一種生物色標在冰余石蠟制片中的應用體會

李 曉，曹 卓，李明顯，劉紅英，黃鎮棟，鄭廣娟，何青蓮

近年來隨著醫療水平的迅速發展，術中冷凍技術成為病理診斷不可或缺的手段之一，但由于冷凍制片的局限性，術中冷凍病理診斷存在一定的誤診率[1-2]。冰余術后石蠟切片技術能夠明確診斷，并進一步佐證術中冷凍診斷的準確性，為臨床后續治療提供可靠依據。實際工作中有時會出現兩者診斷相悖的情況[3]，這是因為冰余組織經脫水后難以還原冷凍的情況，從而導致原冷凍切面中具有診斷意義的病灶在石蠟切片中無法體現。為解決上述問題，本科室通過不斷實踐，運用生物色標來標記乳腺癌切緣標本的冷凍樣本頭，其能夠有效提高冰余包埋及切片的工作質量和效率，從而提高冷凍診斷與石蠟診斷的符合率，現介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料收集2021年1～8月廣東省中醫院術中快速冷凍病理診斷為乳腺癌，且同時送檢乳腺癌切緣標本進行術中冷凍切片106例，隨機抽取53例作為實驗組，53例作為對照組。對照組與實驗組均由同一位病理技師分別應用傳統方法與實驗方法進行術中快速冷凍切片的相關操作。

1.2 主要設備及耗材Thermo NX70冷凍切片機，漢谷醫療HRS-18C冷凍切片快速染色機，SAKURA VIP6全自動組織脫水機，SAKURA TEC5組織包埋機，Leica RM2245石蠟切片機，SAKURA全自動染色封片工作站，OLYNPUS BX51顯微鏡，SAKURA OCT包埋劑，BLADEX綠色生物色標，冰醋酸。

1.3 方法(1)對照組(圖1)：按照傳統方法將已完成術中冷凍診斷的乳腺癌切緣組織固定于10%中性福爾馬林中，依次脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色。(2)實驗組(圖2)：對于已完成術中冷凍診斷的乳腺癌切緣組織，用干凈棉簽蘸取適量綠色生物色標涂抹于冷凍樣本頭的切面，放回冷凍切片機內等待3 s，待生物色標略干后，另取干凈的棉簽蘸取1%冰醋酸水溶液涂抹于冷凍樣本頭切面，等待6 s，待冰醋酸略干后，固定于10%中性福爾馬林中，依次脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色。

圖1 A.對照組傳統未標記冷凍樣本頭；B.未標記組織石蠟包埋效果 圖2 A.實驗組生物色標標記冷凍樣本頭；B.已標記組織石蠟包埋效果

2 結果

對照組冷凍切片與常規石蠟切片病理診斷判定為符合49例，基本符合3例，不符合1例，此例乳腺癌切緣組織冷凍切片HE染色結果為未見癌，石蠟切片HE染色結果為原位癌(圖3A、B)，符合率為92.45%(表1)；實驗組冷凍切片與常規石蠟切片病理診斷判定為符合53例，符合率為100%(表1)，如冷凍切片與石蠟切片HE染色結果均為導管上皮不典型增生(圖3C、D)。

表1 兩種方法冷凍切片與常規石蠟切片病理診斷符合情況

圖3 兩種方法乳腺癌切緣標本HE染色結果對比：A.對照組冷凍切片染色，未見癌；B.對照組石蠟切片染色，原位癌；C.實驗組冷凍切片染色，可見導管上皮不典型增生；D.實驗組石蠟切片染色，可見導管上皮不典型增生

3 討論

冷凍條件下，腫瘤組織內的細胞形態會發生改變，使得腫瘤細胞被拉長或破壞，而石蠟制片具有定位準確、定量可測、定性可靠的特點，一般術中冷凍切片質量不及術后石蠟切片的質量[4-6]。因此，冷凍診斷難以確診的標本，經過對冰余組織石蠟制片而變得容易診斷，比如術中診斷為可疑癌的病例在石蠟制片后可以確診為癌。然而由于冰余組織經脫水后難以還原冷凍的情況，特別是乳腺癌切緣標本等較小的組織，石蠟包埋時冰余組織切面不易辨認，本對照組采用傳統方法時發生冷凍切面與其對應石蠟切面不一致的情況，嚴重時可造成診斷結果不一致。因此對于乳腺癌切緣等較小組織，從取材、包埋、切片等步驟都應注意哪一面是“真正的切緣”[7]。本實驗組借助生物色標涂墨標記冷凍切面的方法，能清晰明確地標記冷凍切面，即“真正的切緣”，使冷凍切面與石蠟切面一一對應，提高包埋質量和效率，進而提高術中冷凍切片與術后石蠟切片病理診斷的符合率。

使用生物色標以標記冷凍切面的方法不僅適用于乳腺癌切緣標本，也適合于其他組織的冷凍標本切面標記，特別是甲狀腺微小乳頭狀癌的標記。由于甲狀腺微小乳頭狀癌結節直徑小于10 mm[8]，如果用生物色標標記出結節所在的位置，可提醒技術員包埋時高度重視，注意包埋切面并仔細包埋平整，還有助于技術員切片時少修，以切到涂墨的結節為準，防止過度修蠟把結節修沒了。應用生物色標進行標記時需注意以下幾點：(1)在涂抹生物色標的時候要均勻，并且需要其稍微干燥后再進行下一步操作，避免卸樣本頭時由于OCT包埋劑的融化導致生物色標浸染到標本冷凍切面的反面而影響實驗。(2)若冷凍切緣中存在較小的癌結節或具有診斷意義的小病灶，標記切緣時對該區域進行準確、重點地涂墨，這樣在石蠟包埋及石蠟切片時都能為技術員提供必要的提醒作用，從而保護了組織的重點部位，防止造成同一標本冷凍與石蠟切片前后診斷不一致的醫療差錯。

綜上所述，術中冷凍制片后使用生物色標涂墨以標記冷凍切面的方法在乳腺癌切緣標本等較小組織的冰余石蠟制片中起到較好的提醒效果，提高了冰余石蠟制片質量，為提高病理診斷的準確率提供了重要依據。