復方丹參滴丸與氯吡格雷的藥效學相互作用研究

蘇振宇，李 想

（江蘇省人民醫(yī)院，江蘇 南京 210029）

動脈粥樣硬化（AS）在臨床上較為常見。粥樣斑塊破裂和血管內(nèi)皮損傷繼而引起血小板在損傷破裂部位聚集形成血栓，導致血管腔的急性閉塞是大部分急性血管疾病發(fā)生的根本原因[1]。血小板的黏附、激活和聚集在AS 病變的發(fā)生、發(fā)展以及動脈粥樣硬化斑塊侵蝕或破裂后的血栓形成中起到關(guān)鍵作用[2]。氯吡格雷（CBT）作為第二代噻吩吡啶類藥物，需要經(jīng)過CYP2C19 的活化，生成活性代謝產(chǎn)物，從而發(fā)揮生物學作用[3]。有文獻表明，P2Y12 受體能通過抑制細胞的自噬來促進平滑肌細胞衍生泡沫細胞的形成；P2Y12 受體抑制劑（氯吡格雷）能夠降低APOE-/-模型小鼠的LDL 水平，并通過P13KAKT 通路促使脂質(zhì)斑塊處膽固醇（TC）的外流，進而降低斑塊處TC 的含量[4]。復方丹參滴丸（CDDP）是現(xiàn)代化的中國傳統(tǒng)中藥，主要由丹參、三七和冰片組成，具有活血化瘀、理氣止痛等作用。有文獻表明，丹參制劑具有保護血管、避免局部缺血的作用，可預防心肌細胞缺血再灌注損傷[5]。有報道稱，復方丹參滴丸中的某些化學成分對氯吡格雷的相關(guān)代謝酶活性具有顯著的影響[6-7]。通過我們前期的藥動學研究[8]發(fā)現(xiàn)，復方丹參滴丸和氯吡格雷存在藥動學上的相互作用，為動脈粥樣硬化模型大鼠聯(lián)合使用上述兩種藥物能夠發(fā)揮協(xié)同治療作用。本文對高脂飼料喂養(yǎng)造模的APOE-/-小鼠進行研究，旨在分析復方丹參滴丸與氯吡格雷的藥效學相互作用。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

XW-80A 微型渦旋儀（上海滬西分析儀器廠）、AB265-S 梅特勒電子分析天平（瑞士梅特勒公司）、5417R 臺式高速冷凍離心機（德國Eppendorf 公司）、AU5800 全自動生化分析儀（Beckman Counter）、CS-5100 全自動血凝分析儀（Sysmex）。復方丹參滴丸（天津天士力制藥集團有限公司）、氯吡格雷（深圳信立泰藥業(yè)股份有限公司）、肝素鈉、蒸餾水。

1.2 實驗動物

清潔級雄性APOE-/-小鼠，購自徐州醫(yī)科大學實驗動物中心，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK2018-0016。小鼠飼養(yǎng)于徐州醫(yī)科大學實驗動物中心，室內(nèi)溫度20℃～26℃，相對濕度40% ～70%。將APOE-/-小鼠隨機分為丹參滴丸組、氯吡格雷組、聯(lián)合給藥組和空白對照組，每組6 只。

1.3 小鼠造模及灌胃

取氯吡格雷研磨后溶于生理鹽水中，配成含藥5 mg/mL 的混懸液。取復方丹參滴丸同法操作，配成16.2 mg/mL 的混懸液。將APOE-/-小鼠以高脂飼料喂養(yǎng)3 個月造動脈粥樣硬化模型，造模成功后按組別灌胃給予對應的藥液0.2mL，連續(xù)給藥28 天。

1.4 生物樣品采集及處理

造模成功后， 從小鼠眼靜脈取血0.4mL， 以3000rpm/min 的速度離心后取上清液進行血脂四項檢測，給藥28 天后取血分離血清進行血脂四項和凝血四項檢測。

1.5 統(tǒng)計學分析

對小鼠給藥前后的空白對照組、丹參滴丸組、氯吡格雷組和聯(lián)合給藥組四組的血脂四項和凝血四項結(jié)果應用SPSS 20.0 軟件中的“單因素方差分析（one-way ANOVA）”進行統(tǒng)計分析，若P＜0.05，表明給藥前后的結(jié)果具有統(tǒng)計學意義；若P＜0.01，則認為給藥前后的結(jié)果具有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 動脈粥樣硬化模型小鼠的血脂四項分析

對給藥前和給藥28 天后的血脂四項結(jié)果進行對比分析發(fā)現(xiàn)，氯吡格雷能夠降低模型小鼠TC 和LDL 的水平（P＜0.05）；復方丹參滴丸可以升高HDL 的水平（P＜0.01）；聯(lián)合給藥組與丹參滴丸組以及氯吡格雷組相比，能夠不同程度地降低TC 以及LDL 的水平，升高HDL 的水平。上述數(shù)據(jù)表明，復方丹參滴丸與氯吡格雷的聯(lián)合用藥相比于單獨給藥對于APOE-/-模型小鼠的脂質(zhì)代謝存在更顯著的改善作用。詳見圖1。

圖1 血脂四項結(jié)果圖（n=6）

2.2 動脈粥樣硬化模型小鼠的凝血四項分析

對分組后的模型小鼠給予對應藥物治療28 天后，將其處死并取血。通過對不同給藥組小鼠的凝血四項結(jié)果進行分析發(fā)現(xiàn)，氯吡格雷可延長APTT 和TT（P＜0.01），復方丹參滴丸與氯吡格雷對于FIB 的水平均有降低作用（P＜0.01），聯(lián)合給藥能進一步降低FIB的水平（這對于預防血栓形成以及改善血液高凝狀態(tài)具有重要的作用）。詳見圖2。

圖2 凝血四項結(jié)果圖（n=6）

3 討論

我們在前期的研究中發(fā)現(xiàn)，復方丹參滴丸與氯吡格雷聯(lián)合用藥時能夠影響彼此的藥物代謝酶活性。本實驗的開展旨在探討它們藥動學變化背后可能存在的藥效學作用改變。通過對上述實驗結(jié)果的分析，并結(jié)合前期對復方丹參滴丸與氯吡格雷藥動學相互作用的研究，我們推測復方丹參滴丸與氯吡格雷聯(lián)合用藥的協(xié)同治療效果可能是二者影響了彼此藥物代謝酶的活性導致的。有文獻指出，丹參制劑中的活性成分（例如咖啡酸、丹酚酸B、紫草酸等成分）對于SD 大鼠的TT、APTT、PT 具有不同程度的延長作用，并可降低其FIB 的水平。本實驗中丹參滴丸組與空白對照組間僅有FIB 水平具有顯著性差異（P＜0.01），這有可能是實驗的對象與方法不同導致的[9]。

本實驗的不足之處在于實驗樣本量偏少，實驗論證方法單一，后續(xù)仍需進一步地深入探討。