缺氧缺血性腦病新生兒血漿硫化氫水平變化及意義

閔宇懿，劉 璇

1.廣州市第八人民醫(yī)院兒科，廣東 廣州 510000；2.南方醫(yī)科大學，廣東 廣州 510515

新生兒缺氧缺血性腦病（HIE）是指圍生期因羊水異常妊娠期高血壓病、糖尿病、臍帶繞頸等原因引起大腦部分或完全缺氧，腦部血流量減少，導致腦組織缺氧缺血性損傷［1］。HIE是新生兒期常見的一種疾病，發(fā)病率約為活產新生兒的0.3%～0.5%，輕者幾乎不留神經系統(tǒng)后遺癥，而重者可出現(xiàn)神經系統(tǒng)后遺癥或致死，是兒童致殘的常見原因之一［2］。硫化氫（H2S）作為一種新發(fā)現(xiàn)的氣體信號分子，在人體組織中產生的含量相當高，甚至在腦組織中的濃度可達60～170μmol/L［3］。有研究報道，H2S能直接作用于中樞神經系統(tǒng)，具有清除氧自由基、減輕氧化應激、擴張血管、保護神經元等多種效能，并參與腦缺氧缺血再灌注的病理生理過程，現(xiàn)正成為一種有效的細胞保護劑，用于對抗多器官缺血性損傷［4］。本研究觀察50例HIE新生兒血漿H2S水平變化，并探討其與HIE的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

觀察組選取2019年2月—2020年2月在廣州市第八人民醫(yī)院新生兒重癥監(jiān)護病房（NICU）收治的50例HIE新生兒，男性23例，女性27例，胎齡37～40周，出生時體質量為2 100～3 800 g；自然分娩29例，實施剖宮產21例。參照文獻［5］標準，HIE新生兒病情分為輕、中、重度。其中輕度16例，中度23例，重度11例。對照組：選取同時期出生的健康足月新生兒50例，男性24例，女性26例，胎齡37～41周，出生時體質量為2 400～3 900 g；自然分娩27例，實施剖宮產23例。排除感染性疾病及神經系統(tǒng)發(fā)育異常者。兩組新生兒在性別、胎齡、出生時體重及分娩方式等方面具有可比性（P＞0.05）。

1.2 方法

（1）標本采集：兩組患兒出生后24 h內，由專人取股靜脈血3 mL（0.1%肝素抗凝），然后靜置2 h，4℃下以3 000 r／min高速離心10 min，分離出血漿，然后將血漿保存于-70℃冰箱中，待測。（2）血漿H2S含量的測定：采用亞甲藍分光光度法。首先取0.1 mL血漿，然后再加入0.1 mL5%醋酸鋅，使之充分混勻形成醋酸鋅膠體后加入5 mol/L氫氧化鈉（NaOH）溶液溶0.1 mL，于溫度為-18℃的冰箱放置10 min，12 000 r/min速率離心10min，用吸管吸取上清液，然后加0.1 mL0.2%N-二甲基對苯二胺、0.1 mL20%三氯乙酸、加0.01 mL10%硫酸鐵銨，生成亞甲基藍絡合物，用分光光度儀于酶標儀665 nm處檢測其吸光度，最后根據(jù)標準曲線對H2S濃度進行測定。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，采用配對t檢驗、獨立樣本t檢驗及單因素方差分析。兩因素相關分析采用Pearson相關分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

觀察組與對照組新生兒血漿H2S水平分別為（36.75±4.85）μmol/L、（48.66±6.21）μmol/L，組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。觀察組病情輕度、中度、重度新生兒H2S（44.12±4.82） μmol/L、（35.11±3.61） μmol/L、（27.91±7.22）μmol/L，組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。相關性分析顯示，HIE新生兒病情程度與其血漿H2S水平呈負相關（r=-0.93，P＜0.05）

3 討論

HIE是指圍產期窒息導致大腦的缺氧缺血性損害，為新生兒期較嚴重的致死性和神經致殘性疾病，一直是我國新生兒醫(yī)學研究的難題。該病以意識狀態(tài)、反射、肌張力異常為主要表現(xiàn)，嚴重可致昏迷或去大腦僵直狀態(tài)［6］。由于新生兒HIE臨床表現(xiàn)是隱匿的，因此，在早期階段會被忽視。普遍認為HIE發(fā)病與大腦的缺氧缺血有關，并受到多種神經調節(jié)因子影響，最終導致新生兒大腦受到病理性損害。如果能在新生兒發(fā)病早期及時干預，采取有效措施改善大腦的缺氧缺血，就能大大降低大腦病理性損害，為患兒救助贏得時間。因此，早期診斷和準確的病情判斷，并采取針對性措施進行干預，對患兒預后具有重要意義。

H2S為是一種有著臭雞蛋氣味的有毒氣體，為繼NO和CO之后發(fā)現(xiàn)的第三類氣體信號傳遞分子，也是一種新型的神經調節(jié)因子。在人體組織中參與合成內源性H2S的關鍵酶有兩種，一是胱硫醚-β-合酶，二是胱硫醚-γ-裂解酶。其中胱硫醚-β-合酶主要位于人體的海馬、小腦、大腦皮層和腦干等中樞組織，而胱硫醚-γ-裂解酶大多分布于血管組織中，少量存在顱內［7］。研究表明［8］，中樞神經系統(tǒng)內H2S主要通過鈣離子/鈣調素路徑活化胱硫醚-β-合酶催解L-半胱氨酸及α-丙戊二酸而生成。內源性H2S可以通過調節(jié)ATP敏感性鉀通道舒張血管平滑肌，擴張腦血管，改善腦血流量；還可以下調絲裂原活化蛋白激酶的活性，抑制Bcl-2蛋白廣泛表達，激活含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（MAPK）活性，阻止血管平滑肌細胞增殖，加速細胞凋亡，從而抑制血管重塑。同時，H2S可通過清除氧自由基、抗氧化應激及KATP/PKC/ERK1/2/Hsp90途徑參與中樞神經元的保護［9］。研究報道［10］，使用外源性H2S可防止大腦缺氧缺血時的神經元損害，改善大腦循環(huán)，對中樞神經元具有保護作用。這可能為大腦缺氧缺血引起損傷的患者提供一種新的治療方案。

當顱腦損傷后，機體就會處于應激狀態(tài)，胱硫醚-β-合酶的底物半胱氨酸就會處于相對生成不足狀態(tài)，導致胱硫醚-β-合酶生成不足，而胱硫醚-β-合酶則是中樞神經系統(tǒng)產生H2S的關鍵酶，因此腦內生成H2S含量就會明顯減少。顱腦損傷后，H2S在參與抗氧化應激、炎癥和凋亡等保護作用作用過程中也會被消耗過多，實際上腦組織H2S含量減少。同時，當大腦受到損傷時就會產生大量NO，與胱硫醚-β-合酶的亞鐵血紅素結合，從而抑制胱硫醚-β-合酶酶的活性，最終導致H2S的生成減少［11］。

本研究表明，新生兒血漿H2S水平降低與HIE發(fā)病有關，其可能參與了HIE發(fā)病的病理生理過程。HIE新生兒出現(xiàn)神經細胞損害可能與血漿H2S明顯降低有關。通過進一步分析發(fā)現(xiàn)，HIE新生兒病情程度與其血漿H2S均呈負相關，證實血漿H2S水平可反映HIE病情的嚴重程度，即血漿H2S水平可作為病情嚴重程度判斷指標之一。

綜上所述，HIE新生兒血漿H2S水平明顯降低，血漿H2S水平可作為病情嚴重程度判斷指標之一。通過對新生兒血漿H2S含量的檢測，有助于早期診斷和病情判斷，以便早期采取有效措施預防疾病進展及術后并發(fā)癥的發(fā)生，對HIE防治具有一定意義。