醫用自交聯透明質酸鈉凝膠對腸吻合和切口愈合的影響

韋 進, 許心怡, 謝欣怡, 楊海帆, 程 宏

(1. 江蘇省連云港市紅十字中心血站, 江蘇 連云港, 222000;2. 揚州大學醫學院/江蘇省非編碼RNA基礎與臨床轉化重點實驗室/揚州大學轉化醫學研究院, 江蘇 揚州, 225000)

腹部手術可能引發腹膜粘連，而抵抗外源性刺激是機體的一種自我保護功能，可將腹部炎癥程度控制在一定范圍內[1-2], 還可增加缺血組織的血供，促進創傷部位愈合[3-4]。但術后腹腔粘連可對機體造成很大損害，并對患者的治療產生不利影響，已經成為相關研究[5-6]關注的焦點。隨著腸吻合技術在外科手術中的廣泛應用，探尋具有抗腸吻合口粘連作用的醫用制劑變得尤為重要。醫用自交聯透明質酸鈉凝膠作為一種新型醫用制劑，可降低盆腔手術后腹膜與黏液粘連或腹部手術后子宮與近端組織粘連的發生率和嚴重程度[7-8]。本研究探討醫用自交聯透明質酸鈉凝膠對大鼠術后腸吻合口愈合和腹壁切口愈合的影響，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與材料

本研究實驗方案和操作規程經揚州大學醫學院實驗動物倫理委員會審核批準。成年健康雄性SD大鼠[上海超百加實驗動物有限公司，許可證編號2008-0016(上海)SCXK, 通行證號碼2008001624632]76只，體質量250～300 g, 常規條件飼養。選取64只大鼠建立結腸吻合口模型，隨機分為實驗組和對照組，每組32只，其余12只大鼠納入非手術組。實驗組、對照組、未手術組SD大鼠體質量分別為(259.69±5.88)、(259.44±7.07)、(260.50±7.34) g, 差異無統計學意義(P>0.05)。醫用自交聯透明質酸鈉凝膠(HyaRegen Gel)購自常州百瑞吉生物醫藥有限公司，其余常規試劑購自揚州必幫生物技術有限公司。

1.2 實驗方法

參照文獻[9-10]中的方法建立大鼠結腸吻合口模型，手術均由同一人完成，手術過程見圖1。實驗組、對照組大鼠術前12 h禁食水; 采用3%戊巴比妥鈉(30 mg/kg)肌肉注射麻醉后，仰臥位固定; 取腹壁正中切口打開腹腔，于乙狀結腸腹膜反折處近端3 cm處水平切斷結腸，以6-0無創縫線單層端-端吻合腸管; 實驗組用1 mL醫用自交聯透明質酸鈉凝膠涂敷于大鼠結腸吻合口部位，包括吻合口遠近端1 cm處，對照組大鼠吻合口不做任何處理; 以3-0可吸收縫線縫合腹膜和肌層，以1號縫線縫合皮膚; 術畢外用抗生素軟膏涂抹切口，待大鼠清醒后分籠飼養，每籠2～3只。術后禁食水10 h, 連續 3 d肌肉注射慶大霉素(4 U/d)預防感染; 以標準飼料喂養大鼠，環境溫度和濕度分別保持于18～22 ℃和(60±20)%; 術后7、14 d, 2組分別處死6～8只大鼠進行觀察[11-13]。

1.3 觀察指標

1.3.1 存活率: 觀察實驗組、對照組大鼠術后是否存活至實驗完成(若死亡需記錄死亡原因)，計算存活率。

1.3.2 腹壁切口和腹膜/肌層愈合情況: 術后7、14 d, 分別檢查實驗組、對照組大鼠腹壁切口表面皮膚愈合情況和腹膜/肌層愈合情況，檢查過程見圖2。參照外科手術切口愈合標準判定愈合情況，分為一期愈合(手術切口無感染，按預期愈合)、二期愈合(創面缺損大，常伴有感染)和痂下愈合(切口化膿感染，被痂皮覆蓋)。

1.3.3 腸吻合口愈合情況: 以結腸吻合口為中點，于遠近端各2 cm處切斷結腸，避免損傷粘連的腸壁; 用生理鹽水清洗去除腸管內容物; 取1個三通管，一頭與血壓計相連，一頭與血壓計氣泵相連，另一頭與切取的結腸近端相連(結腸遠端用3-0絲線結扎); 將結腸完全浸入裝有生理鹽水的容器中，打開三通管的所有閥門，用氣泵以均勻的速度逐漸加壓; 當浸入生理鹽水中的結腸吻合口產生第 1個氣泡時，血壓計上顯示的汞柱刻度即為吻合口抗張強度[11-13]。大鼠結腸抗張強度檢測過程見圖3。另取未手術組6只大鼠，于對照組和實驗組大鼠結腸吻合處相同部位切取正常結腸，按上述方法測定正常結腸抗張強度，作為正常對照。

1.4 統計學分析

2 結 果

2.1 大鼠存活率

2組大鼠術后生命體征平穩，自主活動能力稍恢復，每天觀察大鼠2次, 2組大鼠均未出現死亡及感染情況，存活率為100.00%。

2.2 腹壁切口及腹膜/肌層愈合情況

術后7、14 d, 實驗組大鼠腹壁切口表面皮膚的愈合情況和腹膜/肌層愈合情況與對照組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 術后7、14 d大鼠腹壁切口及腹膜/肌層愈合情況[n(%)]

2.3 腸吻合口愈合情況

對照組、實驗組大鼠術后7、14 d的腸吻合口抗張強度均低于未手術組大鼠正常結腸抗張強度，差異有統計學意義(P<0.05); 術后7、14 d, 涂敷醫用自交聯透明質酸鈉凝膠的實驗組大鼠腸吻合口抗張強度均高于未涂敷的對照組大鼠，差異有統計學意義(P<0.05)。見圖4。

3 討 論

本研究發現，術后7、14 d時，涂敷醫用自交聯透明質酸鈉凝膠的實驗組大鼠結腸吻合口抗張強度高于未涂敷的對照組大鼠，但低于未手術組大鼠的結腸抗張強度，差異有統計學意義(P<0.05)。由此提示，醫用自交聯透明質酸鈉凝膠材料的使用有助于提高大鼠術后腸吻合口的抗張強度。本研究還發現，實驗組和對照組大鼠的成活率均為100.00%, 無死亡和感染情況發生，且2組大鼠術后7、14 d時腹壁切口表面皮膚愈合情況和腹膜/肌層愈合情況相近。

在確保療效的前提下，藥物制劑還應具有毒副作用小的特點。本研究發現，醫用自交聯透明質酸鈉凝膠作為一種藥物制劑具有良好的有效性和安全性，有利于增加大鼠結腸吻合口的拉伸強度，對大鼠無毒性，未引起或加重感染，亦未影響腹壁切口和腹膜/肌層的愈合，建議進一步開展臨床研究。

目前，在臨床研究中被用于防止粘連的材料主要為高分子量自交聯透明質酸鈉，具有親水性好、免疫原性低等優點[14]。與傳統透明質酸不能快速降解、長期防粘連效果不理想的特點不同，醫用自交聯透明質酸鈉凝膠不僅親水性好、免疫原性低，而且可長期存在并發揮作用[11，15-17]。有研究[15]認為，透明質酸鈉大分子網絡結構可以結合大量的水形成物理屏障，從而調節細胞功能。本研究推測，醫用自交聯透明質酸鈉凝膠或許也通過該途徑促進腸吻合，但確切的分子機制有待進一步研究。

綜上所述，醫用自交聯透明質酸鈉凝膠可顯著提高大鼠結腸吻合口的抗張強度，且不影響腹壁切口和腹膜/肌層愈合。但本研究存在一定局限性，一是樣本數量較小，二是從動物實驗到臨床應用還需更多的實踐加以推動，未來的研究需進一步深入評估醫用自交聯透明質酸鈉凝膠的安全有效性。