四川部分地區(qū)豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體檢測(cè)結(jié)果分析

羅成剛，黃小波，袁蓉，王定國(guó)

（1.成都市畜禽遺傳資源保護(hù)中心 成都 610081；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院豬病研究中心 成都 611130；3.成都市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 成都 610041）

豬瘟（CSFV）和豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的兩類重大傳染病，常單獨(dú)或混合感染，給豬場(chǎng)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。豬瘟疫苗免疫普遍，目前主要問(wèn)題在種豬場(chǎng)的垂直傳播造成仔豬帶毒持續(xù)感染等問(wèn)題。豬繁殖與呼吸綜合征主要表現(xiàn)為呼吸道癥狀和繁殖障礙的傳染病，仔豬和繁殖母豬最為易感，其最為主要的流行病學(xué)特點(diǎn)是持續(xù)感染[1]。豬瘟和豬繁殖與呼吸綜合征主要通過(guò)免疫預(yù)防控制，但疫病存在新的流行性特點(diǎn)，也存在病毒變異情況[2]，增加了豬瘟和豬繁殖與呼吸綜合征的防控難度。加強(qiáng)疫苗免疫和監(jiān)測(cè)，是防控這兩種病的有效手段。

四川是我國(guó)養(yǎng)豬大省，四川豬場(chǎng)的豬瘟和豬繁殖與呼吸綜合征的總體免疫效果較好，但丁夢(mèng)蝶等[3]對(duì)2017 年四川部分地區(qū)豬瘟和豬繁殖與呼吸綜合征的免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，部分豬場(chǎng)或地區(qū)存在免疫失敗的現(xiàn)象，影響?zhàn)B豬業(yè)的健康發(fā)展。因此，針對(duì)豬場(chǎng)開(kāi)展豬瘟和豬繁殖與呼吸綜合征的免疫與抗體監(jiān)測(cè)，不斷提高豬場(chǎng)抗體水平，有助于科學(xué)防控這兩種疫病。

本研究采用IDEXX 試劑盒對(duì)四川成都、攀枝花、廣元、內(nèi)江等地的4 個(gè)豬場(chǎng)的豬血清樣品進(jìn)行了CSFV 和PRRSV 免疫抗體檢測(cè)與分析，為豬場(chǎng)評(píng)估免疫效果和指導(dǎo)改進(jìn)免疫程序提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)場(chǎng)所

四川農(nóng)業(yè)大學(xué)成都校區(qū)豬病研究中心實(shí)驗(yàn)室。

1.2 主要設(shè)備和試劑

酶標(biāo)分析儀、普通離心機(jī)、EP 管、微量移液器、恒溫箱等。豬瘟病毒（CSFV）抗體檢測(cè)試驗(yàn)盒（IDEXX）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）抗體檢測(cè)試驗(yàn)盒（IDEXX），由四川農(nóng)大豬病研究中心提供。

1.3 血清樣本收集與處理

2021 年四川成都、攀枝花、廣元、內(nèi)江四個(gè)地區(qū)4 個(gè)豬場(chǎng)，均進(jìn)行過(guò)CSFV 和PRRSV 疫苗免疫。每個(gè)豬場(chǎng)分別對(duì)仔豬、保育豬、母豬三種豬群采樣，一個(gè)豬場(chǎng)采集了公豬血液樣本，成都、攀枝花、廣元、內(nèi)江四個(gè)豬場(chǎng)分別采樣73、30、61、49 份，共計(jì)213 份豬血液樣品，送到四川農(nóng)業(yè)大學(xué)豬病研究中心實(shí)驗(yàn)室。按不同豬場(chǎng)、不同豬群進(jìn)行分類編號(hào)。未加抗凝劑的血樣在室溫下傾斜放置1h，再放入冰箱中4℃保存24h 后取出，經(jīng)過(guò)5,000r/min 離心5min 后，取黃色透明的上清液即為血清；若采血時(shí)在血里加了抗凝劑，直接3,000r/min 離心5min 取上清。用移液槍將符合要求的血清收集于EP 管內(nèi)后置于-20℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 抗體檢測(cè)

參照IDEXX 試劑盒說(shuō)明書(shū)，對(duì)送檢來(lái)的213 份血清用間接ELISA 法分別進(jìn)行豬瘟和豬繁殖與呼吸綜合征的免疫抗體檢測(cè)。CSFV 抗體結(jié)果判定所需數(shù)據(jù)有樣品孔吸光度值ODTEST、陽(yáng)性對(duì)照的平均值ODPOS、陰性對(duì)照平均值ODNBC。阻斷率=（ODNBC-ODTEST）/ODNBC。豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測(cè)結(jié)果判定所需數(shù)據(jù)有陰性對(duì)照平均值NCx、陽(yáng)性對(duì)照平均值PCx、樣本/陽(yáng)性對(duì)照比率（S/P）。S/P=（樣品孔吸光度值-NCx）/（PCx-NCx）。CSFV 抗體成立前提：陰性對(duì)照平均OD450應(yīng)大于0.5，陽(yáng)性對(duì)照的阻斷率應(yīng)大于50%。PRRSV 抗體實(shí)驗(yàn)成立前提：陽(yáng)性對(duì)照的平均值（PCx）和陰性對(duì)照的平均值（NCx）差值大于或等于0.150。抗體判定標(biāo)準(zhǔn)：CSFV抗體的有無(wú)（陽(yáng)性/陰性）：若被檢樣本的阻斷率大于或等于40%，則為CSFV 抗體陽(yáng)性，反之，則為抗體陰性；PRRSV 抗體的有無(wú)（陽(yáng)性/陰性）：若S/P 值大于或等于0.4，樣品應(yīng)判為PRRSV 陽(yáng)性，反之則為抗體陰性。

1.5 抗體結(jié)果分析

統(tǒng)計(jì)匯總豬場(chǎng)抗體檢測(cè)結(jié)果，分析豬場(chǎng)抗體免疫效果。

2 結(jié)果

2.1 豬瘟的抗體結(jié)果

1）四個(gè)豬場(chǎng)CSFV 抗體的總體檢測(cè)結(jié)果2021 年5—11 月四川省成都、廣元、攀枝花、內(nèi)江4 個(gè)地區(qū)四個(gè)豬場(chǎng)共送檢213 份豬血清，用IDEXX 試劑盒檢測(cè)免疫抗體，共168 份豬瘟抗體陽(yáng)性血清，平均陽(yáng)性率為78.87%。四個(gè)豬場(chǎng)中豬瘟抗體陽(yáng)性率最高為89.80%，最低為63.93%（結(jié)果見(jiàn)表1）。

表1 四個(gè)豬場(chǎng)的豬瘟免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2）四個(gè)豬場(chǎng)不同豬群CSFV抗體結(jié)果表2 的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：在不同豬場(chǎng)的不同豬群階段中，仔豬的豬瘟免疫抗體陽(yáng)性率最高為100.00%，最低為60.00%；母豬的豬瘟免疫抗體陽(yáng)性率最高為100.00%，最低為80.00%；保育豬的豬瘟免疫抗體陽(yáng)性率最高為84.31%，最低為40.00%（結(jié)果見(jiàn)表2）。不同豬場(chǎng)的豬瘟免疫抗體整體情況有所不同。成都豬場(chǎng)豬瘟的總體免疫抗體陽(yáng)性率相對(duì)較高，而廣元豬場(chǎng)豬瘟的總體免疫抗體陽(yáng)性率相對(duì)偏低。

表2 不同豬群階段的豬瘟免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)結(jié)果

1）四個(gè)豬場(chǎng)PRRSV 抗體總體結(jié)果2021 年5—11 月四川成都、廣元、攀枝花、內(nèi)江地區(qū)四個(gè)豬場(chǎng)共送檢213 份豬血清做免疫抗體檢測(cè)，共162 份豬PRRSV 免疫抗體陽(yáng)性血清，陽(yáng)性率為76.06%，四個(gè)豬場(chǎng)中豬PRRSV 免疫陽(yáng)性率最高為93.15%，最低為57.38%，具體結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 四個(gè)豬場(chǎng)的豬PRRSV免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2）四個(gè)豬場(chǎng)PRRSV 不同豬群抗體結(jié)果表4 的結(jié)果顯示：在不同豬場(chǎng)的不同豬群階段中，仔豬的PRRSV 免疫抗體陽(yáng)性率最高為100.00%，最低為50.00%；母豬的PRRSV 免疫抗體陽(yáng)性率最高為100.00%，最低為61.54%；保育豬的PRRSV 免疫抗體陽(yáng)性率最高為100.00%，最低為87.50%。不同豬場(chǎng)的PRRSV 免疫抗體整體情況有所不同。成都豬場(chǎng)除了母豬外，仔豬和保育豬的PRRSV 免疫抗體總體陽(yáng)性率高；而攀枝花、廣元、內(nèi)江豬場(chǎng)的仔豬PRRSV 免疫抗體陽(yáng)性率較低，其余豬群的PRRSV 免疫抗體陽(yáng)性率總體相對(duì)較高。

表4 不同豬群階段的豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

豬瘟和豬繁殖與呼吸綜合征是目前豬場(chǎng)普遍感染和引起持續(xù)損失、危害現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)兩種最主要的疾病，是規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)需要進(jìn)行基礎(chǔ)性免疫的兩類重要疫病，因此這兩類疾病免疫程序的科學(xué)制定非常重要。由于兩類疾病疫苗的生產(chǎn)廠家眾多，同時(shí)豬繁殖與呼吸綜合征疫苗存在毒株性的差異，從而導(dǎo)致規(guī)模化豬場(chǎng)的免疫程序及免疫效果存在很大差異，因此針對(duì)不同的豬場(chǎng)，開(kāi)展免疫效果評(píng)估，根據(jù)評(píng)估結(jié)果及時(shí)改進(jìn)免疫方案，為達(dá)到更高效地防控疫病提供技術(shù)支撐是非常有必要的。

本研究檢測(cè)了四川部分地區(qū)4 個(gè)規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)的免疫抗體檢測(cè)，從表1 和表3 可看出四個(gè)豬場(chǎng)豬瘟和豬PRRSV 的免疫抗體平均陽(yáng)性率分別為78.87%和76.06%。表2 和表4 可看出豬瘟母豬及公豬群體免疫效果較好，仔豬母源抗體整體效果比較理想，而保育豬免疫效果較差，存在感染風(fēng)險(xiǎn)。豬PRRSV 母豬群體免疫效果差異較大，仔豬群體免疫抗體普遍不高，提示部分養(yǎng)殖場(chǎng)的免疫程序及免疫劑量需要進(jìn)一步的優(yōu)化。

從表1 和表3 可看出攀枝花和廣元地區(qū)的兩個(gè)豬場(chǎng)豬瘟和豬PRRSV 的免疫抗體陽(yáng)性率整體較低，其中豬瘟抗體陽(yáng)性率分別為66.67%和63.93%，豬PRRSV 抗體陽(yáng)性率分別為70.00%和57.38%。初步分析造成的原因：①在采樣時(shí)就發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)豬場(chǎng)的環(huán)境衛(wèi)生狀況不良；②飼養(yǎng)管理不規(guī)范，免疫程序執(zhí)行不嚴(yán)格。因此對(duì)于這兩個(gè)豬群應(yīng)加強(qiáng)免疫抗體監(jiān)測(cè)，及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免工作。

分階段統(tǒng)計(jì)顯示，從表2 可以看出仔豬和母豬的豬瘟免疫效果較好，而保育豬的免疫效果相對(duì)較差，從表4 可以看出保育豬和母豬的豬繁殖與呼吸綜合征免疫效果好，而仔豬的免疫效果較差，表明不同的豬群對(duì)于疫苗的免疫反應(yīng)存在差異。跟沒(méi)有獲得母源抗體的仔豬相比，獲得了母源抗體的仔豬受疾病感染的程度要輕很多。母源抗體的持續(xù)時(shí)間對(duì)于仔豬的首次免疫有很大影響。保育豬極易發(fā)生應(yīng)激，出現(xiàn)免疫效果的差異變化可能與動(dòng)物機(jī)體的免疫系統(tǒng)不完善、飼養(yǎng)管理?xiàng)l件以及母源抗體干擾有關(guān)。

因此，在規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)內(nèi)開(kāi)展持續(xù)的抗體監(jiān)測(cè)，根據(jù)免疫抗體消長(zhǎng)規(guī)律制定科學(xué)的針對(duì)性強(qiáng)的免疫計(jì)劃是保證豬場(chǎng)健康養(yǎng)殖的關(guān)鍵。免疫效果不理想的豬群，應(yīng)分析免疫失敗原因并及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免。同時(shí)，豬場(chǎng)要重視環(huán)境衛(wèi)生，做好消毒工作，搞好飼養(yǎng)管理，增

強(qiáng)機(jī)體抗病力，提高免疫效果。還要注意消除其它疾病對(duì)疫苗免疫的影響。有條件的豬場(chǎng)盡量開(kāi)展種豬的豬瘟和豬繁殖與呼吸綜合征凈化。