自制小鉤在大鼠雙側卵巢切除術中的應用*

張 穎 孫小勇 張愛琳 田 楓

(北京大學醫學部實驗動物科學部，北京 100191)

目前實驗性大鼠雙側卵巢摘除造模術，廣泛應用于藥理藥效等研究，如摘除雌性大鼠的卵巢以減輕性激素對某些實驗的影響[1]。普通卵巢摘除法是采用眼科鑷將卵巢取出腹腔后子宮角與卵巢雙側結扎，再利用眼科剪進行切除，最后用青霉素肌肉注射。該方法有少量血液滲出，易發生腹腔內感染。為提高手術成功率，經過多次摸索，本實驗自制了專用于探索及固定卵巢的工具，改雙側結扎為單側結扎，青霉素肌肉注射改為腹腔注射。對比實驗顯示，新方法更簡單易操作，手術成功率更高。

1 材料和方法

1.1 實驗動物及分組

清潔級雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只，體質量(170.0±20.0)g【購自北京大學醫學部實驗動物科學部，合格證號：SCXK(京)2016-0010】。飼養于北京大學醫學部實驗動物科學部的屏障環境中【合格證號：SYXK(京)2016-0041】。飼喂全價清潔級大小鼠繁殖飼料，由北京科澳協力飼料有限公司生產【合格證號：SYXK(京)2014-0010】。

隨機分為兩組，每組20只。對照組平均體質量為(177.2±20.0)g,采用普通方法除去卵巢；實驗組平均體質量為(176.6±20.0)g，采用新方法除去卵巢。兩組體質量差異不顯著(P>0.05)。

1.2 實驗材料

1 mL注射器(BD舒銳U40)、青霉素注射粉劑(中牧獸藥1g 160萬單位)、氯化鈉(齊魯藥業100 mL:0.9 g)、瑞氏-姬姆薩染盒(Solarbio)、自制小鉤見圖1。

注：此小鉤用銅絲彎成，上方為手握圓環，下方為小彎鉤Note:This small hook is made of copper wire, with ahand-held ring at the top and a small curved hook below圖1 自制小鉤Fig.1 homemade hook

1.3 實驗方法

采用兩種手術方法切除大鼠的卵巢。對照組：術前大鼠禁食，手術時先從大鼠背部用眼科鑷取出卵巢，對子宮角與卵巢雙側結扎后用眼科剪剪除卵巢，最后用青霉素肌肉注射，手術過程見圖2。實驗組方法是：術前大鼠不禁食，手術時先從大鼠背部用自制小鉤取出卵巢，單側結扎子宮角后用燒燙的眼科剪切除卵巢，最后用青霉素腹腔注射，手術過程見圖3。

圖2 對照組大鼠雙側卵巢背部切除術過程示意圖Fig.2 Schematic diagram of bilateral experimental ovary dorsal resection of the rats in control group

圖3 實驗組大鼠雙側卵巢背部切除術過程示意圖Fig.3 Schematic diagram of bilateral ovary dorsal resection in experimental rats

1.4 實驗指標

1.4.1手術耗時:從備皮開始計時，直至傷口縫合結束。

1.4.2術后實驗動物的存活率：

1.4.3術后實驗動物的體質量變化：術后第7天、第14天對存活的實驗動物稱重。

1.4.4陰道涂片觀察：從術后第10天起，每組隨機選5只大鼠進行涂片。每天上午對各組大鼠進行陰道涂片觀察。單手大鼠保定，將排泄物清理干凈，用沾有0.9%氯化鈉溶液的棉簽輕緩的插入大鼠的陰道，順時針轉動，然后將棉簽抽出，進行瑞氏-姬姆薩染色，顯微鏡下觀察細胞形態的變化。

1.5 統計學分析

2 結果

2.1 手術過程

如圖4所示，用眼科鑷和自制小鉤都能順利取出卵巢，對照組創口面積更大，出血更多，自制小鉤操作更方便。

圖4 兩種方法取出卵巢的對比圖Fig.4 Comparison of two methods to remove the ovary

2.2 檢測指標

兩組大鼠均無死亡，傷口沒有裂開，沒有感染。但實驗組傷口分泌物更少些(表1)。

新手術方法所需時間為(8.0±1.2 )min,原方法所需時間為(10.3±1.6 )min。與對照組相比，實驗組手術時間明顯減少(p<0.05)。

從表1可以看出，術后兩組大鼠體質量都有增加，但實驗組大鼠體質量一直高于對照組(P<0.05)。

表1 兩種手術方法的檢測指標比較圖Table 1 Comparison of detection indicators for the two surgical methods

3 結論

實驗大鼠雙側卵巢摘除手術在有關研究中應用普遍，因此有必要對其手術方法進行改進。在本次實驗中，兩種方法都能達到目標。但新方法手術時間縮短，術后動物恢復的更快更好。新方法的手術時間縮短原因在于：(1)采用了自制小鉤，縮短了尋找、取出卵巢的時間；(2)創口更小，有利于減少切開和縫合的時間；(3)手術過程中單側結扎子宮角，不用剝離周圍脂肪組織。術后動物恢復的更快更好，其原因在于：(1)實驗組手術前實驗動物不禁食；(2)實驗組手術創口小，出血少；(3)術后腹腔注射高劑量青霉素，對動物的保護效果更好。

本次實驗結果表明，實驗大鼠雙側卵巢摘除手術可采用自制小鉤將卵巢從腹腔內取出后單側結扎子宮角，再用眼科剪剪除卵巢，最后用青霉素腹腔注射。此方法可以減小創口面積和出血量，加快大鼠術后的恢復。