常見動物疫病監測采樣原則、方法及存在的問題

吳曉輝 松溪縣動物疫病預防控制中心 福建松溪 353500

隨著國民經濟的增長，人們對畜禽產品消費日益增加，畜牧業也隨之步入規模化、集約化的生產模式，以滿足人們的消費需求。由于受到資源性約束和環境保護的壓力，畜牧業發展存在的問題也日益凸顯。為應對問題，我國畜牧業逐漸向北方及經濟欠發達地區轉移，這就增大畜禽調運頻次，也增加了動物間疫病傳播風險。為防控動物疫病傳播，加強動物疫病監測就顯得尤為重要。

在動物疫病監測中，如果采樣人員如不遵守采樣原則、變更采樣方式，有可能改變試驗結果。為保證監測結果的準確性，以下就常見動物疫病監測采樣的原則、方法及存在的問題進行闡述與分析。

1 一般原則和采樣前的準備工作

1.1 樣品采集所遵循的基本原則 患病動物呈現急性死亡時，要限制移動和嚴禁開放式解剖，確診非為炭疽病后才能進行解剖采樣。在采樣過程中，應該從胸腔到腹腔，先采實質器官后采腔腸器官，選擇無菌采集的方式，避免對外部環境造成污染。要選擇采集病變較為典型、明顯的病料，也可根據診療結果和監測目的采集不同的病料。為保證化驗的準確性，不得采集使用過藥物的動物樣品。如果動物已死亡，應在死后6 h內完成采樣。在采集血樣前，動物需要禁食8 h，再根據檢驗目的和采樣對象來確定采血數量。采樣人員在采樣過程中要做好自身的防護工作，避免感染人畜共患病。采樣結束后要對廢棄物進行集中處理，并對采樣環境進行消毒，避免對周圍生態環境造成污染。采集過程中堅持先排查后采樣、盡早采樣、無菌操作、合理選擇采樣、生物安全防護的原則。

1.2 采樣前的準備工作 在采集樣品之前，工作人員應該熟知動物疫病防控相關的法律法規及專業知識，能夠熟練地掌握各種動物的采樣方法和程序，避免刺激動物而對采樣人員構成威脅。動物衛生監督采樣時，至少要邀請一名動物衛生監督員參與。采樣過程中所使用的器械必須經過嚴格消毒，金屬器械可采用高壓、干烤、煮沸滅菌消毒方法，采樣前需經75%酒精擦拭再用火焰消毒后才能使用；器皿可以用高壓、干熱滅菌或用0.5%～1%碳酸氫鈉煮沸滅菌。采樣用的注射器和針頭盡量使用一次性的，采樣完成后需采取集中無害化處理。

2 采集方法

2.1 血液的采集 動物采血方法較多，可根據不同動物種類采取不同的方法。牛常用尾靜脈采血，羊用頸靜脈采血，豬用前腔靜脈采血，禽類用內翅靜脈采血。采集前需要對采集部位進行清理、消毒、干燥。采集全血樣品，可用已加抗凝劑的真空采血管；采集血清樣品，可用已加促凝劑和分離膠的真空采血管。

2.2 一般組織采集 組織樣品采樣根據化驗需求不同，可分為病原學檢測樣品和組織病理學檢查樣品。組織采樣剝離動物皮膚時可用常規器械；剝離體腔和采集病料要用消毒過的器械，采用無菌操作方法采集，保證病料新鮮無污染。病毒分離用的組織塊，要單獨保存于消毒過的容器內。采集組織做病理學檢查的，應采集病變部位與健康部位的交接處，厚度不超0.5 cm，面積1～2 cm2，組織塊應存放于10%福爾馬林溶液中，組織塊與溶液比以1:10為宜，固定時間16～24 h。如果要制作冷凍切片，需將其放置在0～4℃容器中保存，盡快送到實驗室檢查。

2.3 其它樣品采集 在采集其它樣品時，應該注意以下幾個問題。第一，采集尿液樣品應在早上進行，用清潔的容器接取中段尿液。第二，采集呼吸道或咽喉內分泌物要用滅菌的棉拭子，置于磷酸鹽緩沖鹽水（pH7.2～7.4）中低溫保存。第三，采集皮膚樣品要選取病變部位的水皰液或結痂。第四，用吸管吸取腸腔內容物時，要先對腸壁實施燒烙。第五，用棉拭子取泄殖腔樣品時，要插入直腸壁取黏液和糞便；如作為寄生蟲檢測用樣品，糞便越新鮮越好。第六，作為衛生或疾病調查采集環境樣品時，應采集通風管、下水道等有代表性的樣品。第七，重大動物疫病抽樣，應按國家標準執行。

3 樣品的記錄、包裝、保存和運輸

完成采集后，采樣人員要對采集的樣品進行編號并填寫采樣單，采樣單要一式三份，兩份送實驗室，一份留檔保存。采樣單要詳細記錄養殖場、畜主和送檢人的基本信息；發病動物的品種、日齡及數量，動物發病史、臨床癥狀、免疫接種和治療用藥情況；送檢樣品清單、說明及檢驗科目等。

樣品的包裝應該選擇安全、不透水、防漏的容器，每個樣品都要單獨包裝，包裝外表要標注放置方向和粘貼標簽，標記樣品名稱、編號和采樣日期等。采集的樣品經過包裝、表面消毒后從陸路由專人以最快的速度送往實驗室。短時間內無法送達的、24 h內能送達的，應存放在4℃左右的容器中運送；24 h內無法送達的，在不影響化驗結果的前提下可采取冷凍運送。樣品在送檢過程中要緩沖放置，避免劇烈震動。

4 樣品采集、保存、運送中存在的問題

在樣品采集、保存、運送過程中，常存在如下問題，應注意并避免導致相關問題的因素。（1）血樣溶血：主要原因有采血操作不熟練造成局部血腫、采集血腫部位血液，血液內混入酒精或血液未凝固就送檢，運送過程中振蕩劇烈等。（2）血樣腐敗變質：置于常溫下過久、保存或運送過程未冷藏。（3）血樣血清不析出：用塑料試管采血、外界氣溫低、血液靜置時間不足就進行離心操作。（4）棉拭子采集問題：采集咽喉和泄殖腔拭子時，棉拭子未貼合咽喉或泄殖腔壁，未采集到分泌物或采集過少、保存液選擇不正確。（5）組織病料采集問題：采集的組織病料不典型、不新鮮、已污染，不同的組織病料未單獨包裝。此外，還存在樣品送檢清單填寫模糊的問題。