糞便鈣衛(wèi)蛋白檢測在腹瀉鑒別診斷中的意義

于溪 陳鐘鳴 鄭佳玲

作者單位：鹽城市第一人民醫(yī)院檢驗科，江蘇 鹽城 224001

腹瀉屬于臨床一類常見消化道疾病，指的是每日排便在3 次以上，排糞量在200 g/d 以上，糞便質(zhì)地稀薄，含水量在85%以上的情況[1]。結(jié)合病程長短能劃分成急性、慢性腹瀉兩類，其中前者主要原因為腸道感染，后者原因比較復雜，多為結(jié)腸或者小腸疾病引起[2]。腹瀉發(fā)生后未及時進行診斷和治療，能影響機體的營養(yǎng)狀態(tài)，導致腸神經(jīng)紊亂，對胃腸激素分泌產(chǎn)生不利影響[3]。腹瀉在臨床上易和其他的腸道疾病相混淆，如腹瀉型腸易激綜合征（diarrhea type of irritable bowel syndrome，D-IBS）以及大腸癌等，因此，積極探索出特異性檢測指標對鑒別診斷腹瀉和制定正確治療方案有著重要意義。糞便鈣衛(wèi)蛋白（faecal calprotein，F(xiàn)CP）屬于一類炎癥活動性的標志物，來源于巨噬細胞以及中性粒細胞，能和鈣離子相結(jié)合，于糞便當中水平較為穩(wěn)定[4]。以往有關FCP 的研究多集中在炎癥性腸病的活動性判斷中，有關其在腹瀉鑒別診斷中的作用臨床報道較少。為此，文章對2021 年6 月—2022 年5 月鹽城市第一人民醫(yī)院就診的單純腹瀉患者總共600 例的臨床資料開展回顧性分析，總結(jié)FCP 檢測用于腹瀉鑒別診斷中的意義，旨在為鑒別診斷腹瀉和制定后續(xù)治療方案提供參考依據(jù)，具體內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021 年6 月—2022 年5 月在鹽城市第一人民醫(yī)院就診的600 例單純腹瀉患者設為腹瀉組，其中包含男性356 例，女性244 例；年齡范圍在18 ～65 歲，平均（40.35±5.36）歲；文化程度：初中及以下365 例，高中及以上235 例。選取同時間段鹽城市第一人民醫(yī)院收治的30 例大腸癌患者設為大腸癌組，其中包含男性18 例，女性12 例；年齡范圍在18 ～64 歲，平均（40.26±5.48）歲；文化程度：初中及以下18 例，高中及以上12 例。30 例D-IBS 患者設為D-IBS 組，其中包含男性19 例，女性11 例；年齡范圍在20 ～60 歲，平均（40.76±5.02）歲；文化程度：初中或以下17 例，高中或以上13 例。30 例健康體檢者設為對照組，其中包含男性18例，女性12 例；年齡范圍在21 ～68 歲，平均（41.02±5.36）歲；文化程度：初中及以下19 例，高中及以上11 例。各組性別、年齡及例數(shù)等一般資料相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），數(shù)據(jù)之間具有可比性。本研究經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，同時取得研究對象知情同意。

納入標準：（1）單純腹瀉組均結(jié)合X 線鋇劑灌腸或者腸鏡確診為單純腹瀉，大腸癌、D-IBS 組均經(jīng)臨床檢查及病理學檢查確診，對照組為經(jīng)體檢無任何異常者。（2）年齡不低于18 歲，依從性佳。（3）臨床資料無任何缺失。

排除標準：（1）存在其他臟器嚴重者。（2）存在消化道腫瘤者。（3）存在認知障礙、精神病等無法配合完成檢查者。（4）長期采取非甾體抗炎藥者。（5）處在妊娠或者哺乳階段女性。（6）酗酒和藥物成癮者。

1.2 方法

1.2.1 試劑及儀器 南京美寧康誠生物科技有限公司生產(chǎn)的FCP 測定試劑盒、樣本采集器以及Mokosensor-A300 膠體金免疫層析分析儀。

1.2.2 檢測方法 所有患者均接受FCP 檢測，方法如下：在結(jié)腸鏡檢查1 周以內(nèi)或者術前1 周以內(nèi)進行10 ～20 g糞便標本留取后送往檢測，對照組同樣留取10 ～20 g 糞便標本后送檢，采取專用采集管進行標本采集，若為水樣便，采取采集器吸管吸取10 μL，后插入2.5 mL 標本稀釋液內(nèi)混勻。若為其他類型糞便，將采集器采便棒插入糞便至刻度線，輕輕旋轉(zhuǎn)采集棒蘸取糞便，后插入樣本稀釋液混勻，在1 h 之內(nèi)送往實驗室內(nèi)同時放在2 ～8℃的冰箱中保存，在48 h 以內(nèi)集中抽提，檢測前將留存的糞便放在室溫狀態(tài)下平衡解凍，采取一次性取樣環(huán)挑取50 ～100 mg 的糞便，放入帶螺口帽聚丙烯管15 mL，將取樣環(huán)一同放入后稱重，結(jié)合質(zhì)量/容積為1/49 的比例將抽提液加入，放在上海熙揚儀器有限公司生產(chǎn)的YMT-2500 型多管渦旋混合器內(nèi)充分搖動30 min，將樣本混勻之后選取1.5 mL 放在2 mL 的離心管內(nèi)，經(jīng)北京漢達森機械技術有限公司生產(chǎn)的MIKRO220 型微量離心機開展5 min 離心處理，后選擇1 mL 上清液放在-50℃的冰箱內(nèi)備用。采取瑞士Bnhl-mann 公司提供FCP 檢測試劑盒和酶聯(lián)免疫吸附方法開展檢測，操作者嚴格依據(jù)說明書中有關內(nèi)容開展操作。將提取液放在室溫狀態(tài)下平衡解凍，采取1 ∶50 的比例稀釋，后放于室溫下孵育，采取常規(guī)酶聯(lián)免疫吸附方法。測定方法：設置酶標儀成450 nm 開展檢測，標準品包含5 個不同的質(zhì)量濃度，分別為600、300、100、30、10 μg/g，總共開展樣本檢測2 次，濃度最高標準液吸光度值是2.397 和2.284，采取四參數(shù)法進行計算獲得標準曲線，采取1 ∶50 稀釋樣本若超出了標準曲線的范圍但未被檢測出，應采取緩沖液開展進一步稀釋處理，并重新檢測，直到檢測出結(jié)果為止，稀釋的倍數(shù)計算到最終結(jié)果當中，單次樣本檢測需要重新建立起當次標準曲線。撕開檢測卡外包裝鋁箔袋，取出檢測卡待用，滴入60 μL 稀釋過的樣本至檢測卡加樣孔中，開始反應同時開始計時10 min。結(jié)束計時后，采取膠體金免疫層析分析儀對測定結(jié)果進行分析。結(jié)束計時后應在5 min 內(nèi)讀取結(jié)果，5 min 內(nèi)未讀取結(jié)果評定成無效，需要重新開展試驗。本方法測定的FCP 可報告范圍在30 ～600 μg/g，當結(jié)果低于線性范圍下限時結(jié)果報告為＜30 μg/g，當結(jié)果超過線性范圍上限時結(jié)果報告為＞600 μg/g，檢測顯示FCP 水平＞50 μg/g 代表檢測結(jié)果為陽性[5]。

1.3 觀察指標

比較單純腹瀉組與大腸癌組、D-IBS 組和對照組的FCP 水平及陽性率差異。FCP 陽性率=FCP 陽性例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學方法

經(jīng)SPSS 23.0 統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗；計量資料以 （±s）代表，行t檢驗，多組間計量資料比較采取方差分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

單純腹瀉組的FCP 水平及陽性率遠遠高于大腸癌組，差異有統(tǒng)計學意義（t=7.572、χ2=4.082，P＜0.05），單純腹瀉組的FCP 水平及陽性率高于D-IBS 組，差異有統(tǒng)計學意義（t=20.386、χ2=205.242，P＜0.05）；單純腹瀉組的FCP水平及陽性率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義，（t=20.783、χ2=233.454，P＜0.05），見表1。

表1 四組FCP 水平及陽性率相比結(jié)果

3 討論

腹瀉是多病原以及多種因素所致的腸道疾病，主要表現(xiàn)是排便次數(shù)，及頻率增加、大便不成形等，會使患者產(chǎn)生程度不一的水電解質(zhì)和酸堿失衡，進而影響其身體健康[6-7]。臨床治療期間，多以繼續(xù)進食、維持營養(yǎng)以及合理調(diào)配為主要原則，同時迅速糾正患者的水電解質(zhì)紊亂等，從而緩解有關癥狀[8]。腹瀉癥狀也可出現(xiàn)在其他腸道疾病患者中，如腹瀉型腸易激綜合征、大腸癌、消化性潰瘍以及克羅恩病等，不同疾病的治療方式存在較大差異。因此，做好腹瀉和其他腸道疾病的鑒別診斷工作意義重大。

以往臨床多結(jié)合臨床癥狀、發(fā)病季節(jié)、病史以及大便性狀等方面開展判斷，但診斷準確度不高，會直接影響到后續(xù)治療方案制定，存在一定的局限性，需要積極探索出其他更為高效的診斷指標[9]。FCP 的來源主要為中性粒細胞和巨噬細胞，可經(jīng)鱉合鋅離子而具備耐熱性，并和鈣離子相結(jié)合以抗蛋白酶活性，于腸腔、外界環(huán)境當中能長期維持在一個相對穩(wěn)定的狀態(tài)，不被酶、細菌破壞，不會隨著糞便降解而被水解，樣本放置于室溫下5 d 不會導致其濃度顯著丟失[10]。據(jù)有關研究顯示，糞便內(nèi)FCP 含量高達血漿內(nèi)FCP 含量的6 倍左右[11]，檢測糞便中的炎癥標志物較血清標志物可以更敏感反映出消化道的炎癥程度。除此之外，F(xiàn)CP 具備調(diào)節(jié)免疫、抗微生物有關活性、炎癥反應中調(diào)節(jié)蛋白等生物保護功能[12]。

舒利瓊等[13]發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)CP 在克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎鑒別診斷中具有較高價值。葛秋霞等[14]發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)CP 在炎癥性腸病、功能性腸病區(qū)分中的準確度較高。但有關FCP 在腹瀉鑒別診斷中的研究較少。本文研究結(jié)果顯示：單純腹瀉組的FCP 水平及陽性率遠遠高于大腸癌組、D-IBS 組和對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），這說明FCP 能協(xié)助臨床鑒別診斷單純腹瀉和大腸癌、D-IBS 等疾病。單純腹瀉患者FCP 水平上升的原因可能是病原體到達腸道后于小腸內(nèi)不斷繁殖，同時黏附在黏膜中釋放出致病性的腸毒素，進而在腸道內(nèi)引發(fā)分泌性反應，最終造成腹瀉發(fā)生，且借助其侵襲能力能直接入侵腸上皮細胞，導致黏膜處在充血和水腫狀態(tài)，促進中性粒細胞浸潤以及炎性介質(zhì)滲出和潰瘍產(chǎn)生，中性粒細胞經(jīng)病變黏膜不斷前移到腸腔中促使FCP 水平上升，由糞便內(nèi)排出體外。D-IBS 是腸功能紊亂使得腸道動力功能出現(xiàn)障礙，進而引發(fā)的腹瀉，無腸黏膜炎癥以及組織受損，不存在中性粒細胞浸潤，不會導致FCP 水平上升。大腸癌患者腫瘤附近存在炎癥細胞浸潤，也能觀察到糞便FCP 水平上升的情況存在。筆者認為，F(xiàn)CP 檢測只能作為單純腹瀉、大腸癌、D-IBS 等疾病鑒別診斷中的一項輔助指標，疾病確診仍需依賴于X 線鋇劑灌腸或者腸鏡、病理學檢查等。既往學者將FCP 水平設定成50 μg/g 當作臨界值以評定炎癥腸病患者活動性，具備較高的敏感度和特異度[15]。本次研究中將FCP 的陽性臨界值同樣設定成50 μg/g。文章中體現(xiàn)了《成人急性感染性腹瀉診療專家共識》[16]的臨床參考標準。

綜上所述，F(xiàn)CP 檢測作為一類無創(chuàng)、迅速且簡便的檢測方式，能為臨床診斷單純腹瀉和大腸癌、D-IBS 等疾病提供重要的參考依據(jù)，有助于臨床醫(yī)師制定后續(xù)治療方案。但此次研究中依舊還有不足之處存在，如文中未對FCP 在腹瀉和克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎鑒別診斷中的作用開展分析，未對FCP 的診斷效能如準確度、敏感度和特異度等指標進行分析，且未對FCP鑒別診斷不同病原所致腹瀉的價值進行統(tǒng)計，得出的結(jié)果依舊有局限性，還需在日后研究中加以完善，進一步證實上述結(jié)論，指導臨床實踐。