冰凍人血清胱抑素C標準物質量值傳遞的評價*

孫江漫，李 敏，邵 燕，孟祥兆，于洪遠

北京航天總醫院檢驗科，北京 100076

胱抑素C(CysC)又名半胱氨酸蛋白酶抑制劑C，是一種低分子堿性分泌蛋白，相對分子質量為13.3×103，廣泛存在于有核細胞和各種組織中，由機體的所有有核細胞產生[1]。CysC可以保護人體細胞免受內外蛋白酶的不當水解。眾所周知，血清CysC是早期腎損傷的靈敏指標，此外，關于CysC在呼吸系統疾病(如慢性阻塞性肺疾病、肺部惡性腫瘤、胸腔積液、肺氣腫等[2])和心腦血管疾病(如動脈粥樣硬化等[3])中的研究也越來越多。因此CysC檢測結果的準確性對于疾病的預防、診斷和治療尤為重要。量值溯源是保證檢驗結果準確、可靠的重要手段[4]，而溯源至標準物質是臨床檢驗中較為常用的一種方法。本研究通過評價國家二級標準物質冰凍人血清CysC量值傳遞結果擬解決臨床實驗室CysC檢測結果準確性、可比性的問題。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑 日立7170A全自動生化分析儀，羅氏(A，批號：44511701)、瑞源(B，批號：2020082801)2個廠家配套的試劑、校準品、質控品。

1.2實驗標本 國家二級標準物質冰凍人血清CysC標準物質[編號：GBW(E)091173～091176]，標準物質GBW(E)091173～091176認定值±不確定度分別為(0.89±0.10)mg/L、(1.82±0.13)mg/L、(3.55±0.28)mg/L、(5.25±0.29)mg/L。IRMM有證參考物質ERM-DA471/IFCC，認定值±不確定度為(5.48±0.15)mg/L。40份臨床剩余單人份血清標本。

1.3方法

1.3.1測量方法 檢測前對儀器進行日常清洗、維護和保養。按照A、B 2個廠家提供的參數在日立7170A全自動生化分析儀設置參數建立測量系統。使用廠家提供的校準品對系統進行校準，質控在控后同時測量冰凍人血清CysC和ERM-DA471/IFCC以及40份單人份血清標本，其中標準物質按照先奇后偶-倒序-先偶后奇的順序測量3次,連續測2 d；單人份血清標本分2 d測量，每個標本測3次。

1.3.2數據分析

1.3.2.1互通性評價 參考CLSI EP14-A3文件[5]，評價ERM-DA471/IFCC在比對系統中的互通性。

1.3.2.2方法學比對 以冰凍人血清CysC標準物質的靶值為X軸，常規測量系統的測量值為Y軸進行線性擬合，建立回歸方程。將ERM-DA471/IFCC和40份單人份血清標本的測量值代入方程，得出經量值傳遞后的值，計算ERM-DA471/IFCC測量值和量值傳遞后的值與靶值的偏倚。參考CLSI EP9-A3文件[6]，對A、B 2個系統進行方法學比對，采用廣義ESD法進行離群值檢驗，根據偏差圖決定回歸分析模型，計算相關系數、斜率、截距以及其95%置信區間(CI)，預估醫學決定水平處的偏倚，觀察其是否在臨床可接受范圍內。

1.4統計學處理 使用MedCalc20軟件進行ESD離群值檢測及passing-bablok回歸分析，采用Excel 2019進行線性回歸分析、Bland-Altman分析及配對t檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1冰凍人血清CysC標準物質測量結果及回歸分析 2個測量系統的測量值及其與靶值的線性回歸分析結果見表1、圖1、圖2。

圖1 A系統的回歸曲線

圖2 B系統的回歸曲線

表1 冰凍人血清CysC標準物質測量結果

2.2ERM-DA471/IFCC測量值和量值傳遞后的值與靶值的偏倚及正確度評價 ERM-DA471/IFCC測量值與Y值預測值的偏倚為0.33%，故在2個測量系統中有互通。由表2可知經冰凍人血清CysC標準物質量值傳遞后ERM-DA471/IFCC與靶值的偏倚明顯降低，量值傳遞后2個系統的偏倚均小于ERM-DA471/IFCC相對不確定度(2.74%)，即其測量值正確。

表2 2個測量系統量值傳遞前后ERM-DA471/IFCC的測量值及偏倚

2.32個測量系統方法學比對結果

2.3.1A、B系統量值傳遞前后之間的偏倚結果見圖3、4。由圖可知量值傳遞前A、B系統之間的偏倚范圍為-19.15%～6.96%，其中有9個標本超出了臨床可接受范圍，量值傳遞后的偏倚范圍為-7.44%～7.57%，且均在臨床可接受范圍內。

圖3 量值傳遞前A、B系統偏倚的Bland-Altman圖

2.3.2A、B系統量值傳遞前后的比對結果 由表3可知，量值傳遞后A、B 2個系統的相關性更好，斜率更接近于1且95%CI包含1，截距更接近于0且截距95%CI包含0。由表4可知A、B 2個系統量值傳遞后在1 mg/L醫學決定水平處的偏倚有明顯改善。量值傳遞前后A、B系統比對結果見圖5、6。

圖4 量值傳遞后A、B系統偏倚的Bland-Altman圖

圖5 量值傳遞前A、B系統比對結果

表3 2種測量系統量值傳遞前后的方法學比對

表4 2種測量系統量值傳遞前后在醫學決定水平處的偏倚(%)

圖6 量值傳遞后A、B系統比對結果

3 討 論

CysC是一種結構清晰的小分子蛋白，目前臨床實驗室主要采用免疫比濁法測量。根據國家衛生健康委員會臨床檢驗中心調查數據顯示，各實驗室胱抑素測量結果相差較大，實驗室間缺乏可比性。量值溯源是提高臨床實驗室檢測結果正確度和可比性的重要手段[7]，也是避免醫療機構重復檢查、降低患者就醫成本的有效措施[8]。國家二級標準物質冰凍人血清CysC是一種血清基質，具有良好的互換性[9]，且有4個水平，包含正常水平和病理水平，通過其量值溯源可改善臨床實驗室不同測量系統測量結果的正確度和可比性。本研究中2種常規測量系統測量的ERM-DA471/IFCC通過冰凍人血清CysC標準物質量值溯源的結果與靶值的偏倚明顯低于量值傳遞前的結果，且量值傳遞后結果均在其證書要求的不確定度范圍內。ERM-DA471/IFCC在A、B 2個系統中有互通性，但在張傳寶等[10]和本課題前期研究[11]中發現其在部分系統間的互通性并不理想，所以將其作為正確度標本應首先評價其互通性。此外，量值傳遞后A、B 2個系統之間的偏倚也明顯降低，且相關性更好，在1 mg/L醫學決定水平處的偏倚有較大改善，1 mg/L為1歲以上所有人群CysC參考區間上限[12]，故其偏倚的提高對臨床診斷有重要意義。

綜上所述，經冰凍人血清CysC標準物質量值傳遞后各測量系統的正確度和可比性有所提高。