超微粉山楂消脂膠囊的制備方案研究

杜建華 徐海燕 羅德祥

528000廣東省佛山市中醫院，廣東佛山

山楂消脂膠囊是廣東省佛山市中醫院常用的經驗方，由山楂與大黃兩味中藥組成，有降脂、清熱涼血、除積滯等作用，效果好、不良反應少、服用方便，能有效改善高脂飲食引起的肥胖和脂代謝紊亂，受到廣大患者及醫師的青睞[1]。既往中藥膠囊以全粉藥材為主，但空心膠囊囊號固定，全粉藥材裝入量少，加之內容物為細粉，粒徑小、流動性差，導致載入量存在差異[2]。超微粉碎技術是近年迅速發展起來的一項高新技術，也是粉體工程中的一項重要內容，包括對粉體原料的超微粉碎、高精度分級和表面活性改變等，隨著超微粉碎技術的發展，對藥材原料進行細胞級粉碎技術，可提高藥材細胞內容物的溶出率，節省藥材，提高藥物生物利用度及中藥制劑質量[3]。目前，對山楂消脂膠囊進行超微粉碎工藝制備是否會影響膠囊藥代動力學參數成為研究重點，本研究對超微粉山楂消脂膠囊和細粉山楂消脂膠囊的生物利用度進行比較，為超微粉碎技術的應用提供參考。

資料與方法

實驗動物：16 只健康雄性SD 大鼠，無特定病原體SPF級，體重210～280 g(廣東醫科大學實驗動物中心提供)；基礎飼料，正常飲食、飲水，單籠飼養，飼養1周。

試劑與儀器：山楂消脂膠囊(佛山市中醫院院內制劑，批準文號：0432002)；大黃酸(中國藥品生物制品檢定所提供)、色譜純、蒸餾水；Waters empower 1525/2996 高效液相色譜儀、TGL-15M 臺式微量高速冷凍離心機(湖南平凡科技有限公司)、電子天平(上海玉研科學儀器有限公司)、粉碎機(FC160F型，上海坤麟制藥機械有限公司)、貝利微粉機(BFM-6BI 型，濟南倍力粉技術工程有限公司)。

方法：①山楂消脂混懸液制備：取山楂、大黃各10 g，打成粗粒，然后分成2 份，一份經粉碎機粉碎后形成100目粒徑的細粉，另一份經貝利微粉機粉碎后得到200目粒徑細粉。用電子天平秤獲取超微粉2.5 g、細粉2.5 g，分別置入容量瓶內，添加超純水超聲溶解、定容，獲取山楂消脂混懸液溶液，濃度0.05 g/mL。②對照品溶液制備：大黃素1.6 g，用甲醇溶解、定容，濃度160 μg/mL。經倍數稀釋，配制0.24 μg/mL、0.48 μg/mL、0.96 μg/mL、24.0 μg/mL、36.0 μg/mL、48.0 μg/mL、60.0 μg/mL的對照品溶液。③動物給藥：16 只大鼠隨機分為超微粉組和細粉組，各8只。進行研究前12 h禁食。超微粉組給予超微粉混懸液0.5 g/kg；細粉組給予細粉混懸液0.5 g/kg。在給藥5 min、15 min、30 min、45 min、1 h、2 h、4 h、6 h、9 h、12 h、24 h后分別提取眼眶血0.5 mL，加入肝素管內，用微量高速冷凍離心機離心8 min，4 000 r/min，留取上層血清0.2 mL，測定大黃素濃度。

觀察指標及檢測方法：①血漿樣品：上層血清樣本加入0.1 mol/mL 鹽酸0.05 mL 酸化，添加乙酸乙酯1.5 mL，混合振蕩10 min，再離心8 min，8 000 r/min，沉淀蛋白，吸取乙酸乙酯層液體1.0 mL 吹干。于離心后殘渣中添加甲醇0.1 mL，渦旋振蕩，離心10 min，12 000 r/min，留取上清液0.07 mL，采用高效液相色譜分析法檢測。②色譜條件：檢測波長為254 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為室溫，大黃酸出峰時間約為7 min。將大黃酸對照品溶液置入離心管內，添加大鼠空白血漿0.1 mL，分別配制濃度為0.16 μg/mL、0.32 μg/mL、0.64 μg/mL、16.0 μg/mL、24.0 μg/mL、32.0 μg/mL、40.0 μg/mL 的大黃酸血漿樣本，采用高效液相色譜分析法檢測大黃酸峰面積，儀器為高效液相色譜儀，計算血藥濃度。將不同時間點的采樣經PKSolver 2.0 程序藥代動力學模擬處理，計算藥代動力學參數，包括末端消除半衰期(t1/2)、達峰時間(Tmax)、清除率(CL)、藥峰濃度(Cmax)、藥時曲線下面積(AUC)。

統計學方法：數據應用SPSS 22.0 軟件分析；計量資料以()表示，采用t檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

結果

大黃酸對照品溶液血漿樣品精密度：將大黃酸對照品溶液按0.16 μg/mL、16.0 μg/mL、40.0 μg/mL 的血漿濃度，每個濃度平行測6 份，在1 d 內測定6 次，測得3 種不同濃度血漿樣品的精密度分別為2.18%、6.35%、6.40%。見表1。

表1 大黃酸對照品溶液血漿樣品精密度

血漿樣品回收率：于空白血漿0.1 mL 加入大黃酸對照品溶液0.2 mL，取0.16 μg/mL、16.0 μg/mL、40.0 μg/mL 的大黃酸濃度溶液0.2 mL，每個濃度平行測5 份，測定的大黃酸峰面積為S，另取濃度為0.24 g/mL、24.00 g/mL、40.00 g/mL 的大黃酸對照品溶液0.2 mL，加入0.1 mL 甲醇，測定的大黃酸峰面積為A，回收率=S/A×100%，計算得到其平均提取回收率為86.80%，＞85%符合藥物動力學研究要求。見表2。

表2 血漿樣品回收率

兩組藥動學參數比較：超微粉組t1/2短于對照組，Tmax、Cmax、AUC 高于細粉組，CL 低于細粉組，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表3。

表3 兩組藥代動學參數比較()

表3 兩組藥代動學參數比較()

討論

近年來，超微粉碎技術在中藥領域中的應用日益廣泛，以超微粉替代普通細粉，可提高中藥膠囊的藥效，節省藥材；同時制備成超微粉顆粒，可提高超微粉流動性，增加膠囊內的藥量，從而提高中藥制劑的質量[4]。山楂消脂膠囊常用于肥胖、高血脂、腦卒中等疾病的治療，治效顯著，得到醫師及患者的認可[5-6]。醫院在制備山楂消脂膠囊時，通常將中藥材粉碎成細粉，過篩，混勻后裝入膠囊。但基于細粉狀的缺陷，比如藥物裝載量有限、粒徑小、流動性差，容易導致膠囊裝載量存在差異。因此對山楂消脂膠囊應用超微粉碎技術，以期提高藥物細胞內容物溶出率，但是否會影響山楂消脂膠囊的生物利用度，需進行進一步研究。

本組研究對山楂消脂膠囊采用超微粉碎技術，將超微粉替代原來的普通細粉，同時采用高效液相色譜分析法檢測超微粉的藥物動力學參數，以大黃酸為對照，對大黃酸對照品試驗溶液進行精密度與回收率實驗，結果顯示血漿樣品精密度較高，提取回收率＞83.0%，藥物濃度符合藥物代謝動力學研究要求，表明經超微粉碎技術制備的山楂消脂膠囊，并不會影響藥物濃度。本研究大鼠經超微粉與細粉山楂消脂膠囊混懸液灌服后，超微粉組t1/2短于對照組，Tmax、Cmax、AUC 均高于細粉組，CL 低于細粉組，差異有統計學意義(P＜0.05)。說明與細粉山楂消脂膠囊比較，超微粉山楂消脂膠囊的藥物動力學參數均明顯提高，體內有效成分大黃酸的利用度明顯提高，而且吸收速度快，藥效持久，間接肯定了超微粉碎工藝制備的優勢。分析原因可能是山楂消脂膠囊進行超微粉碎技術工藝處理后，藥粉細密，藥物細胞破壁率升高，能擴大藥物表面積，提高藥物吸收量及吸收速度。超微粉技術既涵蓋了現代物理技術，也包括了化學技術，未來發展潛力巨大。近年來，超微粉技術逐漸應用于中藥的生產中，不僅能保持中藥的藥效，還能提高中藥的生物利用度，節約資源。本次實驗中，超微粉碎使大黃酸在大鼠體內的吸收更加完全[7]；經超微粉碎技術工藝處理后，大黃內的有效成分大黃酸溶出度明顯增加，藥物消除t1/2短，再次證實體內山楂消脂膠囊的吸收迅速，消除速度加快。此外，采用用超微粉替代普通細粉，可增強膠囊藥效，增加膠囊內藥物裝載量，提高藥物品質，改善藥物動力學，制備效果好。利用超微粉碎技術可以提高山楂的溶解性、穩定性及山楂消脂膠囊的消化吸收性[8-9]。

綜上所述，通過超微粉碎工藝制備山楂消脂膠囊，可促使大鼠體內大黃素吸收，藥物吸收迅速、吸收量提高，生物利用度高，在節省藥物資源的同時不會影響藥物濃度及作用，制備效果好，可為超微粉碎工藝改革提供理論支持，為臨床有效、安全用藥提供參考。