灰樹花野生優(yōu)勢(shì)菌株篩選初報(bào)

彭學(xué)文 陶 月 詹云達(dá) 解文強(qiáng) 吳志會(huì)

（唐山市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，河北唐山 063001）

灰樹花Grifola frondosa，又名舞茸，屬擔(dān)子菌亞門 Basidiomycotina、層菌綱 Hymenomycetes、多孔菌目 Polyporales、皺孔菌科 Meruliaceae、樹花菌屬Gri?fola，是一種珍稀食藥用菌[1?2]。灰樹花營(yíng)養(yǎng)豐富，含18 種人體必需的氨基酸和多種有益礦物質(zhì)，有醫(yī)療保健作用，是一種優(yōu)良的食藥用菌[3?4]。當(dāng)前灰樹花的市場(chǎng)需求量逐年上升，但唐山市遷西縣灰樹花栽培品種較單一，加上菌種退化等因素的影響，導(dǎo)致灰樹花產(chǎn)量下降。為此，筆者開展野生灰樹花菌株馴化研究，旨在篩選適合遷西縣氣候的優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)灰樹花菌株，并為灰樹花育種提供種質(zhì)資源。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

（1）供試菌株：試驗(yàn)對(duì)照菌株為遷西3 號(hào)，慶灰151。

供試野生菌株6 株，均為唐山市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所實(shí)驗(yàn)室野外采集分離獲得。詳見表1。

表1 供試野生灰樹花菌株

（2）供試培養(yǎng)基：PDA 加富固體培養(yǎng)基為去皮馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，硫酸鎂1 g，磷酸二氫鉀1 g，瓊脂20 g，pH 自然；栽培料配方為栗木屑40%，棉籽殼42%，麩皮16%，紅糖1%，石膏1%，料水比為1∶0.8，pH自然。

圖1 部分野生灰樹花子實(shí)體生態(tài)照

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 供試灰樹花菌株拮抗試驗(yàn)

將供試菌株兩兩組合，接種于PDA 平板培養(yǎng)基，25 ℃黑暗培養(yǎng)，觀察菌絲接觸區(qū)有無拮抗反應(yīng)。3次重復(fù)。如果檢測(cè)菌株間無帶線出現(xiàn)，表示2個(gè)菌株間親緣關(guān)系較近，需要采用其他方法進(jìn)一步鑒定。如果檢測(cè)菌株間出現(xiàn)拮抗（拮抗線或隆起或溝狀），表示兩菌株間親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。

1.2.2 供試灰樹花菌株在PDA平板上菌絲生長(zhǎng)情況

圖2 部分灰樹花菌株拮抗情況

將對(duì)照菌株和野生菌株轉(zhuǎn)接到PDA 培養(yǎng)基上活化，于25 ℃恒溫暗培養(yǎng)15 d，用打孔器取直徑為5 mm 菌餅接種到新PDA 培養(yǎng)基中央，置25 ℃恒溫暗培養(yǎng)。培養(yǎng)11 d 后觀察菌落生長(zhǎng)情況，并采用“十”字交叉法測(cè)量菌落直徑，每處理設(shè)4個(gè)重復(fù)。

試驗(yàn)計(jì)算菌絲平均生長(zhǎng)速度，觀察記錄菌絲長(zhǎng)勢(shì)。

菌絲生長(zhǎng)速度=（[菌落直徑?菌餅直徑）/2]÷11

1.2.3 供試灰樹花菌株出菇比較試驗(yàn)

栽培袋（17 cm×36 cm×0.005 cm）裝濕料1 kg（折干0.55 kg），100 ℃滅菌12 h 后冷卻，中心軸接種顆粒菌種。發(fā)菌期管理同常規(guī)，出菇采用遷西縣當(dāng)?shù)爻Ｒ?guī)模式地栽覆土出菇。每個(gè)菌株栽培3 畦，每畦36袋（菌棒）。

試驗(yàn)記錄菌絲生長(zhǎng)情況包括菌絲滿袋時(shí)間，接種到子實(shí)體形成時(shí)間，測(cè)定子實(shí)體性狀。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試灰樹花菌株拮抗試驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，8個(gè)灰樹花菌株間兩兩組合均發(fā)生拮抗反應(yīng)，說明供試8個(gè)灰樹花菌株親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。

表2 供試灰樹花菌株拮抗試驗(yàn)結(jié)果

2.2 供試灰樹花菌株菌絲在PDA平板上生長(zhǎng)情況

由表3可知，試驗(yàn)灰樹花菌株菌絲顏色均潔白；從菌絲長(zhǎng)勢(shì)、菌落形態(tài)來看，都均勻，慶灰151 菌株菌絲較稀疏，95 號(hào)、96 號(hào)、98 號(hào)、100 號(hào)、101 號(hào)菌株菌絲生長(zhǎng)旺盛；從菌絲平均生長(zhǎng)速度來看，96 號(hào)菌株生長(zhǎng)速度較慢，且與 88 號(hào)、95 號(hào)、遷西 3 號(hào)、慶灰151菌株差異顯著，生長(zhǎng)速度最快的是慶灰151菌株（4.74 mm/d），其次是遷西3號(hào)菌株、88號(hào)菌株。

表3 供試灰樹花菌株P(guān)DA平板培養(yǎng)菌絲生長(zhǎng)情況

2.3 供試灰樹花菌株出菇試驗(yàn)結(jié)果

由表4 可知，接種到菌絲滿袋時(shí)間最短的是遷西3 號(hào)菌株（22 d），其次是88 號(hào)菌株、98 號(hào)菌株，滿袋用時(shí)最長(zhǎng)的是慶灰151 菌株、95 號(hào)菌株。接種到子實(shí)體形成時(shí)間最短的是遷西3 號(hào)、96 號(hào)菌株、98號(hào)菌株（均為48 d），100號(hào)菌株時(shí)間最長(zhǎng)（為54 d）。

表4 供試灰樹花菌株子實(shí)體特性

子實(shí)體形態(tài)及顏色，所有菌株都是蓮花狀，但遷西3號(hào)菌株、慶灰151菌株、88號(hào)菌株、95號(hào)菌株、96 號(hào)菌株、100 號(hào)菌株色深；葉片大小，96 號(hào)菌株、100 號(hào)菌株葉片較大，但96 號(hào)菌株子實(shí)體屬于中等大小，子實(shí)體最大的為101 號(hào)菌株，其次是遷西3 號(hào)菌株。由表5 可知，產(chǎn)量最高是遷西3 號(hào)菌株，514.3 g/袋，其次是 101 號(hào)菌株，508.0 g/袋，但兩者沒有顯著差異。

表5 供試灰樹花菌株產(chǎn)量比較

3 小結(jié)

拮抗試驗(yàn)表明，所采集野生灰樹花菌株與對(duì)照遷西3 號(hào)及慶灰151 均有拮抗，且野生灰樹花菌株之間也有拮抗，下一步將通過ISSR 和SRAP 進(jìn)一步鑒定他們之間的親緣關(guān)系。供試灰樹花菌株出菇試驗(yàn)結(jié)果，101 號(hào)菌株產(chǎn)量較高，但是顏色淺，96 號(hào)菌株生物轉(zhuǎn)化率為90.96%，較遷西3 號(hào)稍低，葉片較大，色深，適合鮮銷，具有一定的市場(chǎng)前景。

圖1 部分供試灰樹花菌株子實(shí)體