細(xì)胞角蛋白19血清片段211、丙酮酸脫氫酶復(fù)合物E1α亞單位在非小細(xì)胞肺癌患者中的表達(dá)及意義

姚啟濤，魯馮洋，陳淑芳，陳玲玲

(安徽省臨泉縣人民醫(yī)院，安徽 阜陽 236400)

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)在我國發(fā)病率較高，且多數(shù)確診已為晚期[1]，而放化療是延長晚期NSCLC類患者生存時間的首選治療方案[2]。隨著分子生物學(xué)研究的不斷深入，目前找尋時效性、準(zhǔn)確性較高的靶向分子標(biāo)志物來準(zhǔn)確預(yù)測患者病情及預(yù)后是指導(dǎo)臨床治療及改善NSCLC患者預(yù)后的關(guān)鍵[3]。有研究顯示，細(xì)胞角蛋白19片段211(Cyfra211)是在多種惡性病變的臨床診斷中起著重要作用[4]。既往文獻(xiàn)報道，丙酮酸脫氫酶復(fù)合物E1α亞單位(PDHA1)可調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝過程，增強腫瘤細(xì)胞的遷移能力，提高化療藥物的耐藥性[5]，但其在NSCLC中的表達(dá)及作用機制研究較少。本研究旨在分析Cyfra211、PDHA1在NSCLC患者中的表達(dá)及臨床意義，為NSCLC患者臨床治療指導(dǎo)及預(yù)后評估提供更好的臨床參考價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2017年3月至2020年3月我院收治的139例NSCLC患者癌組織標(biāo)本(癌組織組)及遠(yuǎn)離癌組織3 cm的癌旁正常組織(對照組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國非小細(xì)胞肺癌免疫檢查點抑制劑治療專家共識(2019年版)》中NSCLC診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；②納入研究前1個月內(nèi)均未接受放化療治療，未服用過影響激素水平的藥物；③術(shù)后石蠟標(biāo)本保存完善，并且待測組織范圍足夠。排除標(biāo)準(zhǔn)：①除NSCLC外存在其他癌病者；②存在精神障礙者；③資料不完整或中途失訪者；④并發(fā)嚴(yán)重心律失常、心肌梗死、腦梗死。139例患者中男87例，女52例；年齡52～81歲[(61.11±5.49)歲]；病程0.8～2.2年[(1.35±0.33)年]。

1.2 方法Cyfra211、PDHA1檢測方法：蠟塊通過切片機連續(xù)切片，組織厚度 4 μm，分別做Cyfra211、PDHA1免疫組化染色。均經(jīng)甲醛溶液固定，石蠟包埋，載玻片泡酸，高溫滅菌PBS 緩沖液洗滌、及多聚賴氨酸涂片等處理，再經(jīng)DAB顯色，蘇木精復(fù)染，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。最后在顯微鏡下觀察Cyfra211、PDHA1表達(dá)情況，并拍片保存。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)細(xì)胞核著色進(jìn)行評分，評分標(biāo)準(zhǔn)由染色強度和染色細(xì)胞百分比綜合評定[7]。0、1、2、3、4分所對應(yīng)陽性細(xì)胞比例分別為≤5%，5%～25%，25%～50%，50%～75%，75%以上；染色強度評分：0、1、2、3分對應(yīng)的染色程度分別是未染色、淡黃色、棕黃色及棕褐色。染色指數(shù)=上述兩項評分之和，>3分為陽性，≤3分為陰性。

1.4 隨訪通過門診復(fù)查+電話隨訪記錄患者2年預(yù)后情況。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述，比較采用t檢驗；計數(shù)資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗；采用ROC曲線分析對預(yù)后的預(yù)測價值。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中Cyfra211、PDHA1表達(dá)情況癌組織Cyfra211陽性表達(dá)率及PDHA1陰性表達(dá)率高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 不同組織中Cyfra211、PDHA1表達(dá)情況比較 [n(%)]

2.2 不同臨床特征NSCLC患者Cyfra211、PDHA1表達(dá)低分化、Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC患者Cyfra211陽性率及PDHA1陰性率均更高(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床特征NSCLC患者Cyfra211、PDHA1表達(dá) [n(%)]

2.3 Cyfra211、PDHA1陽性及陰性表達(dá)NSCLC患者2年預(yù)后分析139例患者中死亡84例，生存55例。死亡患者Cyfra211陽性率、PDHA1陰性率均高于生存患者(P<0.05)。見表3。

表3 Cyfra211、PDHA1陽性及陰性表達(dá)的患者2年預(yù)后分析 [n(%)]

2.4 患者預(yù)后預(yù)測價值分析Cyfra211、PDHA1聯(lián)合檢測AUC、靈敏度、特異度均顯著高于Cyfra211、PDHA1任一項單一檢測(P<0.0.5)。見表4、圖1。

表4 患者預(yù)后預(yù)測價值分析

圖1 Cyfra211、PDHA1聯(lián)合檢測NSCLC患者2年預(yù)后的ROC曲線

3 討論

NSCLC是呼吸系統(tǒng)常見腫瘤，5年生存率極低[8]。相關(guān)調(diào)查研究資料表明，吸煙等不良生活習(xí)慣與NSCLC的發(fā)生有著密不可分的關(guān)系，故盡早診斷、及時指導(dǎo)治療改善患者預(yù)后是臨床研究熱點及關(guān)鍵[9]。現(xiàn)臨床多依據(jù)分子生物標(biāo)志物來預(yù)測患者的生存率，并對患者實施針對性治療方案，以延長患者生存期。

Cyfra211主要高表達(dá)于鱗癌中，且其表達(dá)水平升高則提示疾病進(jìn)展，或是存在預(yù)后不良的可能[10，11]。PDHA1是位于Xp22.12的基因之一，全長17.5kb，其關(guān)鍵作用在于調(diào)控限速酶PDHc的活性，減緩細(xì)胞生長、增殖等過程[12，13]。既往相關(guān)文獻(xiàn)報道，NSCLC患者血清中Cyfra211的表達(dá)濃度與疾病進(jìn)展成正相關(guān)[14～16]。研究指出，PDHA1在多種疾病中下調(diào)，其可作為一個惡性腫瘤的保護(hù)因子，在組織中表達(dá)下降，則與患者病情進(jìn)展、預(yù)后不良有著密切聯(lián)系[17]。本次研究中，癌組織Cyfra211陽性表達(dá)率及PDHA1陰性表達(dá)率高于對照組，由此提示，Cyfra211表達(dá)上調(diào)及PDHA1的表達(dá)下調(diào)可能與NSCLC疾病的發(fā)生有著密切聯(lián)系。且對比不同病理特征患者數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，低分化、Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC患者Cyfra211陽性率，PDHA1陰性率均更高，認(rèn)為Cyfra211表達(dá)過高、PDHA1表達(dá)過低對腫瘤細(xì)胞的增殖分化有著促進(jìn)作用，加速了疾病的進(jìn)展，增加了癌變的惡性程度，進(jìn)一步證實了Cyfra211、PDHA1與NSCLC疾病發(fā)生、進(jìn)展的密切性。

深入分析隨訪資料可知，139例患者中有84例死亡，55例生存，且預(yù)后死亡的NSCLC患者Cyfra211陽性率、PDHA1陰性率均高于預(yù)后生存患者，可見Cyfra211陽性表達(dá)及PDHA1陰性表達(dá)的患者死亡的風(fēng)險更大。分析其原因：Cyfra211表達(dá)上調(diào)及PDHA1表達(dá)降低，細(xì)胞內(nèi)的活性氧水平也會隨之下降，影響Akt激酶信號通路，使得細(xì)胞的生長周期及細(xì)胞凋亡速度加快，促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展[18～20]。進(jìn)一步ROC曲線分析示：Cyfra211、PDHA1聯(lián)合檢測靈敏度、特異度均顯著高于單一檢測，再次證實了Cyfra211、PDHA1在NSCLC患者病情、預(yù)后評估中的重要作用。

綜上所述，Cyfra211、PDHA1C聯(lián)合檢測在NSCLC病情、預(yù)后評估中的作用更佳，可為NSCLC患者臨床治療指導(dǎo)及預(yù)后評估提供更好的參考依據(jù)。