抗核糖體P蛋白抗體、抗中性粒細胞胞漿抗體在系統性紅斑狼瘡患者中的表達及臨床意義

郭駿戈，董玉琳，曹向紅，高 輝，王勝虎，許麗虹，王 萍

(昆明市延安醫院，云南 昆明 650051)

系統性紅斑狼瘡屬于自身免疫性疾病的一種，常可造成多系統損害，最常累及的器官為腎臟及皮膚，且常易同其他類型的結締組織疾病重疊或并發惡性腫瘤[1]。目前對于該疾病的病因、機制尚不明確，但大部分學者認為該疾病的發病與遺傳、內分泌、感染、免疫異常等因素有關，是在多種因素的作用下，造成的T淋巴細胞數量及功能降低，引起B細胞的增生，從而使機體產生大量的自身抗體，與抗原結合沉積于皮膚、關節、小血管、腎小球等部位，繼而導致的一系列臨床癥狀[2，3]。但由于系統性紅斑狼瘡的特異性缺乏，因此，臨床早發現、早診斷較為困難[4]。近年來，有研究顯示抗核糖體P蛋白抗體(anti-ribosomal phosphoportein antibodies，ARPA)、抗中性粒細胞胞漿抗體(antineut rophil cytoplasmic antibodies，ANCA)與自身免疫性疾病有關[5，6]。本研究就ARPA、ANCA在系統性紅斑狼瘡患者中的表達及臨床意義進行研究，旨在為臨床工作提供參考新思路，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2018年1月至2021年12月我院收治的系統性紅斑狼瘡患者126例作為研究組，納入標準：①符合系統性紅斑狼瘡臨床相關診斷標準[8]；②所有患者的臨床資料均完整；③所有患者及家屬均知曉本研究并簽署知情同意書。排除標準：①存在其他免疫系統疾病者；②已使用糖皮質激素或免疫抑制劑治療者；③藥物依賴史者。126例患者中男24例，女102例；年齡30～60歲[(42.08±7.92)歲]；通過系統性紅斑狼瘡疾病活動指數(systemiclupus erythematosus disease activity index，SLEDAI)標準對患者是否處于活動期進行評估[7]，其中活動期40例(SLEDAI>9)，非活動期86例(SLEDAI≤9)。另選取同時間段健康體檢人群82例作為對照組，其中男20例，女62例，年齡29～58歲[(41.73±8.25)歲]。兩組年齡、性別等一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2 方法抽取所有受檢者空腹肘靜脈血5 ml，離心(3500 r/min，5 min，r=8 cm)后取分離血清，ARPA、ANCA采用INOVA Diagnostics,Inc.依諾瓦診斷公司抗中性粒細胞胞漿抗體(間接免疫熒光法)與歐蒙醫學實驗診斷股份公司印跡法自動操作儀進行檢測采用間接熒光免疫法(indirect immuno fluorescence，IIF)檢測所有研究對象的血清ARPA、ANCA，采用滴定平板TM技術和生物薄片馬賽克技術進行檢測；加做系統性紅斑狼瘡陰性對照、胞漿型抗中性粒細胞胞質抗體(c-ARPA、c-ANCA)陽性對照和核周型抗中性粒細胞胞質抗體(c-ARPA、p-ANCA)陽性對照。檢測結果診斷：根據乙醇固定的中性粒細胞基質片，可區分兩種不同抗體的熒光模型。c-ARPA、c-ANCA顯示均勻分布的顆粒型熒光，其中胞核無熒光。c-ARPA、p-ANCA顯示帶狀熒光。而陰性無特殊熒光模型顯示。

1.3 觀察指標①比較研究組與健康組ARPA、ANCA的表達。②比較活動期與非活動期期患者ARPA、ANCA的表達。③統計系統性紅斑狼瘡患者腎損害的發生情況，腎損害的評定標準，滿足以下一項即可：出現血尿或蛋白尿，尿蛋白定量(24 h)超過0.5 g，或定性呈(+ + +)及以上，尿鏡檢可見每高倍鏡視野下紅細胞數超過5 個或者存在細胞管型；經腎活檢確認。分析影響患者腎損害發生的危險因素。

1.4 統計學方法應用SPSS 22.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差表示，比較采用t檢驗或方差檢驗；計數資料以例(百分比)的形式表示，比較采用χ2檢驗；多元Logistic回歸分析影響系統性紅斑狼瘡患者腎損害發生的危險因素。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 研究組與對照組ARPA、ANCA表達比較研究組ARPA、ANCA陽性表達率均高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 研究組與對照組ARPA、ANCA表達比較 (n)。見表1.

2.2 活動期與非活動期期患者ARPA、ANCA表達的比較活動組ARPA、ANCA陽性表達率高于非活動組(P<0.05)。見表2 。

表2 活動期與非活動期期患者ARPA、ANCA表達的比較 (n)

2.3 腎損害組與非腎損害組患者臨床資料比較126例系統性紅斑狼瘡患者中發生腎損害67例，發生率為53.17%。腎損害患者中疾病活動期占比、抗dsDNA抗體陽性占比、ARPA及ANCA表達水平與非腎損害患者比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 腎損害組與非腎損害組患者臨床資料比較 [n(%)]

2.4 系統性紅斑狼瘡患者腎損害發生的影響因素分析疾病活動期、抗dsDNA抗體陽性、ARPA陽性、ANCA陽性為影響系統性紅斑狼瘡患者腎損害發生的獨立危險因素(P<0.05)，見表4。

表4 系統性紅斑狼瘡患者腎損害發生的影響因素分析

3 討論

系統性紅斑狼瘡是一種以多系統損害且伴有多種自身抗體為特征的免疫性疾病，臨床表現復雜，病情遷延，難以治愈，部分系統性紅斑狼瘡患者可自行緩解，或呈“一過性”發作后，病癥經數月可完全消失[9，10]。大多數患者可出現不同程度的皮膚和黏膜損害，骨骼、心臟、呼吸系統、腎臟、神經系統、血液系統等受累，嚴重者可致充血性心力衰竭、肺栓塞等[11]。本病病因至今尚未肯定，考慮與遺傳、免疫異常、性激素、環境等均有一定的關系[12]。多種因素相互作用可致使系統性紅斑狼瘡患者體內T淋巴細胞減少、降低T抑制細胞功能，大量的自身抗體產生，與相應抗原結合后形成免疫復合物，在皮膚、關節、小血管、腎小球等部位沉積而產生各種病理現象[13，14]。

既往研究指出，系統性紅斑狼瘡患者血清中有免疫特異性抗細胞漿抗體的存在，其靶抗原主要為核糖體60S亞基中的P0、P1以及P2三種磷蛋白[15]。臨床將這些磷蛋白抗體命名為ARPA，當血清中的ARPA為陽性表達時，可阻斷延長因子EF-α及EF-2與核糖體之間的相互作用[16]。且有研究往培養的人細胞株中注射微量的ARPA后發現，其能對蛋白的合成造成抑制，并說明磷蛋白上的抗體所識別的決定簇同ARPA結合后能對蛋白合成發揮抑制作用[17]。本研究通過對比健康人群與系統性紅斑狼瘡患者的ARPA水平發現，研究組ARPA陽性表達率高于對照組。盡管ARPA在系統性紅斑狼瘡患者血清中陽性表達率不如其他系統性紅斑狼瘡的標志性抗體高，但由于ARPA對系統性紅斑狼瘡的有著較高的特異性，因此檢測 ARPA對判斷系統性紅斑狼瘡仍具有可行性。且活動組ARPA陽性表達率高于非活動組，證實ARPA參與了系統性紅斑狼瘡的發生、發展過程。

ANCA為針對單核與中性粒細胞胞漿的一種成分：為溶菌酶、蛋白酶3、乳鐵蛋白、髓過氧化物酶、通透性殺菌蛋白以及人白細胞彈性蛋白酶組織蛋白酶等自身抗體的總稱[18]。研究指出，ANCA對于診斷原發性小血管炎有著一定的應用價值，先已被廣泛用在多種血管炎的診斷中，而原發性血管炎為系統性紅斑狼瘡的病理特征之一，故推測ANCA可用于系統性紅斑狼瘡的判斷[19]。本研究中，與正常健康人群相比，系統性紅斑狼瘡患者的ANCA陽性表達率明顯更高。且活動組ANCA陽性表達率高于非活動組，這可能是由于ANCA擴大并維持了白細胞的局部吸引和通過激活中性粒細胞導致中性粒細胞脫顆粒、出現反應性氧分子、釋放蛋白溶解酶等過程，使局部血管受到損害。故推測ANCA可能參與了系統性紅斑狼瘡的發生、發展過程。研究指出，腎臟是系統性紅斑狼瘡的主要靶器官，而腎損害是其常見的并發癥[20]。本研究發現，疾病活動期、抗dsDNA抗體、ARPA、ANCA皆為影響系統性紅斑狼瘡患者腎損害發生的獨立危險因素，但具體效應還待予以進一步研究證實。而通過對ARPA、ANCA進行監測可有效降低系統性紅斑狼瘡患者腎損害的發生風險，為臨床盡早實施針對性治療提供幫助，以阻礙患者病情進展，從而有利于患者預后的改善。但由于本研究樣本含量較小，研究時間較短，針對狼瘡腎損害相關的ANCA的亞型，如MPO、PR3等的分析缺乏一定的隨訪數據，故后續可加大樣本含量，延長研究時間，進一步針對狼瘡腎損害相關的ANCA的亞型分析進行更深入的前瞻性研究，為臨床診治提供更好的參考依據。

綜上，ARPA、ANCA在系統性紅斑狼瘡患者中呈陽性表達，是影響系統性紅斑狼瘡腎損害發生的危險因素，提示ARPA、ANCA可能參患者病情發生、進展，臨床需重視檢測該兩指標，為制定診療工作提供參考資料。