從2名幼兒的血液中培養(yǎng)出空腸彎曲菌空腸亞種的分離與鑒定

聶娟娟，馬 爽，林 鏗，王槐堂

1.廣東省廣州市花都區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣東廣州 510800；2.湖北健康職業(yè)學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)系，湖北咸寧 437000

血液細(xì)菌培養(yǎng)是診斷血流感染的重要依據(jù)，其中的病原菌有許多種，但文獻(xiàn)報(bào)道的空腸彎曲菌空腸亞種少見。本院分別在2020年3月2日、4月9日從2例住院幼兒血液中培養(yǎng)出空腸彎曲菌空腸亞種菌株，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

病例1，女，23 d，因“腹脹2 d”于2020年3月2日16時(shí)5分入住新生兒科。體格檢查：體溫36.8 ℃，脈搏136次/分，呼吸頻率50次/分，血壓72/36 mm Hg。神志清醒、反應(yīng)可，無脫水征，全身皮膚欠紅潤，中度黃染，前囟平軟，張力不高。呼吸不促，雙肺呼吸音粗，未聞及啰音。心率136次/分，律齊，各瓣膜未聞及雜音。腹脹明顯，見腹壁靜脈顯露，未捫及包塊，肝肋下3 cm，脾觸診不滿意，腸鳴音正常。四肢肌張力正常。輔助檢查：入院后查胸片示心肺未見明顯異常，腹部平片示腸功能紊亂。血常規(guī)：白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC) 9.38×109/L，中性粒細(xì)胞比例(NEUTR) 15.9%，淋巴細(xì)胞比例(LYMPHR) 64.1%，單核細(xì)胞比例13.5%，嗜酸性粒細(xì)胞比例5.8%，嗜堿性粒細(xì)胞比例0.2%，未成熟粒細(xì)胞比例0.5%。血清總膽紅素228.7 μmol/L，直接膽紅素29.4 μmol/L，間接膽紅素199.3 μmol/L，免疫球蛋白G(IgG) 6.07 g/L，偏低(正常7.0～15.0 g/L)，大便常規(guī)正常，大便潛血陰性，輪狀病毒陰性。患兒腹脹明顯，警惕敗血癥，同時(shí)間送檢血培養(yǎng)，培養(yǎng)出空腸彎曲菌空腸亞種。臨床使用哌拉西林/舒巴坦抗感染治療，患兒3月5日、10日2次血培養(yǎng)均陰性，病情好轉(zhuǎn)，于2020年3月17日辦理出院手續(xù)。

病例2，男，1歲4個(gè)月，因“發(fā)熱39 ℃半天，抽搐1次”于2020年4月9日8時(shí)52分入住兒科。體格檢查：神志清醒，反應(yīng)尚可，呼吸平順，全身皮膚黏膜無黃染，淺表淋巴結(jié)未捫及腫大，前囟平軟，口唇紅，咽充血，雙扁桃體無腫大，雙肺呼吸音粗，未聞及啰音，心律齊，心音有力，無雜音，腹平軟，肝脾觸診不大，腸鳴音正常，雙下肢肢端暖，四肢肌力、肌張力正常，神經(jīng)系統(tǒng)檢查未見陽性體征。血常規(guī)：WBC 8.95×109/L，NEUTR 78.9%，LYMPHR 14.5%，C反應(yīng)蛋白(CRP) 5.79 mg/L。血?dú)夥治觯憾趸?CO2)分壓36.6 mm Hg，氧分壓125.9 mm Hg。甲型流感病毒抗原陰性，乙型流感病毒抗原陰性。降鈣素原(PCT)3.28 ng/mL(<0.5 ng/mL為陰性)，乳酸1.79 mmol/L，葡萄糖9.12 mmol/L，肝功、腎功、心功、免疫五項(xiàng)結(jié)果未見異常。腦脊液生化及常規(guī)未見異常。4月10日查血常規(guī)：WBC 7.35×109/L、NEUTR 60.40%、LYMPHR 31.00%，CRP 42.72 mg/L，PCT 13.38 ng/mL，呼吸道核酸十五項(xiàng)示卡他莫拉菌、人類皰疹病毒陽性。4月14日復(fù)查，CRP<0.50 mg/L，WBC 5.15×109/L、NEUTR 23.50%，PCT 0.57 ng/mL。臨床根據(jù)發(fā)熱、炎癥指標(biāo)升高，提示細(xì)菌感染，采用頭孢曲松治療、補(bǔ)液、退熱及對(duì)癥處理。4月9日的血培養(yǎng)結(jié)果回報(bào)，培養(yǎng)出空腸彎曲菌空腸亞種。患兒退燒，癥狀好轉(zhuǎn)，家長要求辦理出院手續(xù)。因患兒家長拒絕再次抽血送檢，僅有1次血培養(yǎng)結(jié)果。

2 細(xì)菌培養(yǎng)、鑒定及藥物敏感試驗(yàn)

2.1細(xì)菌培養(yǎng) 血培養(yǎng)采用Auto BC120血培養(yǎng)儀(鄭州安圖生物工程股份有限公司)。取陽性瓶內(nèi)懸液直接涂片革蘭染色(珠海貝索公司)，鏡下可見革蘭陰性、形態(tài)彎曲、螺旋樣菌體；轉(zhuǎn)種血瓊脂平板(廣州市迪景微生物科技有限公司)和巧克力瓊脂平板(鄭州安圖生物工程股份有限公司)，放置在37 ℃及5% CO2(CO2產(chǎn)氣袋，杭州濱和微生物試劑有限公司)環(huán)境中，培養(yǎng)24 h無肉眼可見菌落，取原始劃線處生長物涂片革蘭染色，鏡下見形態(tài)彎曲、螺旋樣革蘭陰性菌。繼續(xù)5% CO2環(huán)境中孵育至48 h，血瓊脂平板和巧克力瓊脂平板上出現(xiàn)針尖大小、圓形、濕潤菌落，涂片革蘭染色，見形態(tài)彎曲、螺旋樣陰性菌。平板生長物在42 ℃的5% CO2環(huán)境中培養(yǎng)生長良好，在25 ℃的5% CO2環(huán)境中培養(yǎng)48 h不生長。

2.2菌種鑒定 2株菌在血平板、巧克力平板(無添加抗菌藥物)生長，菌落圓形、凸起、不溶血，48 h菌落細(xì)小，延長孵育時(shí)間菌落增大。觸酶試驗(yàn)和氧化酶試驗(yàn)均陽性，馬尿酸鹽試驗(yàn)陽性，經(jīng)Api CAMPY條(法國生物梅里埃公司)鑒定為空腸彎曲菌空腸亞種，Vitek 2 Compact全自動(dòng)生化鑒定儀(法國生物梅里埃公司)使用NH卡鑒定為空腸彎曲菌空腸亞種，用Vitek MS全自動(dòng)微生物質(zhì)譜檢測系統(tǒng)(法國生物梅里埃公司)鑒定為空腸彎曲菌空腸亞種[1]。2株菌在25 ℃不生長，在42 ℃生長良好。

2.3藥物敏感試驗(yàn) 根據(jù)文獻(xiàn)[2]，采用紙片擴(kuò)散法對(duì)紅霉素、環(huán)丙沙星和四環(huán)素進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)。用生理鹽水直接菌落懸液法制備0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)菌懸液，使用含5%綿羊血的MH培養(yǎng)基(采用杭州濱和微生物試劑有限公司生產(chǎn)的MH干粉，加入綿羊血自制)，在5% CO2、42 ℃環(huán)境下孵育24 h。病例1菌株，其紅霉素抑菌環(huán)直徑19 mm為敏感(敏感≥16 mm)；病例2菌株，其紅霉素抑菌環(huán)直徑40 mm為敏感，2株菌四環(huán)素和環(huán)丙沙星均無抑菌環(huán)，為耐藥(四環(huán)素抑菌環(huán)≤22 mm為耐藥；環(huán)丙沙星抑菌環(huán)≤20 mm為耐藥)。而多西環(huán)素的藥物敏感試驗(yàn)需使用最小抑菌濃度法檢測，此2株菌未作檢測。

3 討 論

空腸彎曲菌是一種革蘭陰性的微嗜熱細(xì)菌，也是一種常見的食源性致病菌。彎曲菌在發(fā)展中國家常常從有/無腹瀉的患者中分離到，大部分有癥狀的彎曲菌感染發(fā)生在嬰兒和兒童早期，發(fā)病率隨年齡增長而降低。嬰幼兒時(shí)期發(fā)病率最高，感染者可能無癥狀，新生兒僅50%出現(xiàn)發(fā)熱，腋溫>37.8 ℃，且發(fā)熱可能與脫水等有關(guān)。幼兒反復(fù)接觸細(xì)菌會(huì)導(dǎo)致炎癥，在短期內(nèi)，導(dǎo)致吸收不良、口服疫苗失敗、認(rèn)知延遲和5歲以下兒童病死率增加[3]。彎曲菌感染以胃腸道最常見，其引起腹瀉的具體過程未完全明確，多發(fā)生于<5歲兒童或青少年中，尤其是嬰幼兒[4]。

空腸彎曲菌是引起細(xì)菌性腹瀉的主要因素，它作為一種人畜共患病的病原菌在動(dòng)物身上流行，分布于大多數(shù)溫血?jiǎng)游铮虼酥饕膫鞑ネ緩绞鞘吃葱愿腥荆ㄟ^肉類產(chǎn)品特別是家禽，也可通過污染食物、牛奶和水經(jīng)口傳播，被感染的人和動(dòng)物糞便中的活菌可污染環(huán)境，常因食品、牛奶或水的污染而引起爆發(fā)，人際傳播罕見，死亡也很罕見，可能會(huì)發(fā)生在年齡小或者免疫功能低下的患兒[5-6]。空腸彎曲菌腸炎可引起發(fā)熱、腹部絞痛和腹瀉，還可引起腸外感染，如菌血癥、尿路感染等，免疫功能低下者可能發(fā)生持續(xù)性腹瀉和菌血癥[7],但在免疫功能正常的患者中通常具有自限性。一般從感染到出現(xiàn)癥狀的潛伏期長達(dá)72 h，感染通常在1周內(nèi)消退[3]。同時(shí)空腸彎曲菌的感染是致命的，尤其是在幼兒中，而空腸彎曲菌罕見血流感染為遷延性，伴反復(fù)發(fā)熱，感染來源不明確，主要侵犯免疫缺陷患者。此次本院檢出的2例患兒，1例患兒發(fā)熱抽搐，另1例患兒腸功能紊亂并有低IgG血癥，可能因?yàn)?例患兒年齡小，機(jī)體抵抗力差，免疫功能低下，從而導(dǎo)致空腸彎曲菌趁機(jī)而入引起菌血癥。菌血癥發(fā)生率占腸道感染患者的1.5‰，老年人發(fā)病率最高，由空腸彎曲菌感染導(dǎo)致的死亡不常見[8]。

短期內(nèi)從2例幼兒血液中培養(yǎng)出空腸彎曲菌空腸亞種，比較少見，需要重視此菌引起的血流感染。由于細(xì)菌培養(yǎng)鑒定需要時(shí)間，臨床采用了經(jīng)驗(yàn)用藥，需要注意如患兒家長拒絕抽血做細(xì)菌培養(yǎng)復(fù)查，應(yīng)重視與患兒家屬的溝通。病例1入院后經(jīng)驗(yàn)性給予紅霉素抗感染治療后，病情未加重，情況好轉(zhuǎn)，血培養(yǎng)陽性后予以“哌拉西林/舒巴坦”抗感染對(duì)癥治療，癥狀也無反復(fù)，狀況良好；病例2入院后在兒科重癥監(jiān)護(hù)病房給予頭孢曲松抗感染、補(bǔ)液、退熱等對(duì)癥處理，病情未加重，之后轉(zhuǎn)入兒科一區(qū)繼續(xù)頭孢曲松抗感染及對(duì)癥治療后患兒熱退，病情好轉(zhuǎn)。從這2例患兒癥狀好轉(zhuǎn)看出，空腸彎曲菌血流感染及時(shí)診治效果較好。臨床上空腸彎曲菌引起的感染性疾病，往往由于病原菌檢測困難、診斷不明確而延誤治療。同時(shí)，也提示了臨床微生物室應(yīng)具備鑒定的條件，充分考慮到部分自動(dòng)化鑒定系統(tǒng)不能鑒定此菌，藥物敏感試驗(yàn)也需要手工完成，才能為臨床提供明確的鑒定結(jié)果。

藥物敏感試驗(yàn)對(duì)于流行病學(xué)監(jiān)測、感染經(jīng)久不愈、嚴(yán)重感染治療有指導(dǎo)作用，空腸彎曲菌大多數(shù)菌株對(duì)多種抗菌藥物敏感，尤其是慶大霉素、紅霉素和氯霉素[9-10]，其對(duì)紅霉素的耐藥率較低。