電壓門控鈉通道Nav1.6表達(dá)與結(jié)直腸癌異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系

宋瑞 呂楊波 陳震宏

結(jié)直腸癌（colorectal cancer,CRC）是臨床上常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率及病死率均較高[1-2]。研究表明，30%～50%的CRC患者在病情發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)生肝轉(zhuǎn)移，15%～25%的患者即使接受CRC根治術(shù)治療也會(huì)出現(xiàn)異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移[3]。然而，目前關(guān)于CRC肝轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚不明確。電壓門控鈉通道是鑲嵌于細(xì)胞膜上的大分子蛋白復(fù)合物[4]，其α亞型Nav1.6可促進(jìn)多種腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲[5]。前期研究發(fā)現(xiàn)，Nav1.6在CRC組織中呈高表達(dá)，且與癌細(xì)胞脈管浸潤(rùn)、神經(jīng)累犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)[6]。那么Nav1.6表達(dá)與CRC異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系如何呢，目前尚無(wú)相關(guān)研究明確，故本研究作一探討，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取衢州市人民醫(yī)院2016年6月至2018年12月收治的CRC患者88例，收集術(shù)中切除的CRC組織樣本。其中男59例，女29例；年齡37～81（66.2±11.1）歲；BMI（23.0±3.4）kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）病理學(xué)確診為CRC；（2）術(shù)后病理分期Ⅱ～Ⅲ期；（3）無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；（4）接受規(guī)范的CRC根治手術(shù)；（5）獲取的標(biāo)本直徑＞2 cm。排除合并繼發(fā)性腫瘤、其他惡性腫瘤、接受過(guò)放化療的患者。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查通過(guò)，所有患者簽署知情同意書(shū)。

1.2 資料收集 收集患者性別、年齡、BMI、腫瘤位置、術(shù)后病理分期、N分期、神經(jīng)累犯、脈管浸潤(rùn)情況以及Nav1.6陽(yáng)性表達(dá)率。Nav1.6陽(yáng)性表達(dá)檢測(cè)：取CRC組織樣本，采用組織芯片技術(shù)和免疫熒光法檢測(cè)Nav1.6表達(dá)情況，基于HALO High Plex 4.0.4軟件進(jìn)行定量分析，根據(jù)實(shí)際設(shè)置參數(shù)計(jì)算出陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)，計(jì)算其與總細(xì)胞個(gè)數(shù)的比值，即Nav1.6陽(yáng)性表達(dá)率。

1.3 術(shù)后隨訪 術(shù)后隨訪2年，每3個(gè)月復(fù)查腹部CT（可根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整復(fù)查時(shí)間），必要時(shí)行肝穿刺活檢，評(píng)估CRC根治術(shù)后異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移發(fā)生情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以M（P25，P75）表示，組間比較采用秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。CRC患者合并異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移的影響因素分析采用多因素logistic回歸分析。CRC患者Nav1.6陽(yáng)性表達(dá)率與N分期的相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 有、無(wú)異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移患者臨床病理特征比較 隨訪2年出現(xiàn)異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移13例，無(wú)肝轉(zhuǎn)移75例。有、無(wú)異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移患者在N分期、脈管浸潤(rùn)、Nav1.6陽(yáng)性表達(dá)率等方面比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；在性別、年齡、BMI、腫瘤位置、術(shù)后病理分期、神經(jīng)累犯等方面比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 有、無(wú)異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移患者臨床病理特征比較

2.2 CRC患者合并異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移的影響因素分析 將上述P＜0.05的變量納入多因素logistic回歸分析，結(jié)果顯示N分期、Nav1.6陽(yáng)性表達(dá)率是CRC患者合并異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移的獨(dú)立影響因素（均P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 CRC患者合并異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移的影響因素分析

2.3 CRC患者Nav1.6陽(yáng)性表達(dá)率與N分期的相關(guān)性分析 Spearman秩相關(guān)分析顯示，CRC患者Nav1.6陽(yáng)性表達(dá)率與N分期呈正相關(guān)（rs=0.441，P＜0.05）。

3 討論

CRC根治術(shù)后一旦出現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移，往往意味著患者預(yù)后不良，如不干預(yù)轉(zhuǎn)移灶，患者的自然病程僅6.9個(gè)月，5年總體生存率＜5%[7]；然而，即使聯(lián)合手術(shù)、放化療等治療措施，也難達(dá)到治愈的目的。既往研究表明，Nav1.6在宮頸癌、前列腺癌、間皮瘤、口腔鱗癌等多種腫瘤中呈異常表達(dá)，且與癌細(xì)胞侵襲有關(guān)[8-9]。筆者查閱相關(guān)文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)目前尚無(wú)相關(guān)研究闡釋Nav1.6表達(dá)與CRC肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系，故本研究作一探討。

前期研究利用qRT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CRC組織中Nav1.6 mRNA呈高表達(dá)，且與癌細(xì)胞淋巴轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)有關(guān)，在轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)樣本中也檢測(cè)到其高表達(dá)；提示高表達(dá)Nav1.6的癌細(xì)胞可能更易進(jìn)入淋巴結(jié)并參與腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移，其侵襲能力可能更高[10]。而本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Nav1.6陽(yáng)性表達(dá)率高、N分期晚是CRC患者術(shù)后出現(xiàn)異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，同時(shí)相關(guān)性分析結(jié)果提示N分期越晚的患者CRC組織中Nav1.6陽(yáng)性表達(dá)率越高；提示Nav1.6可能通過(guò)介導(dǎo)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移途徑促使CRC患者術(shù)后發(fā)生異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移。

目前關(guān)于Nav1.6參與CRC肝轉(zhuǎn)移發(fā)生的具體機(jī)制尚不明確，筆者查閱相關(guān)文獻(xiàn)，根據(jù)現(xiàn)有Nav1.6在促進(jìn)其他惡性腫瘤侵襲方面的研究結(jié)果進(jìn)行猜想，可能是通過(guò)增強(qiáng)基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metal-loproteinases,MMP）活性來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移。既往研究在乳腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，電壓門控鈉通道通過(guò)增強(qiáng)MMP活性來(lái)促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲[11]。另有研究發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌細(xì)胞中表達(dá)的Nav1.6能特異性增強(qiáng)MMP活性和蛋白表達(dá)，從而增強(qiáng)癌細(xì)胞侵襲能力，而使用鈉通道阻斷劑河豚毒素后，Nav1.6介導(dǎo)的MMP活性增加效應(yīng)被抑制[12]。Nav1.6作為電壓門控鈉通道，使Na離子內(nèi)流，從而激活鈉氫逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，導(dǎo)致H離子流出增加，使得周圍微環(huán)境酸化，細(xì)胞外基質(zhì)蛋白酶的分泌和蛋白水解活性增強(qiáng)[8]，如MMP降解膠原蛋白、層粘連蛋白和纖維連接蛋白等多種蛋白分子，清除細(xì)胞外基質(zhì)屏障，從而允許乳腺癌等多種癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移[13]。MMP在人CRC和肝轉(zhuǎn)移灶中參與細(xì)胞外基質(zhì)重塑[14-15]，在這類患者的腫瘤細(xì)胞及其浸潤(rùn)邊緣表達(dá)豐富，或許提示Nav1.6可能通過(guò)增強(qiáng)MMP酶解作用來(lái)增強(qiáng)CRC細(xì)胞的侵襲能力，從而參與肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生。體外培養(yǎng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Nav1.6特異性阻斷劑CN2毒素可明顯阻斷該通道介導(dǎo)的鈉電流，從而減弱癌細(xì)胞體外侵襲能力[16]。既往多項(xiàng)試驗(yàn)證明，鈉通道阻斷劑可抑制包括CRC細(xì)胞在內(nèi)的多種癌細(xì)胞侵襲、遷移和增殖能力[17-18]。以上結(jié)果提示Nav1.6靶向藥物在抑制CRC肝轉(zhuǎn)移方面具有潛在的臨床價(jià)值。

綜上所述，Nav1.6可能參與CRC術(shù)后異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生，但其具體機(jī)制尚未完全明確，可能通過(guò)介導(dǎo)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或增強(qiáng)MMP酶解作用完成，仍需進(jìn)一步研究證實(shí)。另外，靶向Nav1.6的藥物治療可能成為抑制CRC肝轉(zhuǎn)移的一種新的抗癌思路。