酸漿化學成分及抗胃潰瘍活性研究＊

王 勇，張炯怡謝明軍，宋曉寧，張志勇，馬 瑩，李澤夏瓊，趙 麗，邱紅燕，劉 丹，甘 甜，楊 健

（1.貴州省食品藥品檢驗所 貴陽 550004；2.貴州省食品檢驗檢測院 貴陽 550004；3.貴州省藥品監督管理局 貴陽 550004）

胃潰瘍主要發生于胃部，是一種常見、多發病，同時又是一種易復發的慢性疾病。據有關資料統計其發病率占總人口的10%左右[1]。胃潰瘍的現代醫學發病機制迄今尚未完全闡明，目前認為，由攻擊因子與防御因子之間失去平衡導致的胃粘膜損傷是本病的直接病因[2-4]。雖然許多合成藥物，如質子泵抑制劑、抗生素、組胺受體拮抗劑、前列腺素類似物和胃保護藥等[5]，被廣泛用于治療胃潰瘍，但大多數藥物長時間使用會造成過敏、心律不齊、造血功能改變、男性乳房發育癥和陽痿等副作用[6]，且價格昂貴，不合理用藥時療效較慢。并且由于發病機制復雜，至今仍沒有根治胃潰瘍的藥物。目前對胃潰瘍的治療常需要多種藥物長期聯合治療，且一旦停藥，潰瘍極易復發或出血。因此，開發一種高效的、能完全治愈胃潰瘍的新型藥物是當今世界胃腸病學及藥理學研究領域的重要課題之一。

傳統醫藥和民間醫藥中蘊藏著極為豐富的抗胃潰瘍天然活性物質，是開發抗胃潰瘍藥物的重要資源。且大多數天然產物具有易降解、對非靶標生物毒性低、結構新穎、活性高和副作用少等特點。因此從天然產物中尋求、篩選活性分子，是有效研制具有自主知識產權的創新藥物的一條重要捷徑。

酸漿屬茄科酸漿屬植物，英語名為Ground cherry，拉丁種名為Physalis alkekengiLinn.var.franchetii。在中國藥典中，它的藥材名叫酸漿，又名紅姑娘、掛金燈、燈籠草等[1]。我國酸漿資源豐富，全國大部分地區均有分布，其中北方較多，吉林、河北、新疆維吾爾自治區等地為主要產區[8]。據研究報道，錦燈籠具有抗炎、抗菌、利尿、抗癌等多種藥理作用[7]。酸漿的化學成分早期已被廣泛報道[9-10]，目前為止，從酸漿中大約已經分離出120多種成分[11]，包括生物堿、甾體、黃酮和苯丙素類等。其中，黃酮和甾體（主要為酸堿苦味素類）被廣泛認為是酸漿的特征活性物質。本課題組前期研究發現，酸漿微粉對小鼠水浸應激性潰瘍有明顯的抑制作用，并且低濃度對幽門螺旋桿菌具有較強的抑制和殺滅作用[12]。2015年，本課題組獲得貴州省科技廳科技支撐項目資助（合同編號：黔科合SY字【2015】3032），重點對酸漿進行生物活性部位篩選及考察其抗胃潰瘍作用，研究結果發現，酸漿乙酸乙酯萃取部位具有顯著的抗胃潰瘍活性[13]。因此，本實驗對酸漿乙酸乙酯活性部位進行了化學成分研究，并對分離得到的32個化合物進行了結構鑒定，其中化合物3、4、12、26和32為首次從酸漿中分離得到。通過對分離純化過程中的粗分片段進行體內抗胃潰瘍活性篩選，推測抗胃潰瘍藥效分子并進行體內活性實驗驗證，進一步明確了酸漿苦味素B和木犀草苷是酸漿抗胃潰瘍的物質基礎，其中酸漿苦味素B顯著的抗胃潰瘍活性屬于首次報道。

1 儀器與材料

Bruker AVNCEⅢ600M核磁共振儀[Bruker AVNCE 400M，核磁氘代試劑為MeOD（δH=3.31 ppm，δC=49.00 ppm）、CDCl3（δH=7.26 ppm，δC=77.16 ppm）和DMSO-d6（δH=2.50 ppm，δC=39.52 pp）；譜 圖 軟 件mestrenova version：6.1.0-6224，核 磁 軟 件topspin version：2.1]，ZF-I紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠），KQ-250B超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），RV8 V旋轉蒸發儀（艾卡（廣州）儀器設備有限公司），MS105DU電子天平（由梅特勒-托利多國際股份有限公司），硅膠200-300目及薄層用硅膠板GF254（均由青島海洋化工廠提供），Sephadex LH-20凝膠柱層析（20-80 μm，Amersham Pharmacia Biotech AB公司）；ODS C18反相硅膠和Silica gel 60 RP-18 F254s反相薄層色譜板（德國Merck公司），其他試劑均為分析純。

酸漿全草30 kg于2015年7月購于安徽亳州藥材市場，藥材樣品經貴州省食品藥品檢驗所中藥標本館李陽館長鑒定為茄科酸漿屬植物酸漿（Physalis alkekengiL.var.franchetii），植物標本（No.20150726）存放于貴州省食品藥品檢驗所中藥標本館。

2 方法

2.1 提取與分離

取自然干燥的酸漿植物全草30 kg，粉碎成粗粉，用工業甲醇浸泡3次，每次3-4天，過濾，濾液合并，減壓回收有機溶劑，蒸干的浸膏（4.18 Kg），加適量80-90℃蒸餾水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，回收溶劑，得乙酸乙酯部位浸膏698.36 g，經硅膠柱色譜對乙酸乙酯部位進行分離，先用氯仿、甲醇、乙酸乙酯等有機溶劑對乙酸乙酯部位浸膏進行溶解，拌樣，用850 g硅膠（200-300目）與溶液均勻混合，自然干燥，碾成粉末備用，裝柱（干裝，用200-300目硅膠4 kg），石油醚-丙酮100∶1梯度洗脫，用1000 mL錐形瓶接液，濃縮回收溶劑，第50瓶開始用石油醚-丙酮100∶2梯度洗脫，第70瓶開始用石油醚丙酮100∶2.5梯度洗脫，第200瓶開始用石油醚-丙酮=20∶1梯度洗脫，利用薄層硅膠板檢測物質并展開。

合并粗分得以下幾個組分:Fr A 1～14（5.9888 g）、Fr B 15～23（0.5564 g）、Fr C 24～27（0.2610 g）、Fr D 28～36（12.1684 g）、Fr E 37～51（1.8412 g）、Fr F 52～60（1.4990 g）、Fr G 61～71（4.8549 g）、Fr H 72～79（5.6053 g）、Fr I 80～89（5.6306 g）、Fr J 90～115（1.7796 g）、Fr K 116～124（4.9952 g）、Fr L 125～140（2.9292 g）、Fr M 141～169（8.7300 g）、Fr N 170～182（9.8300 g）、Fr O 183～206（28 g）、Fr P 207～233（32 g）、Fr Q 234～257（50 g）、Fr R（412.5353 g）。運用硅膠柱層析、C18反相柱層析、凝膠Sephadex LH-20柱層析和MCI大孔樹脂柱層析等各類柱色譜分離方法對粗分片段進行分離純化，分別從片段Fr G中分離得到化合物1（1.0 mg）、2（95 mg）、3（8.5 mg）、4（7.6 mg）、5（12 mg）、6（19 mg）、7（8.0 mg）和8（12 mg）；從片段Fr H中分離得到化合物9（7.0 mg）、10（6.0 mg）和11（3.0 mg）；從片段Fr I中分離得到化合物12（7.0 mg）、13（8.0 mg）、14（20 mg）和15（35 mg）；從片段Fr JK中分離得到化合物16（11.5 mg）、17（37 mg）、18（6.6 mg）、19（68 mg）和20（7.0 mg）；從片段Fr L中分離得到化合物21（10 mg）、22（8.0 mg）、23（12 mg）、24（4.0 mg）和25（9.0 mg）；從片段Fr M中分離得到化合物26（12 mg）和27（20 mg）；從片段Fr N中分離得到化合物28（10 mg）、29（8.0 mg）、30（14 mg）。

2.2 抗胃潰瘍活性研究

2.2.1灌胃溶液的制備

待測粗分片段組：分別取Fr A、Fr D、Fr G、Fr H、Fr I、Fr K、Fr M、Fr N和Fr OPQR（由Fr O、Fr P、Fr Q、Fr R合并所得）九個粗分片段500 mg，用0.5%羧甲基纖維素鈉（Carboxymethylcellulose sodium,CMC-Na）配成50 mg·mL-1混懸液；待測單體藥物組：分別取木犀草苷和酸漿苦味素B適量，用0.5%CMC-Na配成一定濃度的混懸液。并用0.5% CMC-Na分別將每組待測藥物混懸液稀釋至三個濃度梯度；陽性藥物組：取法莫替丁200 mg，用0.5% CMC-Na研磨定容200 mL，制得濃度為1.0 mg·mL-1的混懸液。

2.2.2分組及給藥

粗分片段抗胃潰瘍活性篩選實驗：取SD大鼠33只（約200 g），雌雄各半，按完全隨機設計法分為11組，每組3只：法莫替丁10 mg·kg-1對照組、模型對照組、待測藥物組（Fr A組、Fr D組、Fr G組、Fr H組、Fr I組、Fr K組、Fr M組、Fr N組和Fr OPQR組，用量均為250 mg·kg-1），分別灌胃給藥，給藥容積為10 mLkg-1，模型對照組給予等容積0.5% CMC-Na溶液。每天給藥一次，給藥2天；

單體藥物抗胃潰瘍考察實驗：取SD小鼠54只（約25 g），雌雄各半，按完全隨機設計法分為9組：正常對照組、模型對照組、酸漿苦味素B高劑量組（25 mg·kg-1）、中劑量組（12.5 mg·kg-1）、低劑量組（6.25 mg·kg-1），木犀草苷高劑量組（40 mg·kg-1）、中劑量組（20 mg·kg-1）、低劑量組（10 mg·kg-1）、法莫替丁40 mg·kg-1組，分別灌胃給藥，給藥容積為40 mg·kg-1，正常對照組和模型對照組分別給予等容積0.5% CMC-Na溶液。每天給藥一次，連續2天。

2.2.3模型制備

粗分片段抗胃潰瘍活性篩選實驗：11組33只大鼠均造模。連續給藥2天，第一天給藥后開始禁食（不禁水，嚴格控制大鼠吃自己的糞便和墊料），24 h后（即第2天）繼續給藥一次，在給藥1 h后灌胃95%乙醇（0.5 ml·200 g-1），乙醇灌胃1 h后，各組大鼠經乙醚麻醉并脫頸處死。

單體化合物抗胃潰瘍考察實驗：除正常對照組6只外，其余8組48只小鼠均造模。連續給藥2天，第一天給藥后開始禁食（不禁水，嚴格控制大鼠吃自己的糞便和墊料），24 h后（即第2天）繼續給藥一次，在給藥1 h后灌胃95%乙醇5 ml·kg-1，1 h后將所有小鼠用乙醚麻醉脫頸處死。

2.2.4觀察指標及方法

（1）胃潰瘍面積的測定

小鼠和大鼠處死后，結扎賁門和幽門并取出胃，向胃腔內注入5%甲醛溶液8 ml。固定30 min后用剪刀沿胃大彎處剪開。用0.9%生理鹽水將胃粘膜表面粘液沖洗干凈后肉眼觀察腺胃部胃粘膜的損傷程度。使用OLYMPUS體式顯微鏡自帶圖片編輯工具計算胃潰瘍面積。并通過以下方程計算胃潰瘍抑制率：

（2）透射電鏡觀察主細胞和壁細胞超微結構

取正常對照組、高劑量藥物組、中劑量藥物組、低劑量藥物組和模型組的小鼠胃，在墊有冰塊的平皿上，沿胃大彎剖開，在大鼠腺胃前后壁中央處，剪下0.5×0.5 cm大小胃黏膜組織，經2.5%戊二醛4℃固定，包埋切片，制作電鏡標本，于8000倍下觀測主細胞粗面內質網和線粒體結構改變情況，12000倍下觀測壁細胞滑面內質網和線粒體結構的改變情況。

2.2.5統計學處理

數據以SPSS統計軟件進行分析，組間差異比較采用兩樣本均數比較的t檢驗。

3 結果與分析

3.1 各化合物結構鑒定結果

化合物1：白色非晶型固體,m.p:156-160℃,ESIMSm/z:401[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:4.38(1H,m,H-6),3.84(1H,m,H-3),1.85,2.00(2H,m,H-16),1.82(2H,m,H-24),1.64,2.01(2H,m,H-4),1.54,1.85(2H,m,H-2),1.54(1H,m,H-25),1.45,1.55(2H,m,H-1),1.38(2H,m,H-23),1.37(1H,m,H-8),1.35(1H,m,H-20),1.33,1.39(2H,m,H-11),1.25,1.84(2H,m,H-7),1.25(1H,m,H-9),1.14,1.96(2H,m,H-12),1.14(H,m,H-17),1.08(H,m,H-14),1.07,1.55(2H,m,H-15),0.99(3H,s,H-19),0.95(3H,d,J=7.2 Hz,H-27),0.94(3H,d,J=7.2 Hz,H-26),0.94(3H,d,J=7.2 Hz,H-21),0.90(2H,m,H-22),0.70(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:131.1(C-5),128.9(C-6),67.7(C-3),55.8(C-14),55.4(C-17),45.8(C-9),42.8(C-13),41.9(C-4),39.8(C-12),39.1(C-24),36.7(C-22),36.7(C-1),35.5(C-20),35.5(C-10),32.9(C-2),30.1(C-7),30.8(C-8),29.5(C-25),28.3(C-16),24.2(C-23),24.1(C-15),21.2(C-11),20.0(C-26),19.1(C-27),18.4(C-19),17.8(C-21),12.1(C-18)。以上光譜數據與文獻[14]報道的基本一致，因此，鑒定化合物1為(24S)-麥角甾-5-烯-3β-醇。

化合物2：白色針狀結晶,m.p:137-138℃,ESIMSm/z:415[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:5.34(H,m,H-6),3.52(1H,m,H-3),2.27,1.68(2H,m,H-4),2.03,1.78(2H,m,H-7),1.68(2H,m,H-28),1.67,1.32(2H,m,H-1),1.65,1.28(2H,m,H-22),1.57,1.31(2H,m,H-12),1.56,1.81(2H,m,H-2),1.51,1.03(2H,m,H-15),1.44(1H,m,H-8),1.42(1H,m,H-9),1.26,1.52(2H,m,H-11),1.27(1H,m,H-20),1.25(3H,s,H-19),1.23,1.25(2H,m,H-23),1.17(3H,s,H-18),1.16,1.83(2H,m,H-16),1.15(1H,m,H-25),1.08(H,m,H-17),1.06(3H,s,H-6),1.05(H,m,H-14),1.00(3H,s,H-27),0.92(3H,s,H-21),0.91(3H,s,H-29),0.86(1H,m,H-24);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:140.8(C-5),121.7(C-6),71.7(C-3),56.8(C-4),51.2(C-9),50.1(C-17),45.8(C-14),42.3(C-24),42.3(C-13),39.8(C-10),36.5(C-22),33.9(C-20),33.7(C-1),32.4(C-2),31.9(C-25),31.9(C-7),31.8(C-26),31.6(C-8),28.3(C-16),28.2(C-23),26.1(C-15),24.3(C-12),23.1(C-28),21.2(C-11),21.1(C-18),19.1(C-21),18.3(C-19),12.0(C-29),11.9(C-27)。以上光譜數據與文獻[15]報道的基本一致，因此，鑒定化合物2為β-谷甾醇。

化合物3：白色晶體,m.p:113-115℃,ESI-MSm/z:391[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:4.05(H,m,H-3),3.84(1H,d,J=2.2 Hz,H-6),2.25(2H,dd,J=13.3,11.4 Hz,H-4),1.94,1.08(2H,m,H-12),1.83,1.16(2H,m,H-16),1.68(H,m,H-8),1.67,1.53(2H,m,H-7),1.67,1.33(2H,m,H-1),1.56,1.80(2H,m,H-2),1.51,1.01(2H,m,H-15),1.46,1.31(2H,m,H-11),1.42(H,m,H-9),1.33,1.10(2H,m,H-22),1.27(3H,s,H-19),1.26(H,m,H-20),1.25,1.23(2H,m,H-23),1.17(1H,m,H-25),1.07(H,m,H-17),1.03(H,m,H-14),0.91(3H,d,J=6.9 Hz,H-21),0.87(2H,m,H-24),0.83(3H,d,J=6.9 Hz,H-27),0.81(3H,d,J=6.9 Hz,H-26),0.7(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:76.9(C-5),67.7(C-3),63.8(C-6),55.4(C-17),55.4(C-14),45.7(C-9),42.8(C-13),41.9(C-4),41.3(C-24),39.8(C-12),39.1(C-10),36.7(C-7),35.5(C-22),35.2(C-20),32.9(C-1),30.7(C-2),30.1(C-8),28.3(C-25),28.3(C-16),24.1(C-23),24.1(C-15),21.2(C-11),20.1(C-27),20.0(C-26),18.4(C-21),17.8(C-19),12.1(C-18)。以上光譜數據與文獻[16]報道的基本一致，因此，鑒定化合物3為6β-氯膽甾烷-3β,5α-二醇。

化合物4：m.p:113-115℃,ESI-MSm/z:292.4451[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:4.08(1H,m,H-3),3.84(H,m,H-6),2.25,1.65(2H,m,H-4),1.99,1.17(2H,m,H-12),1.84,1.26(2H,m,H-16),1.83(1H,m,H-8),1.82,1.96(2H,m,H-7),1.66(2H,m,H-28),1.56,1.41(2H,m,H-1),1.53,1.09(2H,m,H-15),1.52,1.85(2H,m,H-2),1.39,1.34(2H,m,H-11),1.34(1H,m,H-20),1.31,1.01(2H,m,H-22),1.27(3H,s,H-19),1.24(1H,m,H-9),1.23(1H,m,H-25),1.13(1H,m,H-23),1.10(H,m,H-14),1.09(H,m,H-17),0.92(1H,m,H-24),0.90(3H,s,H-21),0.84(3H,t,J=7.2 Hz,H-29),0.82(3H,d,J=6.9 Hz,H-27),0.80(3H,d,J=6.9 Hz,H-26),0.68(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:76.9(C-5),67.7(C-3),63.8(C-6),56.1(C-14),55.4(C-17),45.9(C-24),45.8(C-9),42.8(C-13),41.9(C-4),39.9(C-12),39.1(C-10),36.2(C-20),35.5(C-7),33.9(C-22),32.9(C-1),30.7(C-2),30.2(C-8),29.2(C-28),28.2(C-16),26.1(C-23),24.1(C-15),23.1(C-25),21.2(C-11),19.8(C-27),19.0(C-26),18.7(C-21),18.4(C-19),12.2(C-18),12.0(C-29)。以上光譜數據與文獻[17]報道的基本一致，因此，鑒定化合物4為5-羥基,6-氯-谷甾醇。

化合物5：黃色粉末,m.p:274-276℃,ESI-MSm/z:285[M-H]-;1H-NMR(MeOD,600 MHz)δ:8.08(1H,d,J=8.6 Hz,H-6'),8.08(1H,d,J=8.6 Hz,H-2'),6.39(1H,brs,H-8),6.17(1H,brs,H-6),6.09(1H,d,J=8.6 Hz,H-5'),6.09(1H,d,J=8.6 Hz,H-3');13C-NMR(MeOD,150 MHz)δ:177.4(C-4),165.6(C-7),162.5(C-5),160.6(C-4'),158.3(C-9),148.1(C-2),137.1(C-3),130.7(C-6'),130.7(C-2'),123.8(C-1'),116.3(C-5'),116.3(C-3'),104.6(C-10),99.3(C-6),94.5(C-8)。以上光譜數據與文獻[18]報道的基本一致，因此，鑒定化合物5為山奈酚。

化合物6：黃色粉末,m.p:328-330℃,ESI-MSm/z:285[M-H]-;1H-NMR(MeOD,600 MHz)δ:7.34(1H,brs,H-2'),7.33(1H,dd,J=2.2 Hz,8.1 Hz H-6'),6.86(H,d,J=8.1 Hz,H-5'),6.44(1H,s,H-3),6.31(1H,d,J=1.44 Hz,H-8),6.10(1H,d,J=1.44 Hz,H-6);13C-NMR(MeOD,150 MHz)δ:183.3(C-4),170.9(C-7),165.9(C-2),162.9(C-5),159.7(C-9),152.0(C-3'),147.4(C-4'),123.2(C-1'),120.1(C-6'),116.8(C-5'),113.7(C-2'),103.8(C-10),103.1(C-3),101.6(C-6),96.2(C-8)。以上光譜數據與文獻[19]報道的基本一致，因此，鑒定化合物6為木犀草素。

化合物7：黃色粉末,m.p:310-312℃,ESI-MSm/z:303[M+H]+;1H-NMR(MeOD,600 MHz)δ:7.73(1H,d,J=1.9 Hz,H-2'),7.63(1H,dd,J=8.5,1.9 Hz,H-6'),6.88(1H,d,J=8.5 Hz,H-5'),6.38(1H,d,J=1.7 Hz,H-8),6.18(1H,d,J=1.7 Hz,H-6);13C-NMR(MeOD,150 MHz)δ:177.3(C-4),165.6(C-7),162.5(C-5),158.2(C-9),148.8(C-4'),148.0(C-2),146.2(C-3'),137.2(C-3),124.2(C-1'),121.7(C-6'),116.2(C-2'),116.0(C-5'),104.5(C-10),99.3(C-6),94.4(C-8)。以上光譜數據與文獻[20]報道的基本一致，因此，鑒定化合物7為槲皮素。

化合物8：白色針狀結晶,m.p:199-201℃,ESIMSm/z:155[M+H]+;1H-NMR(MeOD,600 MHz)δ:7.46(1H,d,J=1.2 Hz,H-2),7.45(1H,dd,J=8.1,1.2 Hz,H-6),6.82(1H,d,J=8.1 Hz,H-5);13C-NMR(MeOD,150 MHz)δ:170.3(C-7),151.6(C-4),146.1(C-3),123.9(C-6),123.1(C-1),117.8(C-2),115.8(C-5)。以上光譜數據與文獻[21]報道的基本一致，因此，鑒定化合物8為原兒茶酸。

化合物9：無色油狀物,ESI-MSm/z:434[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:4.05(1H,m,H-3),3.76(1H,brs,H-1),1.99,1.68(2H,m,H-4),1.99,1.18(2H,m,H-12),1.84,1.67(2H,m,H-2),1.66,1.44(2H,m,H-6),1.59(H,m,H-14),1.57(1H,m,H-25),1.55,1.39(2H,m,H-16),1.52(1H,m,H-8),1.47,1.09(2H,m,H-15),1.42,1.33(2H,m,H-7),1.42,0.97(2H,m,H-22),1.42,0.94(2H,m,H-23),1.41(1H,m,H-20),1.35,1.33(2H,m,H-11),1.25(1H,m,H-9),1.19(1H,m,H-24),1.18(3H,s,H-19),1.16(1H,m,H-5),1.10(H,m,H-17),0.91(3H,d,J=6.5 Hz,H-21),0.84(3H,d,J=6.9 Hz,H-26),0.78(3H,d,J=6.6 Hz,H-28),0.77(3H,d,J=6.9 Hz,H-27),0.70(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:76.9(C-1),67.7(C-3),56.2(C-17),55.4(C-14),45.8(C-9),42.8(C-13),41.9(C-4),39.9(C-12),39.1(C-24),38.8(C-8),38.0(C-10),35.9(C-5),35.5(C-20),33.7(C-22),32.4(C-7),30.7(C-23),30.7(C-2),30.3(C-25),28.2(C-16),28.2(C-6),24.1(C-15),21.2(C-11),20.2(C-26),18.7(C-27),18.4(C-21),18.3(C-19),15.4(C-28),12.2(C-18)。以上光譜數據與文獻[22]報道的基本一致，因此，鑒定化合物9為(24R)-甲基膽甾-3β,5α,6β-三醇。

化合物10：1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:4.06(1H,m,H-3),3.84(1H,m,H-6),2.25,1.68(2H,dd,m,H-4),1.93,1.09(2H,m,H-12),1.82,1.57(2H,m,H-2),1.82,1.17(2H,m,H-16),1.68(1H,m,H-8),1.67(2H,m,H-28),1.66,1.31(2H,m,H-1),1.53,1.68(2H,m,H-7),1.51,1.02(2H,m,H-15),1.45,1.32(2H,m,H-11),1.42(1H,m,H-9),1.33,1.11(2H,m,H-22),1.27(3H,s,H-19),1.26(1H,m,H-20),1.22,1.26(2H,m,H-23),1.16(1H,m,H-25),1.08(H,m,H-17),1.04(H,m,H-14),0.90(3H,d,J=6.9 Hz,H-21),0.86(1H,m,H-24),0.84(3H,t,J=7.2 Hz,H-29),0.83(3H,d,J=6.9 Hz,H-27),0.81(3H,d,J=6.9Hz,H-26),0.70(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:76.9(C-5),67.7(C-6),63.8(C-3),56.1(C-17),55.4(C-14),45.8(C-24),45.8(C-9),42.7(C-13),41.9(C-4),39.9(C-12),39.1(C-10),36.2(C-22),36.2(C-20),35.5(C-7),33.9(C-1),33.0(C-2),30.7(C-8),30.1(C-28),29.1(C-16),28.2(C-25),26.1(C-15),24.1(C-23),23.1(C-11),21.2(C-26),19.8(C-21),19.0(C-27),18.4(C-19),12.2(C-18),12.0(C-29)。以上光譜數據與文獻[23]報道的基本一致，因此，鑒定化合物10為3,5,6-三羥基-谷甾烷。

近年來，我國高層建筑抗震設計實例中也廣泛應用基于性能考慮的抗震設計方法，且目前已取得了顯著的成績，這對提高我國高層建筑的抗震設計的可靠性有很大的推動。隨著我國建筑行業的不斷發展，大量研究工作的不斷深入和工程實例的不斷應用，基于性能考慮的抗震設計方法也會變得日趨完善，我國高層建筑的抗震能力又會上到一個新的臺階。

化合物11：白色結晶,m.p:240-241℃,ESI-MSm/z:430[M-H2O]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:4.32(1H,m,H-3),3.95(1H,m,H-6),2.04,1.75(2H,m,H-4),1.90,1.08(2H,m,H-12),1.84,1.18(2H,m,H-16),1.82,1.55(2H,m,H-2),1.69(2H,m,H-28),1.68(1H,m,H-8),1.66,1.54(2H,m,H-7),1.65,1.30(2H,m,H-1),1.50,1.00(2H,m,H-15),1.48,1.30(2H,m,H-11),1.41(1H,m,H-9),1.32,1.26(2H,m,H-22),1.28(3H,s,H-19),1.27,1.22(2H,m,H-23),1.25(1H,m,H-20),1.15(1H,m,H-25),1.09(H,m,H-17),1.01(H,m,H-14),0.91(3H,d,J=6.9 Hz,H-21),0.85(1H,m,H-24),0.84(3H,t,J=7.2 Hz,H-29),0.83(3H,d,J=6.9 Hz,H-26),0.81(3H,d,J=6.9Hz,H-27),0.68(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:84.3(C-5),75.7(C-6),67.9(C-3),56.1(C-17),55.8(C-14),46.1(C-24),45.8(C-9),42.7(C-13),39.8(C-7),39.8(C-4),36.2(C-10),34.1(C-12),33.9(C-20),33.7(C-2),30.5(C-28),30.5(C-22),30.4(C-1),29.2(C-25),28.2(C-8),26.1(C-16),24.1(C-15),23.1(C-11),21.3(C-23),19.8(C-26),19.1(C-27),18.8(C-21),18.2(C-19),12.2(C-29),12.0(C-18)。以上光譜數據與文獻[24]報道的基本一致，因此，鑒定化合物11為(24S)-24-乙基膽甾-3β,5a,6a-三醇。

化合物12：淡黃色粉末,m.p:232-234℃,ESI-MSm/z:162[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:8.09(1H,d,J=7.5 Hz,H-4),7.94(1H,s,H-2),7.42(1H,d,J=7.5 Hz,H-7),7.28(1H,m,H-6),7.27(1H,m,H-5);13CNMR(CDCl3,150 MHz)δ:170.5(C-10),137.8(C-9),133.7(C-2),126.2(C-8),123.3(C-5),122.1(C-4),115.7(C-7),111.5(C-6),108.8(C-3)。以上光譜數據與文獻[25]報道的基本一致，因此，鑒定化合物12為3-吲哚甲酸。

化合物13：淡黃色粉末,m.p:112-116℃,ESI-MSm/z:123[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:9.86(1H,s,H-7),7.80(1H,d,J=8.3 Hz,H-6),7.80(1H,d,J=8.3 Hz,H-2),6.96(1H,d,J=8.3 Hz,H-5),6.96(1H,d,J=8.3 Hz,H-3);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:191.1(C-7),165.8(C-4),132.4(C-6),132.4(C-2),130.2(C-1),116.0(C-5),116.0(C-3)。以上光譜數據與文獻[26]報道的基本一致，因此，鑒定化合物13為4-對羥基苯甲醛。

化合物14：無色液體,m.p:18-20℃,ESI-MSm/z:242[M+Na]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:3.66(3H,s,H-15),2.29(2H,t,J=7.6 Hz,H-2),1.63(2H,m,H-13),1.26(20H,brs,H-3-12),0.88(3H,t,J=6.8 Hz,H-14);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:174.3(C-1),51.4(C-15),34.1(C-2),32.0(C-12),25.0(C-3),29.7(C-11),29.7(C-10),29.7(C-9),29.6(C-8),29.5(C-7),29.4(C-6),29.3(C-5),29.2(C-4),22.7(C-13),14.1(C-14)。以上光譜數據與文獻[27]報道的基本一致，因此，鑒定化合物14為肉豆蔻酸甲酯。

化合物15：無色油狀液體,ESI-MSm/z:242[MH]-;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:5.36(2H,m,H-12,13),5.36(2H,m,H-9,10),2.78(2H,dd,J=6.4,6.6 Hz,H-11),2.30(2H,t,J=7.6 Hz,H-2),2.05(2H,m,H-14),2.05(2H,m,H-8),1.25(6H,brs,H-15-17),1.25(10H,brs,H-3-7),0.89(3H,t,J=6.7 Hz,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:174.3(C-1),130.2(C-13),130.1(C-9),128.1(C-12),128.0(C-10),34.1(C-2),31.6(C-16),29.7(C-8),29.6(C-7),29.4(C-15),29.2(C-6),29.2(C-5),29.1(C-4),27.2(C-14),25.7(C-11),24.9(C-3),22.6(C-17),14.1(C-18)。以上光譜數據與文獻[28]報道的基本一致，因此，鑒定化合物15為亞油酸。

化合物16：白色無定形粉末,ESI-MSm/z:209[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:7.20(1H,d,J=16.4 Hz,H-7),6.11(1H,d,J=16.4 Hz,H-8),4.01(1H,m,H-3),2.44(2H,dd,J=16.4,8.0 Hz,H-4eq),2.30(3H,s,H-10),2.08(2H,dd,J=16.4,10.0 Hz,H-4ax),1.79(2H,ddd,J=12.0,3.9,2.0 Hz,H-2eq),1.78(3H,s,H-13),1.50(2H,t,J=12.0 Hz,H-2ax),1.12(3H,s,H-12),1.10(3H,s,H-11);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:198.6(C-9),142.4(C-7),135.7(C-6),132.4(C-8),132.3(C-5),64.6(C-3),48.4(C-2),42.8(C-4),36.9(C-1),30.1(C-11),28.6(C-12),27.3(C-10),21.6(C-13)。以上光譜數據與文獻[29]報道的基本一致，因此，鑒定化合物16為(+)-3-羥基-β-紫羅蘭酮。

化 合 物17：ESI-MSm/z:415[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:5.35(H,brs,H-6),4.96,4.82(2H,brs,H-26),3.52(1H,m,H-3),2.00,1.84(2H,m,H-16),1.99,1.63(2H,m,H-4),1.99,1.16(2H,m,H-12),1.84,1.55(2H,m,H-2),1.84,1.25(2H,m,H-7),1.74(3H,s,H-27),1.56,1.44(2H,m,H-1),1.54,1.06(2H,m,H-15),1.40(2H,m,H-23),1.38,1.34(2H,m,H-11),1.38(1H,m,H-20),1.38(1H,m,H-8),1.30(3H,s,H-28),1.25(1H,m,H-9),1.14(H,m,H-17),1.08(1H,m,H-14),1.00(3H,s,H-19),0.92(3H,d,J=6.36 Hz,H-21),0.88(2H,m,H-22),0.67(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:150.6(C-25),140.8(C-5),121.7(C-6),109.5(C-26),75.6(C-24),71.8(C-3),56.8(C-14),55.8(C-17),50.1(C-9),42.3(C-22),42.3(C-13),42.3(C-4),39.8(C-12),37.3(C-23),36.5(C-1),35.9(C-10),35.8(C-20),31.9(C-7),31.9(C-2),31.7(C-8),29.7(C-16),29.6(C-28),24.3(C-15),21.1(C-11),19.4(C-27),19.4(C-19),18.8(C-21),11.8(C-18)。以上光譜數據與文獻[30]報道的基本一致，因此，鑒定化合物17為麥角甾-5,25-二烯-3β,24ζ-二醇。

化合物18：白色粉末,ESI-MSm/z:295[M+H]+;1HNMR(CDCl3,600 MHz)δ:5.62(1H,m,H-13),5.62(1H,m,H-10),5.51(1H,m,H-12),5.51(1H,m,H-9),3.67(3H,s,H-1'),2.30(2H,t,J=7.5 Hz,H-2),1.25-1.61(8H,m,H-14-17),1.25-1.61(12H,m,H-3-8),0.89(3H,t,J=7.0 Hz,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:174.3(C-1),135.1(C-13),134.8(C-9),128.2(C-12),128.0(C-10),51.5(C-1'),34.1(C-16),34.1(C-2),29.1(C-15),29.1(C-7),29.0(C-5),28.9(C-6),28.9(C-4),24.9(C-14),24.9(C-8),24.9(C-3),22.5(C-17),22.5(C-11),14.0(C-18)。以上光譜數據與文獻[31]報道的基本一致，因此，鑒定化合物18為十八烷二烯酸甲酯。

化合物19：黃色粉末,m.p:253-254℃,ESI-MSm/z:511[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:6.88(1H,ddd,J=9.96,4.7,2.5 Hz,H-3),5.81(1H,dd,J=10.0,2.1 Hz,H-2),5.59(1H,d,J=5.8 Hz,H-6),4.57(1H,t,J=3 Hz,H-22),3.62(2H,d,J=13.0 Hz,H-27),3.28(2H,brs,J=23.3 Hz,H-4b),2.93(1H,m,H-9),2.87(H,d,J=4.0 Hz,H-25),2.86(1H,s,H-16),2.18(2H,m,H-12),2.15(2H,m,H-11),2.15(H,m,H-8),2.10(2H,dd,J=23.3,4.7 Hz,H-4a),1.95(2H,brs,H-23),1.93(2H,m,H-7),1.78(3H,s,H-21),1.16(3H,s,H-28),1.09(3H,s,H-19);13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ:209.8(C-15),203.0(C-1),172.3(C-18),167.8(C-26),146.7(C-3),136.0(C-5),127.4(C-2),123.9(C-6),106.8(C-14),81.2(C-17),80.8(C-20),78.7(C-13),76.8(C-22),61.1(C-27),54.6(C-16),52.4(C-10),49.9(C-25),40.7(C-8),33.6(C-9),32.8(C-4),31.9(C-23),31.0(C-24),26.1(C-12),24.9(C-28),24.9(C-11),24.6(C-7),22.3(C-21),17.2(C-19)。以上光譜數據與文獻[32]報道的基本一致，因此，鑒定化合物19為酸漿苦味素B。

化合物20：無色針狀晶體,m.p:114-115℃,ESIMSm/z:247[M+Na]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.90(1H,brs,H-4),5.88(1H,dd,J=15.7,5.1 Hz,H-8),5.79(1H,d,J=15.7 Hz,H-7),4.39(1H,m,H-9),2.22,2.43(2H,d,J=16.8 Hz,H-2),1.90(3H,brs,H-13),1.29(3H,d,J=6.4 Hz,H-10),1.01(3H,s,H-12),1.00(3H,s,H-11);13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ:198.7(C-3),163.9(C-5),135.7(C-7),129.0(C-8),126.6(C-4),79.0(C-6),67.9(C-9),49.7(C-2),41.2(C-1),24.0(C-12),23.7(C-10),22.9(C-11),19.1(C-13)。以上光譜數據與文獻[33]報道的基本一致，因此，鑒定化合物20為布盧門醇A。

化合物21：白色晶體,mp 211-213℃,ESI-MSm/z:179[M-H]-;1H-NMR(MeOD,600 MHz)δ:7.55(1H,d,J=15.9 Hz,H-7),7.06(1H,d,J=1.2Hz,H-2),6.95(1H,dd,J=8.1,1.2 Hz,H-6),6.80(1H,d,J=8.1 Hz,H-5),6.24(1H,d,J=15.9 Hz,H-8);13C-NMR(MeOD,150 MHz)δ:171.1(C-9),149.5(C-4),147.1(C-7),146.8(C-3),127.8(C-1),122.9(C-6),116.5(C-8),115.6(C-5),115.2(C-2)。以上光譜數據與文獻[34]報道的基本一致，因此，鑒定化合物21為咖啡酸。

化合物22：白色晶體，m.p:330-332℃,ESI-MSm/z:409[M+H]+;1H-NMR(MeOD,600 MHz)δ:6.02(H,s,H-12),4.86(H,s,H-10),4.85(1H,d,J=7.2 Hz,H-2),4.78(1H,t,J=7.6 Hz,H-6),3.12(1H,q,J=7.2 Hz,H-14),2.79(2H,dd,J=15.5,7.2 Hz,H-1),2.20(2H,m,H-7),2.09(2H,dd,J=15.5,8.2 Hz,H-1),1.90(1H,dd,J=14.0,4.8 Hz,H-8),1.24(3H,d,J=7.2 Hz,H-16),1.11(9H,s,H-18-20);13C-NMR(MeOD,150 MHz)δ:178.9(C-15),175.9(C-11),173.4(C-13),111.7(C-12),102.4(C-4),89.8(C-6),88.0(C-5),87.8(C-2),70.4(C-10),70.2(C-3),68.9(C-9),50.6(C-8),42.2(C-14),38.0(C-7),37.4(C-1),33.3(C-17),29.6(C-18-20),8.6(C-16)。以上光譜數據與文獻[35]報道的基本一致，因此，鑒定化合物22為銀杏內酯A。

化合物23：白色晶體,m.p:295-297℃,ESI-MSm/z:425[M+H]+;1H-NMR(MeOD,600 MHz)δ:6.07(H,s,J=7.0 Hz,H-12),5.39(1H,d,J=4.1 Hz,H-6),5.10(H,s,H-10),4.57(1H,d,J=7.8 Hz,H-2),4.18(1H,d,J=7.8 Hz,H-1),3.02(1H,q,H-14),2.25(2H,dd,J=13.7,4.8 Hz,H-α),2.10(2H,dd,J=14.0,4.3 Hz,H-β),1.90(1H,dd,J=14.3,4.7 Hz,H-8),1.22(3H,d,J=7.1 Hz,H-16),1.12(9H,s,H-18-20);13C-NMR(MeOD,150 MHz)δ:178.4(C-15),175.2(C-11),172.7(C-13),111.9(C-12),100.2(C-4),93.3(C-2),84.7(C-3),80.7(C-6),75.5(C-1),73.5(C-5),70.7(C-10),69.2(C-9),50.5(C-8),43.3(C-14),38.2(C-7),33.3(C-17),29.5(C-18-20),8.1(C-16)。以上光譜數據與文獻[35]報道的基本一致，因此，鑒定化合物23為銀杏內酯B。

化 合 物24：ESI-MSm/z:397[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.35(1H,brd,H-6),5.06,5.07(2H,d,J=1.1 Hz,H-28),4.94,4.96(2H,brs,H-26),3.53(H,m,H-3),2.23,1.70(2H,m,H-4),1.93(2H,m,H-12),1.90(3H,s,H-27),1.84,1.58(2H,m,H-2),1.82,1.18(2H,m,H-16),1.68,1.53(2H,m,H-7),1.61(H,m,H-8),1.60,1.32(2H,m,H-1),1.50,1.02(2H,m,H-15),1.45,1.32(2H,m,H-11),1.41(H,m,H-9),1.32,1.1(2H,m,H-22),1.26,1.21(2H,m,H-23),1.26(H,m,H-20),1.08,1.05(H,m,H-14),1.08(H,m,H-17),1.01(3H,s,H-19),0.97(3H,d,J=6.56 Hz,H-21),0.68(3H,s,H-18);13CNMR(CDCl3,100 MHz)δ:142.8(C-24),140.8(C-5),121.7(C-6),112.4(C-28),111.7(C-26),71.8(C-3),56.8(C-14),55.9(C-17),50.1(C-9),42.4(C-13),42.3(C-4),39.8(C-12),37.3(C-1),36.5(C-10),36.0(C-20),35.5(C-25),31.9(C-23),31.9(C-8),31.7(C-7),30.5(C-2),29.7(C-22),28.2(C-16),24.3(C-15),21.2(C-27),21.1(C-11),19.4(C-19),18.7(C-21),11.9(C-18)。以上光譜數據與文獻[36]報道的基本一致，因此，鑒定化合物24為麥角甾-5,24,25-三烯-3β-二醇。

化 合 物25：ESI-MSm/z:385[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.36(1H,brd,H-6),5.10,4.78(2H,brs,H-27),3.53(H,m,H-3),2.22,1.68(2H,m,H-4),2.21(2H,m,H-25),1.91,1.07(2H,m,H-12),1.84,1.17(2H,m,H-16),1.82,1.57(2H,m,H-2),1.69,1.53(2H,m,H-7),1.61,1.33(2H,m,H-1),1.61(H,m,H-8),1.51,1.03(2H,m,H-15),1.46,1.31(2H,m,H-11),1.43(H,m,H-9),1.32,1.12(2H,m,H-22),1.26(H,m,H-20),1.22,1.24(2H,m,H-23),1.09(H,m,H-17),1.05(H,m,H-14),1.01(3H,s,H-19),0.97(3H,d,J=6.52Hz,H-21),0.78(3H,t,J=6.2 Hz,H-26),0.69(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ:155.8(C-24),139.7(C-5),120.7(C-6),108(C-26),105.6(C-27),70.8(C-3),55.7(C-14),54.9(C-17),49.1(C-9),41.3(C-13),41.3(C-4),38.7(C-12),36.2(C-1),35.5(C-10),34.9(C-20),34.5(C-25),30.9(C-23),30.9(C-7),30.6(C-2),28.7(C-22),28.3(C-8),27.2(C-16),23.3(C-15),20.1(C-11),18.4(C-19),17.8(C-21),13.1(C-18)。以上光譜數據與文獻[37]報道的基本一致，因此，鑒定化合物25為印度小酸漿醇A。

化合物26：淺黃色油狀液體,mp 202-204℃,ESIMS m/z:297[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.08(1H,m,H-2),5.07(2H,m,H-1),2.20(2H,m,H-4),1.48(3H,s,H-20),1.47,0.99(19H,m,H-5-15),0.78(12H,m,H-16-19);13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ:142.0(C-3),113.5(C-2),49.0(C-1),39.0(C-4),38.9(C-14),38.3(C-10),36.5(C-6),36.4(C-12),36.2(C-8),31.8(C-11),31.7(C-7),28.7(C-15),27.0(C-5),23.8(C-13),23.4(C-9),21.7(C-17),21.6(C-16),20.3(C-18),20.1(C-18),18.7(C-18)。以上光譜數據與文獻[38]報道的基本一致，因此，鑒定化合物26為葉綠醇。

化合物27：白色蠟狀物,mp 48-50℃,ESI-MSm/z:339[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:1.21(44H,brs,H-2-23),0.79(3H,m,H-24),0.79(3H,m,H-1);13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ:30.9(C-13),30.9(C-12),28.7(C-21),28.7(C-20),28.7(C-19),28.7(C-18),28.7(C-17),28.7(C-16),28.7(C-15),28.7(C-14),28.3(C-22),28.3(C-11),28.3(C-10),28.3(C-9),28.3(C-8),28.3(C-7),28.3(C-6),28.3(C-5),28.3(C-4),28.3(C-3),21.7(C-23),21.7(C-2),13.1(C-24),13.1(C-1)。以上光譜數據與文獻[39]報道的基本一致，因此，鑒定化合物27為正二十四烷。

化合物28：無色油狀物,ESI-MSm/z:285[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:3.57(3H,s,H-19),2.21(2H,t,J=7.6 Hz,H-2),1.53(2H,m,H-3),1.16(28H,m,H-4-17),0.78(3H,t,J=7.0 Hz,H-18);13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ:174.4(C-1),51.4(C-19),34.1(C-2),31.9(C-16),29.7(C-14),29.7(C-13),29.7(C-12),29.7(C-11),29.7(C-10),29.7(C-9),29.7(C-8),29.7(C-7),29.6(C-15),29.5(C-6),29.3(C-5),29.2(C-4),25.0(C-3),22.6(C-17),14.1(C-18)。以上光譜數據與文獻[40]報道的基本一致，因此，鑒定化合物28為(甲基(Z)-10-(2-己基環丙烷基)-辛酸酯。

化合物29：無色油狀,mp 82-84℃,ESI-MSm/z:319[M+Na]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.34(1H,m,H-2),4.08(2H,dd,J=7.0 Hz,H-1),3.42(3H,s,H-21),1.92(2H,t,J=7.1 Hz,H-4),1.60(3H,s,H-20),1.47,0.99(19H,m,H-5-15),0.78(12H,m,H-16-19);13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ:140.3(C-3),123.1(C-2),59.4(C-1),50.9(C-21),39.9(C-14),39.4(C-4),37.4(C-10),37.4(C-8),37.3(C-12),36.7(C-6),32.8(C-7),32.7(C-11),28.0(C-15),25.1(C-5),24.8(C-13),24.5(C-9),22.7(C-17),22.6(C-16),19.8(C-19),19.7(C-18),16.2(C-20)。以上光譜數據與文獻[41]報道的基本一致，因此，鑒定化合物29為反式植醇。

化合物30：無色油狀物,m.p:253-254℃,ESI-MSm/z:479[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.07(H,m,H-2'),2.23(2H,t,J=7.0 Hz,H-2),2.15(2H,m,H-4'),1.59(2H,m,H-7),1.53(3H,m,H-11),1.43(2H,m,H-9),1.38(H,m,H-8),1.38(H,m,H-6),1.28(2H,m,H-3),1.25(20H,s,H-5'-14'),1.23(2H,m,H-15'),1.21(2H,m,H-4),1.14(2H,s,H-1'),1.13(2H,m,H-5),1.06(2H,m,H-10),0.80(3H,d,J=6.6 Hz,H-15),0.78(3H,t,J=6.8 Hz,H-16'),0.77(3H,t,J=6.8 Hz,H-14),0.77(3H,d,J=6.6 Hz,H-12),0.76(3H,d,J=6.6 Hz,H-13);13CNMR(CDCl3,100 MHz)δ:174.4(C-1),143.0(C-3'),114.6(C-2'),77.4(C-1'),40.0(C-4'),39.4(C-15'),37.4,29.2(C-5'-14'),37.3(C-9),36.6(C-10),34.1(C-2),32.8(C-8),32.8(C-6),31.9(C-4),27.9(C-11),24.8(C-7),24.5(C-3),22.7(C-14),22.6(C-5),21.1(C-13),19.8(C-12),19.7(C-15),14.1(C-16')。以上光譜數據與文獻[42]報道的基本一致，因此，鑒定化合物30為balansenate I(6,8,11-三甲基月桂酸-(2E)-3-甲基十六碳-2-乙酯)。

3.2 粗分片段抗胃潰瘍活性篩選

結果見表1。9組粗分片段中，Fr G、Fr K和Fr OPQR三組藥物表現出顯著的抗胃潰瘍活性(P＜0.05,P＜0.01)，抑制率分別為55.3%、74.5%和93.8%，與之相比較，法莫替丁組的抑制率為89.3%；其余6組均未顯示出明顯的抗胃潰瘍作用，與控制組相比結果無統計學意義。實驗結果表明，Fr G、Fr K和Fr OPQR三個粗分片段具有較強的胃黏膜保護作用。

表1 不同粗分片段對乙醇誘導大鼠胃潰瘍損傷的作用（平均值±SEM.n=6）

3.3 酸漿苦味素B和木犀草苷抗小鼠胃潰瘍面積的測定

結果表明，酸漿苦味素B和木犀草苷三個劑量組均能顯著減少胃潰瘍面積，且隨劑量增加作用增強，強弱依次為酸漿苦味素B高劑量＞酸漿苦味素B中劑量＞木犀草苷高劑量＞法莫替丁。其中，酸漿苦味素B 25 mg/kg劑量組對胃潰瘍的抑制率高達74.6%，相比較陽性藥物法莫替丁40 mg/kg對胃潰瘍的抑制率為61.8%，說明酸漿苦味素B具有較強的抗胃潰瘍活性，結果見表2。

表2 酸漿苦味素B和木犀草苷對乙醇誘導小鼠胃潰瘍損傷的作用（平均值±SEM.n=6）

3.4 透射電鏡觀察主細胞和壁細胞超微結構

3.4.1主細胞超微結構變化

在8000倍透射電鏡下（見圖1），正常組主細胞未見內質網擴張或間隙增寬，線粒體未見腫脹；模型組主細胞內質網明顯擴張且間隙增寬，線粒體有明顯腫脹；酸漿苦味素B低劑量內質網有擴張，間隙增寬但明顯低于模型組，線粒體有腫脹，中劑量內質網未見擴張，間隙有輕微增寬，線粒體輕微腫脹，高劑量內質網未見擴張，未見間隙擴展，線粒體也無腫脹。實驗結果表明，酸漿苦味素B可改善乙醇刺激引起的主細胞超微結構改變。

圖1 酸漿苦味素B對乙醇誘導小鼠胃黏膜主細胞超微結構改變的影響

3.4.2壁細胞超微結構變化

在12000倍透射電鏡下（見圖2），正常組壁細胞線粒體未見腫脹，內質網豐富無擴展；酸漿苦味素B低劑量組線粒體有腫脹，內質網有擴張，中劑量組線粒體稍有腫脹，內質網輕微擴張，高劑量組線粒體有輕微腫脹，內質網未見擴張；模型組內質網擴張，線粒體腫脹。實驗結果表明，酸漿苦味素B可改善乙醇刺激引起的壁細胞超微結構改變。

圖2 酸漿苦味素B對乙醇誘導小鼠胃黏膜壁細胞超微結構改變的影響

4 討論

本課題組前期研究發現，酸漿乙酸乙酯部位具有顯著的生物活性，為探索其藥效物質基礎，本實驗繼續對酸漿的化學成分進行深入研究。通過分離純化，獲得30個化合物，包括11個甾體化合物，4個萜類化合物，3個黃酮類化合物，8個脂肪酸類化合物和4個苯環衍生物。其中化合物3、4、12、24和30為首次從酸漿中分離得到。

本實驗對粗分片段進行活性篩選時，選擇15個片段中重量較大的9個片段（＞5 g）進行實驗。結果顯示，Fr G、Fr K和Fr OPQR三個粗分片段具有顯著的抗胃潰瘍活性。通過分析發現，山奈酚、槲皮素和木犀草苷等黃酮類物質均來自Fr G片段，此前已有文獻報道山奈酚和槲皮素顯著的抗炎[43-46]、抗胃潰瘍[47-48]和抗幽門螺旋桿菌[49]活性，以及來源于蛇根草（Ophiorrhiza mungosLinn.）的木犀草苷顯著的抗胃潰瘍作用[50]，因此，Fr G片段所含的黃酮類物質可能是其抗胃潰瘍活性的物質基礎；對于Fr K片段，其中分離出大量的酸漿苦味素B（約68 mg），初步測定其含量約為13.61 mg·g-1；將Fr O、Fr P、Fr Q和Fr R四個片段合并為片段Fr OPQR，因其含有大量的色素，并未對其進行系統的分離純化，但通過薄層色譜和LC-MS測定發現，除了大量色素外，Fr OPQR還含有大量的酸漿苦味素B成分，初步測定其含量約為39.68 mg·kg-1。具有顯著抗胃潰瘍活性的Fr K和Fr OPQR兩個片段均檢測出大量的酸漿苦味素B，且通過文獻報道發現，酸漿苦味素B具有顯著的體內外抗炎作用[51-52]，因此，推測酸漿苦味素B可能是兩個片段抗胃潰瘍活性的物質基礎。通過對活性片段的分析，推測槲皮素、山奈酚、木犀草苷和酸漿苦味素B均可能是酸漿乙酸乙酯部位抗胃潰瘍活性的物質基礎。由于Fr G片段中槲皮素和山奈酚產率太低，不足以進行體內動物實驗，因此，選擇木犀草苷和酸漿苦味素B進行小鼠體內抗胃潰瘍活性測定。

通過活性追蹤，發現酸漿苦味素B是酸漿發揮藥效的物質基礎之一，具有較強的抗胃潰瘍活性。酸漿苦味素（physalins）是存在于酸漿屬植物錦燈籠及其他相近茄科植物中的一類高氧化水平的13，14-裂環-16,24-環麥角甾烷類化合物，其占了酸漿所含甾體類化合物的90%以上。1969年，Matsuura等[53]從酸漿中分離得第一個酸漿苦味素，命名為酸漿苦味素A，到目前為止，已從酸漿中分離得到50種physalins[11]。其中，酸漿苦味素B是酸漿苦味素類最為常見的化合物。現代藥理學研究表明，酸漿苦味素B作為酸漿的主要活性物質，具有顯著的藥理作用，如抗腫瘤[54]、抗癌[55]、抗炎[56]、抗菌[57]、抗瘧疾[58]和鎮痛[59]等。其抗胃潰瘍作用，目前國內外均未見相關文獻報道。本研究為深入研究和開發酸漿的藥用價值及資源的充分利用提供了理論依據。