饑餓條件下活性氧通過(guò)PINK1/Parkin通路調(diào)控人牙周膜細(xì)胞的線(xiàn)粒體自噬

范智博 金珂 李勝鴻 徐潔 徐曉梅

1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院正畸科，瀘州 646099；2.綿陽(yáng)市中心醫(yī)院口腔科，綿陽(yáng) 621099

人牙周膜細(xì)胞（human periodontal ligament cell，hPDLC）是正畸牙移動(dòng)中對(duì)正畸力刺激做出應(yīng)答的主角，是引起牙周組織改建從而實(shí)現(xiàn)牙的移動(dòng)的基石。正畸牙移動(dòng)過(guò)程中，正畸力的作用將會(huì)使壓力側(cè)的牙周膜初期出現(xiàn)壓縮，血流減少[1-2]。研究[3]表明在這個(gè)過(guò)程中，由于壓力側(cè)血管的壓縮，將會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)紊亂，進(jìn)而減少hPDLC 的消化及代謝，從而為hPDLC 營(yíng)造一個(gè)營(yíng)養(yǎng)匱乏的環(huán)境，而這種營(yíng)養(yǎng)缺乏的環(huán)境可進(jìn)一步誘導(dǎo)自噬的發(fā)生。

自噬作為細(xì)胞針對(duì)應(yīng)激和防御的一種調(diào)控機(jī)制，在真核生物細(xì)胞內(nèi)廣泛存在，其在細(xì)胞的物質(zhì)代謝、免疫、生存和死亡等進(jìn)程中扮演重要角色[4-6]。在哺乳動(dòng)物體內(nèi)自噬又可分為巨自噬、微自噬和分子伴侶介導(dǎo)的自噬[7]，其中線(xiàn)粒體是巨自噬范圍內(nèi)的一種選擇性自噬，其對(duì)細(xì)胞命運(yùn)確定和應(yīng)激反應(yīng)至關(guān)重要。

在前期體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中已證實(shí)正畸力作用下壓力側(cè)血管管腔壓縮，牙周組織中自噬因子有過(guò)表達(dá)的現(xiàn)象，且隨力加載時(shí)間的持續(xù)而發(fā)生規(guī)律性變化[8-9]。由此可見(jiàn)自噬參與了正畸牙壓力側(cè)的牙周組織改建，但其具體機(jī)制還尚未明確。PINK1/Parkin通路作為哺乳動(dòng)物線(xiàn)粒體自噬的一條重要通路，也是目前在真核細(xì)胞中研究較為成熟的自噬信號(hào)通路[10]，而PINK1/Parkin通路介導(dǎo)的線(xiàn)粒體自噬與許多因素有關(guān)[11]，其中以活性氧（reactive ox‐ygen species，ROS）最具特點(diǎn)[12]，而營(yíng)養(yǎng)匱乏又是引起ROS劇增的重要原因[13]。

由此推測(cè)，正畸力作用所造成的壓力側(cè)營(yíng)養(yǎng)匱乏環(huán)境將引起ROS 的增加，從而激活PINK1/Parkin 通路，并進(jìn)一步調(diào)控hPDLC 線(xiàn)粒體自噬的發(fā)生。故本研究利用Earle’s 平衡鹽溶液（Earle’s balanced salt solution，EBSS）模擬體外的饑餓環(huán)境，探討?zhàn)囸I條件下PINK1/Parkin 通路在hPDLC線(xiàn)粒體自噬中的調(diào)控作用及ROS 在PINK1/Parkin通路激活過(guò)程中所扮演的角色，為理解正畸牙移動(dòng)過(guò)程中壓力側(cè)自噬產(chǎn)生的相關(guān)機(jī)制提供了更多的信息。

1 材料和方法

1.1 主要試劑和儀器設(shè)備

JB-2 型恒溫磁力攪拌器（上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司），流式細(xì)胞儀（北京安諾倫生物科技有限公司），倒置相差顯微鏡及成像系統(tǒng)（奧林巴斯公司，日本），超聲波細(xì)胞粉碎儀（上海蘭儀實(shí)業(yè)有限公司），逆轉(zhuǎn)錄儀、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）儀（賽默飛世爾科技有限公司，美國(guó)），酶標(biāo)儀、顯影儀（Bio-Rad 伯樂(lè)公司，美國(guó)）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞的獲取、培養(yǎng)及分組 收集西南醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院14～20歲因正畸治療而需拔除的前磨牙，牙體無(wú)明顯齲壞及牙周炎，患者及家屬知情同意，且本項(xiàng)目獲西南醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，倫理審批號(hào)：20190916001。

將獲取的正畸牙置于含20%、15%、10%青-鏈霉素的磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）中梯度沖洗，用手術(shù)刀片刮取根中1/3 處牙周膜，并置于培養(yǎng)瓶中，待2 h 貼壁后加入培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)1周后見(jiàn)紡錘形、長(zhǎng)梭形細(xì)胞從組織邊緣游出，則視為培養(yǎng)成功。當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%時(shí)，采用一傳二的方式用胰酶消化并傳代，本實(shí)驗(yàn)主要采用第3～4代的hPDLC。

隨機(jī)選擇生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在探尋饑餓時(shí)間對(duì)hPDLC 自噬的影響時(shí)，Control 組用含有 10%FBS 的 Dulbecco 改良 Eagle 培養(yǎng)基 （Dul‐becco’s modified Eagle medium，DMEM） 處理，實(shí)驗(yàn)組分為5組：采用EBSS溶液分別處理15 min、30 min、1 h、2 h、4 h。在探究饑餓條件下ROS對(duì)自噬的影響時(shí)，Control 組用含有10%FBS 的DMEM 處理，實(shí)驗(yàn)組分為3 組：NAC 組用5 mmol·L?1NAC 預(yù)處理 1 h 后更換為普通培養(yǎng)基；EBSS+NAC 組 用 5 mmol·L?1NAC 預(yù) 處 理 1 h 后 ，再用 EBSS 處理 30 min；EBSS 組僅用 EBSS 處理30 min。在探究饑餓條件下ROS 是否通過(guò)PINK1/Parkin 通路引起線(xiàn)粒體自噬時(shí)，Control 組用含有10%FBS的DMEM 處理，實(shí)驗(yàn)組分為3組：CsA 組用 5 μmol·L?1CsA 預(yù)處理 24 h 后，更換為普通培養(yǎng)基；EBSS+CsA 組用 5 μmol·L?1CsA 預(yù)處 理 24 h后，再用EBSS處理30 min；EBSS組僅用EBSS處理30 min。

1.2.2 ROS 及PINK1/Parkin 通路抑制 選擇第3～4代生長(zhǎng)狀態(tài)良好的hPDLSC，采用5 mmol·L?1NAC預(yù)處理 1h 抑制 ROS 生成，采用 5 μmol·L?1CsA 預(yù)處理24 h抑制PINK1/Parkin通路表達(dá)。

1.2.3 透射電鏡觀(guān)察線(xiàn)粒體形態(tài)及線(xiàn)粒體自噬體將各組樣本培養(yǎng)液倒出后加入2.5%戊二醛固定；1 h 后刮下細(xì)胞，離心，棄上清；將管內(nèi)細(xì)胞吹散后移至新的1.5 mL EP 管中，等待其自然沉降1 h后吸去上清液，沿管壁加入1 mL 2.5%戊二醛，再固定，脫水，包埋，固化。使用萊卡EMUC7 超薄切片機(jī)進(jìn)行切片（70 nm），切片用72%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色后于HT7800 型透射電鏡（80 KV）下進(jìn)行觀(guān)察線(xiàn)粒體形態(tài)及線(xiàn)粒體自噬體。

1.2.4 線(xiàn)粒體和溶酶體熒光染色法檢測(cè)線(xiàn)粒體及溶酶體變化 將各組細(xì)胞在吸棄原培養(yǎng)液后使用PBS溶液漂洗，分別加入37 ℃預(yù)溫育的線(xiàn)粒體紅色熒光探針（Mito Tracker Red CMXRos）和溶酶體綠色熒光探針（Lyso Tracker Green）染液；水平搖床上混勻后，37 ℃、5%CO2避光孵育30 min；孵育結(jié)束后，加入37 ℃預(yù)熱的PBS 反復(fù)漂洗2 次，在倒置顯微鏡下觀(guān)察紅色熒光和綠色熒光，并采集圖片。

1.2.5 DCFH-DA 熒光探針檢測(cè)ROS 的生成 將各組細(xì)胞原培養(yǎng)液吸棄，并用PBS 溶液漂洗，加入預(yù)溫育的DCFH-DA ROS 染色液；37 ℃、5%CO2避光孵育20 min；孵育結(jié)束后，加入PBS 反復(fù)漂洗（以去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DCFH-DA）2 次，在倒置顯微鏡下觀(guān)察ROS變化情況并收集圖片。

在一個(gè)炎炎的夏日，我做完了所有的作業(yè)，正閑著沒(méi)事兒干的時(shí)候，奶奶走了過(guò)來(lái)，對(duì)我說(shuō)：“陳愉函，你想不想跟奶奶學(xué)煮面條啊？”我興奮地說(shuō)：“想啊想啊！”奶奶于是就把我?guī)У搅藦N房，說(shuō)：“你先和奶奶一起學(xué)會(huì)用灶吧。”

1.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)線(xiàn)粒體膜電位高低 將各組樣本用PBS 漂洗后加入胰酶消化至胞質(zhì)回縮，細(xì)胞形態(tài)變圓，吸棄胰酶，終止消化；加入PBS 反復(fù)吹吸。將細(xì)胞懸液吸入1.5 mL EP 管中；離心，棄上清；再加入預(yù)先制備好的JC-1 線(xiàn)粒體膜電位染色工作液，37 ℃、5%CO2孵育30 min；孵育期間需手動(dòng)搖勻染色液；孵育結(jié)束后，4 ℃離心（1 000 r·min?1） 4 min，沉淀細(xì)胞，吸出上清液；加入JC-1 緩沖液潤(rùn)洗，重復(fù)潤(rùn)洗2 次；4 ℃離心（1 000 r·min?1） 4 min，棄上清，加入適量 JC-1 染色緩沖液，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)線(xiàn)粒體膜電位高低。

1.2.7 RT-qPCR 檢測(cè)hPDLC 自噬相關(guān)基因的表達(dá)按照天根試劑使用說(shuō)明于冰上提取六孔板內(nèi)各組細(xì)胞的總RNA，測(cè)定RNA 純度與濃度后，根據(jù)試劑盒制備成20 μL 熒光定量體系；將其上樣至RT-qPCR 儀上后，在設(shè)定的程序下進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）擴(kuò)增，以檢測(cè)線(xiàn)粒體自噬相關(guān)基因（Tomm20、Timm23）及PINK-1/Parkin 通路表達(dá)水平。其中PCR 引物序列（上海生工生物工程股份有限公司）如下：肌動(dòng)蛋白（β-actin）上游引物序列：5’-CCTGGCACCCAG‐CACAAT-3’，下游引物序列：5’-GCCGATCCA‐CACGGAGTA-3’；Tomm20 上游引物序列：5’-CGACCGCAAAAGACGAAGTGAC-3’，下游引物序列：5’-GCTTCAGCATCTTTAAGGTCAGG-3’；Timm23 上游引物序列：5’-ACACGAGGTGCAGAAGATGACC-3’，下游引物序列：5’-CTGTCAGACCACCTCGTGCTAT-3’；PINK1 上游引物序列：5’-GTGGACCATCTGGTTCAACAGG-3’，下游引物序列：5’-GCAGCCAAAATCTGCGATCACC-3’；Parkin 上游引物序列：5’-CCAGAGGAAAGTCACCTGCGAA-3’，下游引物序列：5’-CT‐GAGGCTTCAAATACGGCACTG-3。

1.2.8 蛋白印跡（Western blot，WB）法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白表達(dá) 提取各組細(xì)胞總蛋白，用BCA 試劑盒進(jìn)行定量，RIPA 配平，制膠。各組蛋白上樣量20 μg，進(jìn)行十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳 （sodium dodecyl sulfate poly‐acrylamide gelelec‐trophoresis，SDS-PAGE） 后轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）上，用5%脫脂牛奶室溫封閉1 h，然后加入一抗4 ℃孵育過(guò)夜，PBS 洗滌3 次，加入二抗室溫孵育1 h，PBS 洗滌3次，暗室中曝光顯影，定影，以檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白 （Tomm20、Timm23） 及 PINK1/Parkin 通路蛋白的表達(dá)水平，最后結(jié)果用Image J 軟件檢測(cè)各組蛋白條帶灰度值，以目的條帶和β-actin 條帶的比值作為蛋白表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

選擇SPSS 22.0 對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料經(jīng)由正態(tài)性檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn)，在滿(mǎn)足正態(tài)分布的前提下，再通過(guò)LSD 檢驗(yàn)對(duì)組間進(jìn)行兩兩比較，采用單因素方差分析對(duì)不同組進(jìn)行比較，將P<0.05 作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，最終數(shù)據(jù)以作圖法呈現(xiàn)。

2 結(jié)果

2.1 饑餓可引發(fā)hPDLC線(xiàn)粒體自噬的發(fā)生

隨EBSS 處理時(shí)間的增加，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果提示：線(xiàn)粒體膜電位出現(xiàn)先降低后升高的現(xiàn)象，在30 min時(shí)線(xiàn)粒體膜電位達(dá)到最低（圖1A）；電鏡下可觀(guān)察到線(xiàn)粒體脊逐漸出現(xiàn)紊亂并出現(xiàn)自噬小體及空泡狀改變，且在EBSS 處理30 min 時(shí)最明顯，而后逐漸改善（圖1B、C）。線(xiàn)粒體和溶酶體熒光染色法結(jié)果顯示：溶酶體熒光強(qiáng)度呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì)，30 min 溶酶體熒光強(qiáng)度最高，同時(shí)線(xiàn)粒體與溶酶體共定位點(diǎn)位也最多（圖1D）。以上結(jié)果表明，饑餓環(huán)境可以引起hPDLC 線(xiàn)粒體自噬的發(fā)生，并隨著饑餓時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，而在EBSS誘導(dǎo)30 min時(shí)線(xiàn)粒體自噬最明顯，故后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇EBSS 饑餓誘導(dǎo)時(shí)間為30 min。

圖1 EBSS對(duì)hPDLC線(xiàn)粒體自噬的影響Fig 1 Effects of EBSS on mitochondrial autophagy in hPDLCs

2.2 ROS 參與饑餓條件下hPDLC 線(xiàn)粒體自噬的發(fā)生

與EBSS 組相比，DCFH-DA 熒光探針檢測(cè)結(jié)果顯示：EBSS+NAC 組ROS 表達(dá)明顯下降（圖2A）；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果提示：線(xiàn)粒體去極化程度減弱（圖2B）；線(xiàn)粒體和溶酶體熒光染色法結(jié)果顯示：EBSS+NAC 組線(xiàn)粒體與溶酶體的共定位點(diǎn)亦減少（圖2C）；RT-qPCR 及WB 實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：EBSS+NAC 組 Timm23、Tomm20 基因及蛋白的表達(dá)出現(xiàn)上調(diào)（P<0.001）（圖2D）。

圖2 饑餓條件下ROS調(diào)控hPDLC線(xiàn)粒體自噬Fig 2 ROS could regulate mitochondrial autophagy of hPDLCs when undernourished

由此可見(jiàn)，饑餓條件下hPDLC 線(xiàn)粒體自噬的表達(dá)會(huì)增加并伴有ROS 的堆積，這提示ROS 與饑餓條件下hPLDC 線(xiàn)粒體自噬可能存在直接關(guān)聯(lián)。而在NAC 抑制ROS 的生成后自噬出現(xiàn)了下調(diào)，說(shuō)明在饑餓條件下ROS 的堆積會(huì)促進(jìn)hPDLC 線(xiàn)粒體自噬的發(fā)生。

2.3 ROS 通過(guò)PINK1/Parkin 通路上游調(diào)控饑餓環(huán)境下hPDLC的線(xiàn)粒體自噬

與EBSS 組相比，DCFH-DA 熒光探針檢測(cè)結(jié)果顯示：EBSS+CsA 組ROS 無(wú)明顯變化（圖3A）；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果提示：EBSS+CsA組線(xiàn)粒體去極化程度減弱（圖3B）；線(xiàn)粒體和溶酶體熒光染色法結(jié)果顯示：EBSS+CsA組線(xiàn)粒體與溶酶體的共定位點(diǎn)亦減少（圖3C）；RT-qPCR 及WB 實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：EBSS+NAC 組中 Timm23、Tomm20 基因及蛋白的表達(dá)出現(xiàn)上調(diào)（P<0.001）的同時(shí)還伴有PINK-1/Parkin 通路的下調(diào)（P<0.001，P<0.05）（圖3D），EBSS+CsA 組PINK1/Parkin 基因及蛋白表達(dá)下調(diào)（P<0.001，P<0.05） 而 Timm23、Tomm20 基因及蛋白的表達(dá)出現(xiàn)上調(diào)（P<0.001，P<0.01）（圖3E、F）。這提示，即使在ROS堆積的情況下抑制PINK-1/Parkin通路后也仍然可以逆轉(zhuǎn)饑餓條件下hPDLC線(xiàn)粒體自噬的發(fā)生。這表明PINK1/Parkin 通路可以調(diào)控饑餓條件下hPDLC 自噬的發(fā)生，且ROS 是通過(guò)在PINK1/Parkin 通路上游發(fā)揮作用從而調(diào)控線(xiàn)粒體自噬。

圖3 饑餓條件下ROS主要通過(guò)PINK1/Parkin通路調(diào)控hPDLC線(xiàn)粒體的自噬Fig 3 ROS mainly regulates mitochondrial autophagy of hPDLCs through PINK1/Parkin pathway when undernourished

3 討論

自噬是細(xì)胞對(duì)外界刺激的適應(yīng)性反應(yīng)，通過(guò)溶酶體降解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)包裹的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞器、蛋白質(zhì)等從而實(shí)現(xiàn)能量的循環(huán)再利用，滿(mǎn)足細(xì)胞微調(diào)的需要新陳代謝和細(xì)胞器的更新。在外界環(huán)境的刺激下，自噬對(duì)于維持細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)態(tài)有著重要的意義[14-15]。

正畸牙的移動(dòng)是牙周組織對(duì)正畸力的適應(yīng)性反應(yīng)，研究[16]表明自噬可能通過(guò)負(fù)向調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)及骨轉(zhuǎn)化從而參與正畸牙的移動(dòng)過(guò)程。本課題組前期研究也證實(shí)了自噬參與了正畸牙移動(dòng)過(guò)程，且呈現(xiàn)出規(guī)律性變化，同時(shí)壓力側(cè)自噬的出現(xiàn)還伴有血管壓縮[9-10]，而壓力側(cè)血管的壓縮又會(huì)引起氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏[17-18]。這表明在牙移動(dòng)的過(guò)程中，牙周組織面臨著機(jī)械力及營(yíng)養(yǎng)匱乏的雙重刺激，而這兩種刺激都是自噬的誘發(fā)源[19-21]。相關(guān)文獻(xiàn)[22]已明確了機(jī)械力在牙移動(dòng)過(guò)程中對(duì)自噬的誘導(dǎo)作用，而對(duì)于營(yíng)養(yǎng)匱乏與自噬的關(guān)系，雖然有研究[19,23]提示營(yíng)養(yǎng)匱乏等應(yīng)激會(huì)刺激細(xì)胞內(nèi)的ROS的增加進(jìn)而引起自噬的發(fā)生，但營(yíng)養(yǎng)匱乏是否是影響了正畸壓力側(cè)自噬的發(fā)生尚還缺乏證據(jù)。

在多種自噬形式中線(xiàn)粒體自噬占據(jù)著重要地位，其介導(dǎo)的線(xiàn)粒體清除在許多過(guò)程中也發(fā)揮重要作用[24]，并且作為ROS 的“始發(fā)站”[25]，線(xiàn)粒體與ROS 有著密切的聯(lián)系。因此筆者推測(cè)，正畸牙移動(dòng)初期的營(yíng)養(yǎng)匱乏狀態(tài)會(huì)引起hPDLC 中ROS的增加，并進(jìn)一步刺激線(xiàn)粒體自噬的發(fā)生，從而為牙的移動(dòng)做鋪墊。本研究證實(shí)了在營(yíng)養(yǎng)匱乏的環(huán)境會(huì)引起hPDLC 線(xiàn)粒體的自噬，并且隨著饑餓時(shí)間的延長(zhǎng)，hPDLC 線(xiàn)粒體自噬出現(xiàn)了先上升后下降的規(guī)律性變化，這與前期體內(nèi)實(shí)驗(yàn)[8-9]結(jié)果一致。這表明在正畸牙移動(dòng)初期，壓力側(cè)血管壓縮所引起的營(yíng)養(yǎng)匱乏對(duì)壓力側(cè)自噬也有刺激作用，且在饑餓處理hPDLC 后出現(xiàn)了ROS 激增并伴有線(xiàn)粒體自噬上調(diào)，而在使用NAC 抑制ROS 產(chǎn)生后，hPDLC 線(xiàn)粒體自噬出現(xiàn)下調(diào)。由此可見(jiàn)，在饑餓環(huán)境下ROS 對(duì)hPDLC 線(xiàn)粒體自噬的發(fā)生起著主導(dǎo)作用。

在ROS 對(duì)線(xiàn)粒體自噬的調(diào)控過(guò)程中，PINK1/Parkin 通路起著重要的作用。有學(xué)者[10,26]認(rèn)為ROS在PINK1/Parkin 通路的上游發(fā)揮作用，進(jìn)而調(diào)控線(xiàn)粒體自噬；還有學(xué)者[27]發(fā)現(xiàn)在敲減PINK1 后，會(huì)引起ROS的累積，從而進(jìn)一步引起自噬的發(fā)生，這說(shuō)明ROS 還可能在PINK1/Parkin 通路下游發(fā)揮作用。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在使用CsA 抑制PINK1/Par‐kin通路后，對(duì)hPDLC 線(xiàn)粒體自噬出現(xiàn)了明顯的下調(diào)，但對(duì)ROS 的表達(dá)無(wú)明顯影響，這提示饑餓環(huán)境下，ROS 主要是在PINK1/Parkin 通路上游發(fā)揮其對(duì)hPDLC線(xiàn)粒體自噬調(diào)控作用（圖4）。

圖4 饑餓條件下ROS 及PINK1/Parkin 通路調(diào)控hPDLC 線(xiàn)粒體自噬示意圖Fig 4 Schematic diagram of mitochondrial autophagy of hP‐DLCs regulated by ROS and PINK1/ Parkin pathway when undernourished

綜上所述，ROS 是在饑餓介導(dǎo)PINK1/Parkin通路激活線(xiàn)粒體自噬的上游發(fā)揮作用，從而參與正畸牙移動(dòng)初期壓力側(cè)穩(wěn)態(tài)的維持。然而這僅為體外實(shí)驗(yàn)，對(duì)于體內(nèi)來(lái)說(shuō)，EBSS 作為常用的饑餓誘導(dǎo)培養(yǎng)基能在一定程度上模擬正畸壓力側(cè)血管壓縮所引起營(yíng)養(yǎng)缺乏的狀態(tài)，但由于壓力側(cè)營(yíng)養(yǎng)匱乏狀態(tài)除了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的缺乏外，還存在著氧的缺乏[28]。故在正畸力的作用所導(dǎo)致的壓力側(cè)營(yíng)養(yǎng)匱乏的環(huán)境與體外EBSS 模擬還尚存在一定差異，故在壓力側(cè)由于營(yíng)養(yǎng)缺乏而引起的線(xiàn)粒體自噬的調(diào)控機(jī)制還需要進(jìn)一步研究和探討。

利益沖突聲明：作者聲明本文無(wú)利益沖突。