑菌圈明顯大于陽性對照藥（諾氟沙星）（P＜0.05）。 藍金口服液對白假絲酵母菌的抑菌圈明顯大于陽性對照藥（氟康唑）（P＜0.05）。詳見表1。

3.1.2 試管稀釋法測定藥物的最低抑菌濃度 根據各個細菌的MIC 可知，藍金口服液對臨床分離金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌均具有一定的抑制作用，且藍金口服液對革蘭氏陽性菌（金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌）的抑制作用明顯優于革蘭氏陰性菌（大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌）以及白假絲酵母菌。 詳見表2。

表1 藍金口服液對細菌的抑制作用（±s，n=6）

表1 藍金口服液對細菌的抑制作用（±s，n=6）

注：同菌種內與陽性對照藥物比較，*P＜0.05。

藥物 濃度 抑菌圈直徑/mm金黃色葡萄球菌 肺炎鏈球菌 乙型溶血性鏈球菌 大腸埃希氏菌 白假絲酵母菌生理鹽水藍金口服液氨芐西林氟康唑諾氟沙星——————500 mg/mL 10 μg/mL 10 μg/mL 10 μg/mL 15.42±1.26 18.45±1.11*15.22±1.24 27.12±1.19*16.28±1.07 27.97±1.22*9.07±1.03— —— —— —— —21.88±1.34*9.10±1.12—25.91±1.30*—

3.2 體內抗菌保護作用

如圖1A 所示，模型對照組小鼠注射金黃色葡萄球菌后，存活率為0%；與模型對照組比較，藍金口服液4、5 組小鼠存活率分別達50%、40%，且存活天數均顯著延長（P＜0.05 或P＜0.01）；與模型對照組比較，阿莫西林組和雙黃連口服液組小鼠存活率分別為90%、50%，且兩組小鼠的存活天數均顯著延長（P＜0.05 或P＜0.01）。 如圖1B 所示，模型對照組小鼠注射肺炎鏈球菌后，存活率為10%；與模型對照組比較，藍金口服液劑量4、5 組小鼠存活率分別達60%、70%，存活天數顯著延長（P＜0.05 或P＜0.01）；與模型對照組比較，阿莫西林組和雙黃連口服液組小鼠存活率分別為80%、40%，且阿莫西林組小鼠存活天數顯著延長（P＜0.01）。 如圖1C 所示，模型對照組小鼠注射溶血性鏈球菌后，存活率為0%；與模型對照組比較，藍金口服液劑量4、5 組小鼠存活率分別達30%、50%，且存活天數均顯著延長（P＜0.05 或P＜0.01）；與模型對照組比較，阿莫西林組和雙黃連口服液組小鼠存活率分別達100%、50%，且兩組小鼠的存活天數均顯著延長（P＜0.05 或P＜0.01）。

表2 藍金口服液對97 株臨床分離菌的MIC測定結果（mg/mL）

圖1 藍金口服液對小鼠感染細菌后的體內保護作用（n=10）

3.3 體外抗病毒作用

3.3.1 藍金口服液對呼吸道合胞病毒的抑制作用 藍金口服液、雙黃連口服液和利巴韋林片對Hep-2 細胞的細胞毒性CC50分別為679 mg/mL、5211 mg/mL、1581 μg/mL；藍金口服液、雙黃連口服液和奧司他韋膠囊對甲型流感病毒體外空斑形成的抑制作用IC50分別為3.5 mg/mL、4.89 mg/mL、6.3 μg/mL；根據CC50和IC50計算安全指數SI 分別為194、104、251。 詳見圖2。

3.3.2 藍金口服液對甲型流感病毒的抑制作用 藍金口服液、雙黃連口服液和利巴韋林對MDCK 細胞的細胞毒性CC50分別為967 mg/mL、891 mg/mL、1132 μg/mL；藍金口服液、雙黃連口服液和利巴韋林片對甲型流感病毒體外空斑形成的抑制作用IC50分別為6.58 mg/mL、8.33 mg/mL、3.5 μg/mL；根據CC50和IC50計算安全指數SI 分別為147、107、323。詳見圖3。

3.4 藍金口服液體內抗病毒保護作用

與正常對照組比較，模型組小鼠死亡率、肺指數顯著升高（P＜0.01），存活天數降低（P＜0.01）。 與模型對照組比較，藍金口服液各劑量組小鼠死亡率、肺指數顯著減小（P＜0.01），藍金口服液2、3、4、5 組小鼠存活天數顯著延長（P＜0.01）。 詳見圖4。

3.5 藍金口服液解熱作用

與模型對照組比較，藍金口服液中劑量組大鼠造模后6 h 的體溫波動值△T 顯著減小（P＜0.05），藍金口服液高劑量組大鼠6、8、10 h 體溫波動值△t顯著減小（P＜0.05）；與模型對照組比較，雙黃連口服液組大鼠造模后6 h 的體溫波動值△T 顯著減小（P＜0.05）。 詳見圖5。

3.6 藍金口服液發汗作用

圖2 藍金口服液對呼吸道合胞病毒感染細胞的抑制作用

圖3 藍金口服液對甲型流感病毒感染細胞病變的抑制作用（n=8）

圖4 藍金口服液劑量1、2、3、4、5 組對流感病毒感染小鼠存活天數、肺指數及死亡率的影響（n=10）

圖5 藍金口服液對干酵母所致大鼠體溫升高的影響（n=10）

與空白對照組比較，藍金口服液中、高劑量組大鼠汗點數顯著增加（P＜0.05）；與空白對照組比較，毛果蕓香堿組大鼠足趾汗點數顯著增加（P＜0.01）。詳見圖6。

圖6 藍金口服液對大鼠足趾汗液分泌的影響（n=10）

3.7 藍金口服液鎮痛作用

3.7.1 外周鎮痛作用研究——乙酸扭體法 與模型對照組比較，藍金口服液高劑量組小鼠扭體潛伏期顯著縮短（P＜0.05），中、高劑量組小鼠扭體次數顯著減少（P＜0.05）；與模型對照組比較，阿司匹林組小鼠扭體潛伏期顯著縮短（P＜0.01），扭體次數顯著減少（P＜0.01）。 詳見圖7。

3.7.2 中樞鎮痛作用研究——熱板法 與模型對照組比較，藍金口服液高劑量組動物給藥后30 min痛閾值顯著增加（P＜0.05）；與模型對照組比較，羅通定組小鼠給藥后30、60、120 min 痛閾值顯著增加（P＜0.05 或P＜0.01）。 詳見圖8。

圖7 藍金口服液對乙酸致小鼠扭體反應的影響（n=10）

圖8 藍金口服液對熱板法小鼠的鎮痛作用（n=10）

4 討論

上呼吸道感染屬于中醫學“外感發熱”“傷風感冒”范疇[16]，按中醫證候分型以風熱、風寒、暑濕較為多見，其中以風熱犯表證尤為常見[8-11]。 目前，中醫藥治療上呼吸道感染多以清熱解毒藥為主[11]，但清熱解毒藥較適用于上呼吸道感染熱毒壅盛證[12-15]。 藍金口服液由板藍根、金銀花、連翹、柴胡、荊芥、射干、甘草組成，根據其處方組成可知，本方兼具有清熱解毒、疏風透表之功效，可主治外感溫邪疫毒，邪在衛表，適用于風熱表證型上呼吸道感染的治療。 流行病學調查顯示，風熱犯表證占上呼吸道感染的30%～50%[7-10，17-18]，屬于上呼吸道感染的主要證候類型，且風熱感冒的感染病原體多以病毒為主[18]，包括流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒等[16-18]，故本研究選用甲型流感病毒和呼吸道合胞病毒作為代表性病毒株，通過體外抗病毒和體內保護實驗考察藍金口服液的抗病毒作用。結果顯示，藍金口服液32.51 mg/mL 對甲型流感病毒引起的MDCK 細胞病變及血凝現象有明顯的抑制作用，且能顯著減少呼吸道合胞病毒引起的Hep-2 細胞病變空斑數，同時藍金口服液1.6、3.1、6.2、12.5、25.0 g 生藥/kg 還能顯著降低小鼠感染甲型流感病毒后的死亡率，顯著延長存活時間，顯著減小肺指數，提示藍金口服液具有顯著的抗感冒病毒作用。感冒后期通常伴有細菌和真菌的繼發性感染，其病原體包括金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、大腸埃希菌、白假絲酵母菌等[16]。 故本次研究選用金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、乙型溶血鏈球菌、大腸埃希菌、白假絲酵母菌作為代表性菌株，通過體外抗菌和體內保護實驗考察藍金口服液的抗菌作用。結果顯示，藍金口服液具有較強的體外抑菌作用，且對革蘭氏陽性菌的抑制作用明顯優于革蘭氏陰性菌以及白假絲酵母菌。 同時，藍金口服液能夠顯著延長小鼠感染金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌及溶血性鏈球菌后的存活時間，提高其存活率，提示藍金口服液具有體內抗菌作用。

風熱表證的癥狀主要包括發熱、咽痛、微惡風寒、頭身痛等[16]，本次研究通過小鼠乙酸扭體實驗和熱板痛閾實驗考察藍金口服液的鎮痛作用，以體現其對咽痛、頭身痛癥狀的緩解作用，結果顯示，藍金口服液6.2、12.5 g 生藥/kg 能顯著抑制醋酸誘導的小鼠扭體次數，藍金口服液12.5 g 生藥/kg 能顯著減少熱板所致的小鼠舔足痛閾值，提示藍金口服液具有明顯的外周和中樞鎮痛作用。發熱是風熱表證型感冒主要的臨床癥狀之一，主要表現為內熱，故本次實驗通過活性酵母誘導大鼠體溫升高，結果顯示，4.32、8.64 g 生藥/kg 的藍金口服液能顯著降低大鼠高熱模型的體溫，同時還能增加大鼠汗液分泌，提示藍金口服液具有顯著的清熱、發汗解表作用，能通過退里熱、祛除外邪、解除表證，以達到改善無汗、微惡風寒等癥狀。通過上述實驗結果可知，藍金口服液對上呼吸道感染（風熱表證）具有顯著治療效果，但其作用機制仍需通過進一步實驗探索進行證實。