燈草灸對熱性驚厥幼年大鼠大腦皮質內GABA、Glu含量的影響*

曾芳芳，李凱風，蘇莉莉，林南龍，王奕霏，蘇俊之，劉盛歡

（1.廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530000；2.廣西國際壯醫醫院，廣西 南寧 530200）

驚厥是小兒常見的急癥之一，是由于大腦神經出現一系列電化學變化導致的全身肌肉或局部肌肉不可控制的抽搐。小兒驚厥是多發生于6個月～5歲年齡段兒童的危急重癥，其臨床常見表現有意識喪失、雙眼凝視、斜視或上翻、頭后仰、面部和四肢抽搐，嚴重的會出現呼吸暫停、嘴唇發青、昏迷等。臨床上小兒驚厥分為熱性驚厥和無熱性驚厥，以熱性驚厥（febrile seizure，FS）為主，并且具有較高的發病率[1]。其發病機制目前為止尚未完全明確，但很多相關研究者認為，熱性驚厥的發作與發熱高低程度有密切關系[2]。研究調查結果發現超過5%的幼兒都曾發生過一次或者多次熱性驚厥，并且這種疾病發展進程較快，如不及時治療將會嚴重影響患兒身體健康[3]。由于幼兒大腦皮質尚未發育完全，當毒素入侵大腦后會損傷腦組織、影響腦代謝、損傷腦細胞等，從而引發驚厥性癲癇持續狀態，嚴重的甚至危及患兒生命[4-5]。

中醫學理論認為，小兒驚厥屬“急驚風”范疇，因此歷代醫家對該病都十分重視。《東醫寶鑒·小兒》云：“小兒疾之最危者，無越驚風之證”。《幼科釋謎·驚風》：“小兒之病，最重惟驚”，由此可知小兒驚厥起病急驟，發展迅速，變化迅猛，病情兇險。小兒肌膚薄弱，腠理不密，氣血未充，極易感受時邪，邪氣由表入里，梟張而壯熱，熱極化火。而肝常有余、主風，病邪由表入里，內陷心包，從而引動肝風[6]。感受六淫之邪、溫熱疫毒之氣是急驚風發生的重要因素。《黃帝內經》中關于驚風的記載，認為其機制在肝，如“諸暴強直，皆屬于風”“諸風掉眩，皆屬于肝”。清代醫家夏禹鑄在《幼科鐵鏡·闡明發驚之由兼詳治驚之法》中明確提出：“療驚必先豁痰，豁痰必先祛風，祛風必先解熱”的清熱、祛風、豁痰的治療方法[7]。現代的研究表明采用針刺、刺血、拔罐等外治療法治療小兒FS，可達到緩解驚厥、迅速退熱的目的[8]。在民間人們常用燈草灸治療小兒FS，因為燈芯草性涼，桐油有清熱祛風之效。較早關于燈草灸的記載見于元·危亦林之《世醫得效方·沙癥》，明·李時珍《本草綱目》記載到：“燈火，主治小兒驚風、昏迷、抽搐、竄視諸病”[9]。明代龔延賢《小兒推拿秘旨》中也記述了運用燈草灸治療小兒驚風的治療方法。由此可見燈草灸治療小兒驚厥具有較好的療效。而且燈草灸療法操作簡單，無毒副作用，患兒及家屬較容易接受。

在前期的動物實驗研究中已經表明，燈草灸可明顯縮短熱性驚厥的幼年大鼠驚厥持續時間[10]。今擬通過觀察應用燈草灸對誘發FS大鼠大腦皮質Glu、GABA含量的影響并且探討燈草灸對FS作用的可能機制，為臨床治療提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康SD幼年大鼠40只（湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供），雌雄各半，28 d齡，體質量130～175 g，大鼠適應性喂養1 d后進行實驗。采用隨機數字法分為對照組、模型組、安定組、燈草灸組和安定+燈草灸組，每組8只。

1.2 主要試劑及儀器 30 cm×30 cm×50 cm玻璃水槽、玻璃溫度計、數字式電子體溫計、地西泮注射液（天津金耀藥業有限公司，國藥準字H12020957）、Glu抗體試劑（MU30844，Bioswamp武漢貝茵萊生物科技有限公司）、GABA 抗體試劑（MU30278，Bioswamp武漢貝茵萊生物科技有限公司）、燈芯草和桐油（由廣西國際壯醫醫院提供）、電熱恒溫水浴鍋（上海齊欣科學儀器有限公司 HWS-26）、離心管、制冰器等。

1.3 造模方法 參照文獻[11]建模，稍做改變。采用熱水浴誘發熱性驚厥方法，操作：將幼年大鼠放入45.5℃水溫的水槽中，誘發驚厥。入水時，先將幼年大鼠按于水槽一角，沿水槽壁站立時僅露出頭部，待水液濕透全身皮毛且大鼠能沿玻璃水槽站立后放其自由活動，如有驚厥發生則立刻脫離水浴，如5 min后大鼠不驚厥則取出，并且隨時監測水溫，保持水溫恒定。大鼠驚厥程度判斷參考Ranice分級標準[12]（見表1）。造模后，大鼠驚厥程度2級以上則為造模成功，不達者剔除。

表1 Ranice分級標準

1.4 分組與處理

對照組：不予建模，斷頭取腦。

模型組：建模成功后，不做任何處理，30 min后斷頭取腦。

安定組：建模成功后，按大鼠體重予安定2.632 mg/kg（相當于兒童0.5 mg/kg）的劑量，腹腔注射安定，其余過程同模型組。

燈草灸組，建模成功后，立即給予燈草灸治療。選穴和操作參照文獻[6]。

安定+燈草灸組，建模成功后，予安定組和燈草灸組的操作，其余過程同模型組。

1.5 觀察指標及檢測方法 分別記錄各組大鼠驚厥持續時間、驚厥程度、肛溫（治療后 1、5、9 min）和死亡例數。大鼠驚厥30 min后，斷頭取出大腦并剝離，剝離時要保證大腦完整性，最后再分離大腦皮質。每只樣本獨立分裝，并于-80℃冰箱貯存待檢。檢測前將每組大鼠大腦皮質組織冰浴勻漿并離心，采用ELISA檢測法（按實驗步驟操作），最后再計算出大鼠大腦皮質中Glu和GABA的濃度。

1.6 統計學方法 應用SPSS 24.0軟件進行統計分析處理。檢測各項指標均以均值±標準差（±s）進行描述；若計量資料符合正態分布方差齊，組間比較差用單因素方差分析，兩兩比較差用LSD檢驗，其中P＜0.05表明組間有顯著性差異，P＜0.01表示有極顯著性差異，且均具有統計學意義。

2 結果與分析

2.1 燈草灸對大鼠驚厥持續時間的影響 與模型組相比，安定組、燈草灸組和安定+燈草灸組大鼠驚厥持續時間有顯著性差異（P＜0.05）。與安定組相比，模型組、燈草灸組和安定+燈草灸組有顯著性差異（P＜0.05），安定+燈草灸組與燈草灸組之間有極顯著性差異（P＜0.01），見表2。

表2 各組大鼠驚厥治療后驚厥持續時間（±s）

表2 各組大鼠驚厥治療后驚厥持續時間（±s）

注：與模型組比較，*P＜0.05；與安定組比較，#P＜0.05；與燈草灸組比較，△P＜0.01。安定組其中1只大鼠在建模過程中死亡，剔除實驗。

組別 n 驚厥持續時間/s模型組 7 1 7 2.0 0±6.4 5安定組 6 1 6 1.6 7±3.3 9*燈草灸組 7 1 5 4.2 9±3.9 9*#安定+燈草灸組 7 1 4 4.0 0±5.8 9*#△

2.2 燈草灸對驚厥大鼠肛溫的影響 各組實驗大鼠驚厥前肛溫無差異（P＞0.05）；驚厥治療后1 min模型組與安定組、燈草灸組、安定+燈草灸組相比有顯著性差異（P＜0.05），安定組與燈草灸組、燈草灸+安定組相比無顯著性差異。驚厥治療5 min后，模型組與燈草灸組、安定+燈草灸組相比有顯著性差異（P＜0.05）；驚厥治療9 min后，模型組與燈草灸組相比具有顯著性差異（P＜0.05）。見圖1。

圖1 各組大鼠驚厥前和驚厥治療后1、5、9 m in肛溫（±s）

2.3 燈草灸對驚厥大鼠大腦皮質氨基酸GABA、Glu的影響 與對照組相比，模型組大鼠大腦皮質Glu含量明顯升高（P＜0.01）。與模型組相比，安定組、安定+燈草灸組大鼠大腦皮質Glu含量明顯降低（P＜0.01）。模型組與燈草灸組相比較無顯著性差異（P＞0.05）。安定組、燈草灸組、安定+燈草灸組之間無顯著性差異（P＞0.05）。安定+燈草灸組與安定組相比有顯著性差異（P＜0.05）、與燈草灸組相比有極顯著性差異（P＜0.01）。與對照組相比，模型組大鼠大腦皮質GABA含量明顯降低（P＜0.01）。模型組與安定組、燈草灸組、安定+燈草灸組相比有極顯著性差異（P＜0.01）。安定組與燈草灸組之間無顯著差異（P＞0.05）。安定組與安定+燈草灸組之間有顯著性差異（P＜0.05）。燈草灸組與安定+燈草灸組之間有顯著性差異（P＜0.01），見表4。

表4 各組大鼠大腦皮質氨基酸GABA、G lu的比較（x± s，μmol/L）

3 討論

小兒高熱會引起大腦中樞神經系統失調，影響正常腦細胞組織，導致驚厥發生[13-14]。FS反復發作或驚厥持續時間過長，都會引起大腦缺氧，從而對大腦神經系統、腦細胞造成不可逆的損傷，并且遺留后遺癥[15-18]。因此快速解除驚厥癥狀、縮短驚厥時間及預防驚厥復發尤為重要，對治療疾病也很關鍵[19]。在臨床上通常會選用地西泮、苯巴比妥等藥物抑制中樞神經，緩解患兒驚厥狀態，達到止驚目的。地西泮屬于苯二氮類藥物，長期大量使用可引起中樞神經系統不同部位的抑制，臨床上可表現為從輕度的鎮靜到催眠、甚至不同程度的昏迷等，還會導致呼吸道分泌物增多，從而引發呼吸抑制、危及患兒生命[20-21]。而燈草灸屬于祖國傳統醫學的外治法之一，簡便、安全、無副作用，療效也倍受患者青睞，有較好的應用前景。

熱性驚厥屬中醫“急驚風”范疇。對于燈草灸治療小兒驚風的療效，在歷代文獻中有頗多記載，如清代陳復正《幼幼集成》評價燈草灸為“誠幼科第一捷法，實有起死回生之功”，具有“疏風散表，行氣利痰，解郁開胸，醒昏定搐”之效，并且他主張運用燈草灸等外治手法治療小兒驚風疾病，既豐富了小兒驚風的內涵，又提供了新思路，對現代兒科臨床上遇到熱性驚厥、癲癇等疾病的治療具有重要的指導意義。從表2可知，安定組、燈草灸組和安定+燈草灸組三組大鼠驚厥持續時間均縮短，有差異性（P＜0.05）；燈草灸組和安定+燈草灸組兩組大鼠驚厥持續時間都低于安定組，兩者比較有差異性（P＜0.05）；安定+燈草灸組大鼠驚厥持續時間低于燈草灸組，兩者有極顯著性差異（P＜0.01），說明安定與燈草灸聯合使用可以明顯縮短驚厥持續時間，起到定搐的作用。

相關研究者認為[22]燈草灸是利用火的走竄性和火之熱性達到祛風散邪、疏通經脈的作用。由于燈草灸對人體穴位的刺激程度較強持續作用時間較長，再加上其對小兒熱性驚厥具有較好的療效，因此燈草灸成為了中醫兒科急救治法之一[23]。小兒發熱的程度和頻率與驚厥存在密不可分的關系，人體中大腦神經元在高熱的狀態下會釋放大量異常電量，這會導致人體大腦中樞神經系統受損或者多種全身性病癥，從而使得患兒腦細胞功能紊亂[24]、導致驚厥發生[25]。從表3可得出，大鼠驚厥后立即予治療，在治療后1min燈草灸組大鼠肛溫下降速度比安定組快且有差異性（P＜0.05），在5、9 min模型組與燈草灸組相比較有差異性（P＜0.05），但與安定組相比較無顯著性差異（P＞0.05），說明燈草灸在短時間內降溫速度快，再結合前期的燈草灸可縮短驚厥大鼠驚厥時間的結論，可得出燈草灸不僅有定搐的效果，還有快速降溫的作用。所以，古代醫家認為燈草灸屬于急救之法并非夸詞。

熱性驚厥的發生與人體大腦中興奮性氨基酸和抑制性氨基酸有密切關系。腦內中存在多種氨基酸其中GABA、Glu在中樞神經系統中具有神經遞質作用，其中Glu是大腦中主要的興奮性神經遞質，集中分布在中樞神經系統，以大腦皮質為主。Glu對大腦皮層組織有興奮作用，可以參與學習記憶、自主運動神經的活動，還可以維持大腦中樞系統的發育和保持大腦正常運行[26]。大腦內的Glu的含量過度增高會產生神經毒性，對神經元有很強的興奮毒性作用[27]，從而產生神經細胞永久損傷，造成神經元變性壞死。其中GABA是乳動物中樞神經系統最主要的抑制性氨基酸[28-31]，也是腦組織中主要的抑制性氨基酸，在大腦中起到傳遞神經元信號的作用。GABA作為初級抑制性神經遞質，它可以抵消神經傳遞，降低大腦活動性，促使大腦處于放松狀態。腦內GABA的含量較高，大腦中40%的突觸為GABA能突觸，它是通過介導抑制性突觸傳遞，可以阻止大腦神經元同步異常放電，當GABA含量減少到一定程度時可誘發驚厥發作。從表4可知，與對照組相比，模型組大鼠大腦皮質Glu含量明顯升高（P＜0.01）；與模型組相比安定組、燈草灸組、安定+燈草灸組大鼠大腦皮質Glu含量明顯降低（P＜0.01），安定組、燈草灸組、安定+燈草灸組之間相互比較差異無顯著性（P＞0.05），安定+燈草灸組與安定組比較有顯著性差異（P＜0.05），與燈草灸組相比較有極顯著性差異（P＜0.01）。燈草灸組與安定組相比，兩者并無顯著差異性，由此可見燈草灸可以降低熱性驚厥大鼠大腦皮質中Glu的表達水平。燈草灸+安定組降低大鼠大腦皮質內Glu含量大于燈草灸組和安定組，兩者聯用效果大于單一使用效果。與對照組相比，模型組大鼠大腦皮GABA含量明顯降低（P＜0.01），安定組、燈草灸組、安定+燈草灸組與模型組相比有顯著升高（P＜0.01）。由此可知，燈草灸可以升高熱性驚厥大鼠大腦皮質中GABA的含量，調節抑制性氨基酸表達水平。實驗研究表明，熱性驚厥的發生與人體大腦中興奮性氨基酸和抑制性氨基酸有密切關系，此結論與燈草灸具有調節人體神經系統功能作用[32]的研究結果一致。FS發作與中樞神經系統遞質含量的變化有很大關系，Glu和GABA表達水平變化可以反映出熱性驚厥的治療效果，其常用作評價中樞神經系統功能興奮和抑制狀態的客觀指標。興奮性神經遞質Glu含量升高或抑制性神經遞質GABA含量降低是FS發作機制之一。

綜上所述，本實驗研究證實了燈草灸不僅可以快速降溫，縮短驚厥持續時間，還可以降低熱性驚厥大鼠皮質中Glu的含量、增加GABA的含量，調節失衡的氨基酸神經元。此研究證實了燈草灸有退熱、止痙的功效和調節人體神經功能的作用，可能是通過控制興奮性氨基酸和抑制性氨基酸的釋放來調節大腦神經細胞的功能。此療法簡便、快捷，但推廣至臨床需要進一步完善研究。

致謝：特別感謝廣西國際壯醫醫院壯瑤醫實驗室為該課題提供技術支持。