5種紅托竹蓀母種培養(yǎng)基的篩選

唐玲,楊珍,楊仁德,陳波,王曉敏,張欽語,張邦喜

（貴州省土壤肥料研究所，貴州 貴陽 550006）

紅托竹蓀（Dictyophora rubrovolvata）隸屬于擔(dān)子菌門（Basidiomycotina）鬼筆目（Phallales）鬼筆科（Phallaceae）竹蓀屬（Dictyophora）［1］，是我國名貴的山野珍饈，其形態(tài)秀美、清香宜人、味道鮮美、口感脆嫩，深受人們喜愛。紅托竹蓀具有很高的營養(yǎng)價值和藥用價值，富含多種氨基酸和礦質(zhì)元素，高蛋白、低脂肪［2］，具有增強機體免疫力，抗腫瘤［3］、抗氧化［4］、耐缺氧、降血糖、延緩衰老［5-6］以及保護肝臟［7］的作用。紅托竹蓀現(xiàn)已成為貴州省特色珍稀食用菌，可實現(xiàn)人工大規(guī)模栽培，但在栽培過程中也存在一些問題亟需解決，例如菌種生長周期長，一般母種至原種再至栽培種的培養(yǎng)周期大約需要7個月［8-9］，且菌絲容易老化變紅，這是制約紅托竹蓀產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展的一個主要因素。為尋找適宜其快速生長且菌絲長勢良好的培養(yǎng)基配方，對5種紅托竹蓀母種培養(yǎng)基進行比較，篩選出最佳培養(yǎng)基配方，以期能縮短制種周期，節(jié)約生產(chǎn)成本的同時還能獲得優(yōu)質(zhì)菌種，從而促進紅托竹蓀產(chǎn)業(yè)的進步與發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株試驗所用菌株采自貴州不同地區(qū)栽培的紅托竹蓀子實體，通過組織分離純化而來，菌株編號和采集地信息見表1。

表1 紅托竹蓀各菌株信息

1.1.2 培養(yǎng)基配方

配方一：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 000 mL。

配方二：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、磷酸二氫鉀0.3 g、硫酸鎂0.15 g、維生素B110 mg、瓊脂20 g、水1 000 mL［10］。

配方三：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂18 g、磷酸二氫鉀1 g、硫酸鎂0.5 g、酵母粉2 g、水1 000 mL。

配方四：松針36 g、馬鈴薯250 g、瓊脂29 g、葡萄糖25 g、蛋白胨5 g、磷酸二氫鉀3 g、水1 000 mL［11］。

配方五：竹葉50 g、馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、磷酸二氫鉀0.3 g、硫酸鎂0.15 g、維生素B110 mg、瓊脂20 g、水1 000 mL。

1.2 試驗方法

按1.1.2中培養(yǎng)基配方配制培養(yǎng)基，121℃高壓滅菌30 min，滅菌結(jié)束后于超凈工作臺中分裝至直徑6 cm或直徑9 cm的培養(yǎng)皿中，冷卻凝固備用。在超凈工作臺中用無菌接種針挑取菌種塊轉(zhuǎn)移至上述培養(yǎng)皿中，用封口膜密封后置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中暗置培養(yǎng)，待菌絲萌發(fā)后觀察菌絲生長情況，并用十字劃線法進行劃線，每個處理3個重復(fù)，菌絲生長速率用下式進行計算：

菌絲生長速率（cm/d）＝菌落直徑（cm）/菌絲生長天數(shù)（d）

2 結(jié)果與分析

2.1 紅托竹蓀在配方一、配方二和配方三中的菌絲生長情況

選取采自同一地點同一菌種不同子實體通過組織分離而來的紅托竹蓀H8、H9菌株，比較其在配方一、配方二和配方三3種培養(yǎng)基中的菌絲生長情況（圖1），2個菌株在3種培養(yǎng)基中均能正常生長，但菌絲生長速度較慢，菌絲前期潔白濃密，培養(yǎng)20 d左右，菌絲開始變紅。比較其在不同培養(yǎng)基中的菌絲生長速率（圖2），H8和H9均在配方二中菌絲生長速率最高，分別為0.09 cm/d和0.14 cm/d。說明配方二適宜紅托竹蓀菌絲生長。

圖1 H8與H9在不同培養(yǎng)基中的菌絲生長情況（標(biāo)尺=2 cm）

圖2 H8與H9在不同培養(yǎng)基中的菌絲生長速率

2.2 不同紅托竹蓀菌株在配方二中的菌絲生長情況

將收集到的不同紅托竹蓀菌株在配方二種培養(yǎng)，30 d后各菌株菌絲生長情況如圖3所示，表明不同菌株在同一培養(yǎng)基中菌絲生長情況差異明顯，根據(jù)生長情況可將菌株分為3類，其中H3、H4、H7和ZJZS-2菌株菌絲長勢較好，H1、H5和H9菌株菌絲長勢中等，H2、H6和ZJZS-1菌株菌絲生長速度極慢，基本不吃料，培養(yǎng)30 d幾乎還未生長，說明配方二還需繼續(xù)優(yōu)化以促進菌絲生長。

圖3 不同菌株在配方二中的菌絲生長情況（標(biāo)尺=2 cm）

2.3 不同紅托竹蓀菌株在配方四中的菌絲生長情況

紅托竹蓀培養(yǎng)基中添加松針可促進其生長［11］，因此，將不同菌株接種于配方四培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，30 d后各菌株菌絲生長情況如圖4所示，紅托竹蓀不同菌株在配方四的培養(yǎng)基中菌絲生長極慢，培養(yǎng)30 d菌絲還處于剛萌發(fā)狀態(tài)，幾乎沒有生長，說明紅托竹蓀菌絲不適宜在添加松針的培養(yǎng)基中生長，這也可能與選用的松針材料有關(guān)。

圖4 不同菌株在配方四中的菌絲生長情況（標(biāo)尺=2 cm）

2.4 紅托竹蓀在配方二和配方五中的菌絲生長情況

紅托竹蓀菌株在配方二中菌絲生長速率最快，但是生長至后期菌絲極易變紅。研究發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基中添加竹葉煮汁可以明顯抑制紅托竹蓀菌絲變紅現(xiàn)象，因此，在配方二中加入竹葉煮汁得到配方五。選取在配方二中長勢較好和長勢中等的2個菌株H4和H1，比較其在2種培養(yǎng)基中的菌絲生長情況。結(jié)果表明，紅托竹蓀菌絲在配方五中培養(yǎng)35 d后依然保持潔白（圖5），而且菌絲生長速度明顯快于配方二中的菌絲（圖6），H1、H4菌絲在配方五中的生長速率在0.13～0.21 cm/d，顯著（P＜0.05）高于配方二。說明，添加竹葉煮汁不僅能避免菌絲變紅現(xiàn)象，還能使菌絲生長速度加快，且菌絲更加濃密，長勢更好。

圖5 H1與H4在不同培養(yǎng)基中的菌絲生長情況（標(biāo)尺=2 cm）

圖6 H1與H4在不同培養(yǎng)基中的菌絲生長速率

3 結(jié)論

紅托竹蓀5種母種培養(yǎng)基配方試驗結(jié)果表明，配方五中菌絲長勢和生長速度最佳，菌絲生長速率為0.13～0.21 cm/d，菌絲濃密，生長35 d后依然保持潔白。在培養(yǎng)基中添加適量磷酸二氫鉀和硫酸鎂可以提供菌絲生長所需的礦質(zhì)元素，添加維生素B1可以提供菌絲生長所需的營養(yǎng)，添加竹葉煮汁可以避免紅托竹蓀菌絲變紅現(xiàn)象，且能使菌絲更加濃密。表明，培養(yǎng)基配方五是紅托竹蓀母種的最佳培養(yǎng)基，即竹葉50 g、馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、磷酸二氫鉀0.3 g、硫酸鎂0.15 g、維生素B110 mg、瓊脂20 g、水1 000 mL。

由于供試菌株均由栽培的子實體進行組織分離純化而來，在培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)，即使是從同一地點采集的不同子實體，分離獲得的菌株在同一培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)時，菌絲生長也存在明顯差異，說明同一菌種不同菌株之間也存在生長差異，在以后的生產(chǎn)栽培過程中應(yīng)注重菌種的選擇。目前，紅托竹蓀生產(chǎn)中使用的菌種質(zhì)量參差不齊，大多是通過組織分離而來，菌種穩(wěn)定性弱，后續(xù)應(yīng)對優(yōu)良資源進行定向選育，以獲取可穩(wěn)定遺傳的菌種，促進紅托竹蓀產(chǎn)業(yè)健康穩(wěn)定發(fā)展。