廣西武鳴墨羊冷凍精液制作技術探討

文│鄧祝新 魏莎 覃孝杰 許鵬 李芳芳 李美珍 何復明 方奕雄 黃麗云 彭燕（廣西壯族自治區畜禽品種改良站）

廣西武鳴綠世界生態農業投資有限公司培育的武鳴墨羊是一種適應性強、抗病力強、肉質細膩，具有高營養價值的雜交羊品種。武鳴墨羊是廣西隆林黑山羊和努比亞黑山羊多年雜交改良而來的后代。

為提高武鳴墨羊的經濟效益，充分發揮優良種公羊的種用價值和配種效能，減少生殖道疾病，筆者挑選具有優良種用價值的公羊進行采精和凍精制作，再利用羊的人工授精技術加快武鳴墨羊的品種改良過程。

一、墨羊的人工采精

準備羊采精架，將其放在公羊欄舍的運動場內，固定好采精位置，將一頭發情母羊牽到采精架內保定好。把羊的采精筒設備消毒干凈、晾干。裝上集精杯，注水加壓（采精筒內的水溫控制在40～45℃為宜）、采精筒內壁涂上潤滑劑待用。將公羊牽引到采精架上進行采精，待公羊爬跨時，將采精筒套上公羊陰莖，讓公羊自己往前沖頂。公羊警惕性比較高，采精動作必須要做到穩、準、快。采集精液結束后放水、放氣壓，迅速將精液送到稀釋間。

二、羊稀釋液的配制

目前使用效果比較好的稀釋液是采用法國卡蘇公司（BIOXCELL freezing medium for bull semen）的稀釋液，按照1:4的比例配制，使用雙蒸高壓滅菌蒸餾水，等溫混合均勻后放置于35℃的恒溫水浴鍋內待用。

三、墨羊鮮精的鏡檢、密度、稀釋過程

質量好的墨羊鮮精濃度一般在10億～20億/毫升。取5微升原精，在電子顯微鏡下觀察，如果看到云霧狀精液游動，或者有密密麻麻的精液團在蠕動，則是非常理想的精液狀態。一般情況下筆者采集的原精為2～5毫升，第一步以1∶1稀釋，然后取10微升鏡檢觀察，如果發現精液還是很濃稠，再次1倍量稀釋。使用卡蘇公司生產的牛羊精子密度儀（AccuRead），選一個清潔、消毒過的比色皿，在其中加入2.4毫升的（0.9%）氯化鈉溶液，放置于密度儀中調零，用移液槍吸取10微升的原精，注入含有2.4毫升氯化鈉溶液的比色皿中，混合搖勻，再放置于密度儀中進行密度測量。為了結合實際生產，筆者對墨羊凍精的稀釋要求是0.25毫升細管灌裝，容量為0.185～0.20毫升，總精子數在3500萬，有效精子數在1200萬，活力在0.3以上為合格，這樣的稀釋標準比較符合實際生產，在羊冷凍精液人工授精方面更有保證。

四、墨羊鮮精的分裝、封口與細管精液平衡

鮮精分裝：采用0.25毫升的細管。用一次性注射器從細管的棉花塞一端抽取精液，在細管封口端留1.5厘米，最后在細管留空的最末端使用熱熔封口機將細管末端熱熔封口，以不泄漏精液為封口標準。這樣就完成了一支精液的手工分裝，以此類推，直到所有羊鮮精液分裝、封口全部完成，并且在細管上用筆填寫、標注公羊的信息編號。將封口完畢的細管精液按照公羊號分類排版到專用的細管精液架子上，并且成排疊起來轉移到4℃的恒溫冰箱內靜置3～4小時。

五、墨羊的冷凍精液制作過程

墨羊的冷凍精液采用熏蒸冷凍法現場制作。所用設備如下：液氮、液氮容器、泡沫箱、細管架子、鑷子、凍精提筒等。泡沫箱的規格是長80厘米、寬50厘米、高60厘米，配備有泡沫箱蓋子。細管架的高度是35厘米。

將液氮倒入泡沫箱口30厘米的位置，等待液氮面穩定在30厘米處后，從恒溫冰箱內取一托已平衡好的墨羊細管精液與細管架子一起放入泡沫箱內，細管精液整齊平鋪在細管架子上，此時細管精液與液氮面的實際高度維持在3～5厘米。快速蓋上泡沫箱蓋子，壓緊不透氣，靜置等待15分鐘。

15分鐘后揭開蓋子，迅速將細管架子上的細管精液全部收攏，瞬間浸泡到液氮內，直到液氮沸騰穩定下來，第一托細管精液冷凍結束，可打包入袋。以此類推，一次一托，直到全部冷凍結束。

六、墨羊凍精的解凍

將水浴鍋溫度恒定在38～39℃。從液氮中取出一支墨羊凍精，空氣浴1秒，然后迅速浸泡到水浴鍋中搖晃解凍30秒以上，直至完全解凍。取出凍精擦干表面水分，減掉封口端，分別取10微升精液于載玻片上，蓋上蓋玻片，對3個視野進行鏡檢，并進行活力的綜合評分。要求：電子顯微鏡必須要有恒溫載物板進行預熱。因為羊的冷凍精液比較濃稠，也可以考慮在鏡檢時加入少許解凍液來觀察。

綜上所述，雖然武鳴墨羊的鮮精密度較高，但冷凍后大部分精子會有死亡情況。為做好羊的精液冷凍，必須保證羊鮮精活力要強、精液稀釋過程保持等溫、精液冷凍過程逐級降溫。