超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)蒸餾酒中的3種非法添加物質(zhì)的方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果

◎ 楊 針，黎姝蔓

（重慶市永川食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 402160）

我國(guó)白酒多以高粱、小麥等谷物為原料發(fā)酵后蒸餾儲(chǔ)藏所制，以蒸餾酒為主導(dǎo)[1]。大多數(shù)白酒中含有一定比例的醛類(lèi)、甲醇和雜醇油等物質(zhì)易引發(fā)飲酒者的上頭、口干等不適反應(yīng)，一些不法商販違規(guī)在白酒中添加頭痛粉（主要成分為對(duì)乙酰氨基酚、乙酰水楊酸和咖啡因）以緩解劣質(zhì)白酒引起的頭痛等不適，以次充好。目前，將白酒中對(duì)乙酰氨基酚、乙酰水楊酸和咖啡因作為食品中的非法添加物進(jìn)行檢測(cè)研究時(shí)，普遍采用高效液相色譜法和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[2-7]，這些檢測(cè)方法存在靈敏度、分辨率、回收率不高，操作復(fù)雜等不足，無(wú)法滿(mǎn)足微量或痕量成分的檢測(cè)需求，因此筆者前期建立了蒸餾酒中對(duì)乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，UPLC-MS/MS）檢測(cè)方法，為驗(yàn)證該自制方法的適用情況，邀請(qǐng)3家相關(guān)檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)共同對(duì)該自制方法在不同環(huán)境、不同設(shè)備下的精密度、線(xiàn)性、回收率進(jìn)行驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

水楊酸標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品（批號(hào)1921804，含量：99.7%），壇墨質(zhì)檢-標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；對(duì)乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品（批號(hào)1201801，含量：98.0%），壇墨質(zhì)檢-標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；咖啡因標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品（批號(hào)0981904，含量：98.0%），壇墨質(zhì)檢-標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；蒸餾酒酒樣：市售；甲酸（色譜純）；甲醇（色譜純）。

1.2 儀器與設(shè)備

超高效液相色譜儀-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜儀，配有電噴霧（ESI）離子源；萬(wàn)分之一電子天平；千分之一電子天平；水浴鍋；超純水機(jī)。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液的配制

對(duì)照品儲(chǔ)備液：分別精密稱(chēng)取水楊酸、對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品10 mg（精確至0.000 1 g）置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。分別得到對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和水楊酸對(duì)照品儲(chǔ)備液，濃度為 400 μg·mL-1，-18 ℃低溫避光保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：分別準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各2.5 mL于同一20 mL容量瓶中，用超純水稀釋定容至刻度，配制成濃度為50 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確量取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液2.0 mL于同一50 mL容量瓶中，用超純水稀釋定容至刻度，配制成濃度為2 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.4 樣品前處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取5 g試樣（精確至0.001 g）置于50 mL燒杯中，于60 ℃水浴加熱30 min，將燒杯中揮發(fā)后剩余殘?jiān)哭D(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用純水定容至刻度并搖勻，經(jīng)0.22 μm水相微孔濾膜過(guò)濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。

1.5 儀器參考條件

各實(shí)驗(yàn)室按照自身?xiàng)l件選擇液相色譜柱，設(shè)定高效液相色譜儀流動(dòng)相梯度洗脫程序；監(jiān)測(cè)離子及對(duì)應(yīng)檢測(cè)參數(shù)見(jiàn)表1。

表1 監(jiān)測(cè)離子及對(duì)應(yīng)參數(shù)表

2 結(jié)果與分析

2.1 重慶市永川食品藥品檢驗(yàn)所相關(guān)數(shù)據(jù)

2.1.1 對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

儀器型號(hào)：Agilent 6420型三重四極桿質(zhì)譜儀。由表2可知，對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)符合GB/T 27404—2008中線(xiàn)性回歸方程的相關(guān)系數(shù)≥0.98的要求。

表2 對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)表

2.1.2 檢測(cè)精密度及回收率

選用的蒸餾酒酒樣基質(zhì)均為空白基質(zhì)，本底值均為未檢出。由表3可知，3種非法添加物質(zhì)在空白基質(zhì)中按照對(duì)乙酰氨基酚 20.58 ng·mL-1、41.16 ng·mL-1、102.90 ng·mL-1，咖啡因 20.78 ng·mL-1、41.55 ng·mL-1、103.88 ng·mL-1，水楊酸 21.73 ng·mL-1、43.47 ng·mL-1、108.67 ng·mL-1進(jìn)行添加，樣品經(jīng)處理后上機(jī)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD均≤2.52%，符合GB/T 27404—2008中被測(cè)組分含量為1 mg·kg-1時(shí)，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)≤11%的要求；3種物質(zhì)在不同的加標(biāo)濃度水平下的平均回收率在94.7%～105.0%，符合GB/T 27404—2008中被測(cè)組分含量為0.1～1.0 mg·kg-1時(shí)，回收率為80%～110%的要求。

表3 對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸檢測(cè)結(jié)果表

2.2 重慶市計(jì)量質(zhì)量檢測(cè)研究院第三分院相關(guān)數(shù)據(jù)

2.2.1 對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

儀器型號(hào)：API4000型三重四極桿質(zhì)譜儀。由表4可知，對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)符合GB/T 27404—2008中線(xiàn)性回歸方程的相關(guān)系數(shù)≥0.98的要求。

表4 對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)表

2.2.2 檢測(cè)精密度及回收率

選用的蒸餾酒酒樣基質(zhì)均為空白基質(zhì)，本底值均為未檢出。由表5可知，3種非法添加物質(zhì)在空白基質(zhì)中按照 10 ng·mL-1、40 ng·mL-1、100 ng·mL-1進(jìn)行添加，樣品經(jīng)處理后上機(jī)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD均≤9.20%，符合GB/T 27404—2008中被測(cè)組分含量為1 mg·kg-1時(shí)，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)≤11%的要求；3種物質(zhì)在不同的加標(biāo)濃度水平下的平均回收率在88.93%～105.62%，符合GB/T 27404—2008中被測(cè)組分含量為0.1～1.0 mg·kg-1時(shí)，回收率為80%～110%的要求。

表5 對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸檢測(cè)結(jié)果表

2.3 重慶市黔江食品藥品檢驗(yàn)所相關(guān)數(shù)據(jù)

2.3.1 對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

儀器型號(hào)：Agilent 6420型三重四極桿質(zhì)譜儀。由表6可知，對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)符合GB/T 27404—2008中線(xiàn)性回歸方程的相關(guān)系數(shù)≥0.98的要求。

表6 對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)表

2.3.2 檢測(cè)精密度及回收率

選用的蒸餾酒酒樣基質(zhì)均為空白基質(zhì)，本底值均為未檢出。由表7可知，3種非法添加物質(zhì)在空白基質(zhì)中按照 20 ng·mL-1、40 ng·mL-1、100 ng·mL-1進(jìn)行添加，樣品經(jīng)處理后上機(jī)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD均≤5.45%，符合GB/T 27404—2008中被測(cè)組分含量為1 mg·kg-1時(shí)，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)≤11%的要求；3種物質(zhì)在不同的加標(biāo)濃度水平下的平均回收率在87.0%～105.0%，符合GB/T 27404—2008中被測(cè)組分含量為0.1～1.0 mg·kg-1時(shí)，回收率為80%～110%的要求。

表7 對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸檢測(cè)結(jié)果表

2.4 重慶市永川區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心相關(guān)數(shù)據(jù)

2.4.1 對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

儀器型號(hào)：TRIPLE QuAD 4500型三重四極桿質(zhì)譜儀。由表8可知，對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)符合GB/T 27404—2008中線(xiàn)性回歸方程的相關(guān)系數(shù)≥0.98的要求。

表8 對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)表

2.4.2 檢測(cè)精密度及回收率

選用的蒸餾酒酒樣基質(zhì)均為空白基質(zhì)，本底值均為未檢出。由表9可知，3種非法添加物質(zhì)在空白基質(zhì)中按照對(duì)乙酰氨基酚 20 .58 ng·mL-1、41.16 ng·mL-1、102.90 ng·mL-1，咖啡因 20 .78 ng·mL-1、41.55 ng·mL-1、103.88 ng·mL-1，水楊酸 21.73 ng·mL-1、43.47 ng·mL-1、108.67 ng·mL-1進(jìn)行添加，樣品經(jīng)處理后上機(jī)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD均≤6.55%，符合GB/T 27404—2008中被測(cè)組分含量為1 mg·kg-1時(shí)，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)≤11%的要求；3種物質(zhì)在不同的加標(biāo)濃度水平下的平均回收率在83.9%～95.8%，符合GB/T 27404—2008中被測(cè)組分含量為0.1～1.0 mg·kg-1時(shí)，回收率為80%～110%的要求。

表9 對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸檢測(cè)結(jié)果表

3 結(jié)論

經(jīng)4家實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，該自制方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)均能滿(mǎn)足線(xiàn)性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不低于0.98的要求，滿(mǎn)足被測(cè)組分含量為1 mg·kg-1時(shí)，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)≤11%的要求；滿(mǎn)足被測(cè)組分含量為0.1～1.0 mg·kg-1時(shí)，回收率為80%～110%的要求，確認(rèn)該方法在不同檢測(cè)環(huán)境、不同儀器設(shè)備上普遍可行。