屏南縣放牧山羊綿羊肺炎支原體流行病學調查

摘要：綿羊肺炎支原體（M．ovipneumomae，M.O）感染山羊引起的羊支原體肺炎是福建省放牧山羊的主要疫病之一，給養(yǎng)羊業(yè)造成了巨大損失。為了摸清屏南縣放牧山羊中MO的感染情況，本調查采用抗體酶聯免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測試劑盒檢測了全縣10個養(yǎng)殖場（戶）共287份血清樣品的M.O抗體水平。結果檢出M.O抗體陽性95份，陽性率33.1%，不同養(yǎng)殖場（戶）的陽性率為7.7%- 60.0%。

關鍵詞：綿羊肺炎支原體：傳染性胸膜肺炎：酶聯免疫吸附測定

山羊傳染性胸膜肺炎（Contagi ous capri ne pleruopneumo-nia，CCPP）是由山羊支原體山羊亞種（Mycop lasma caprj columsubsp．capri pneumoni a，Mccp）引起的山羊獨有的一種急性或慢性呼吸道傳染病，以纖維素性胸膜肺炎為主要特征[1]。國內在分離到Mccp以前，長期認為絲狀支原體山羊亞種（M．mycoi des sub-sp．Capri，Mmc）才是該病的病原[2]，除此之外，綿羊肺炎支原體（M．OVi pneumoni ae，M．O）感染山羊后也能引起類似山羊傳染性胸膜肺炎的臨床癥狀，經常被誤認為是CCPP的病原之一[3]。造成這種病原認識不清情況的主要原因是由于支原體分離培養(yǎng)非常困難，且臨床上又常可能被其它呼吸道疾病干擾而最終不能確診[4]，各地病原分離試驗也證實了各地引起該病的病原差異性和復雜性[5]。長期以來，臨床上類傳染性胸膜肺炎在福建省多個縣市均有發(fā)生，是制約養(yǎng)羊業(yè)健康發(fā)展的主要疫病之一，2017年江錦秀等[6]基于檢測臨床傳染性胸膜肺炎病例的病原技術較系統地開展了該病的分子流行病學調查，首次明確福建省發(fā)生的羊傳染性胸膜肺炎主要是由M．0感染引起的羊支原體性肺炎，且普遍存在，而由Mccp引起的山羊傳染性胸膜肺炎病例很少或沒有。

由于引起山羊發(fā)生類傳染性胸膜肺炎的病原較復雜，而明確病原是科學防治該病的主要依據，因此建立高效、準確的病原診斷技術是研究該疫病的重要方向之一。目前M．0的檢測方法主要有3種：第一種是通過病原的分離進行鑒定，但分離率較低，不適用臨床診斷[7]；第二種是基于病原基因組特征的分子生物學檢測方法，主要包括直接PCR方法[8]、降落PCR-側向層析快速檢測方法[9]、環(huán)介導等溫擴增反應（Loop-medi ated i sothermal

ampl if icati on，LAMP）方法[10]、TaqMan熒光定量[11]和SYBR Green熒光定量[12]等檢測方法。第三種是免疫學檢測方法，主要包括間接血凝方法[13]、酶聯免疫吸附測定（enzyme I inked immunosorbent assay，ELISA）方法[14]、免疫組織化學及間接免疫熒光[15]等。在所有的檢測方法中，ELISA方法僅需要采集血液樣本，收集血清后直接利用商品化試劑盒即可實現一次96個樣品的檢測，更加適合基層的血清學調查，被廣泛應用于一定區(qū)域內的M．0的血清學流行病學調查[7]。 屏南縣位于福建省東北部，天然草場資源豐富，為放牧山羊提供了優(yōu)越的條件，山羊的規(guī)模養(yǎng)殖已經初見成效，存欄量百頭以上的養(yǎng)殖場（戶）約占全縣年末存欄總數的80%[16]，而類傳染性胸膜肺炎在養(yǎng)殖過程中經常發(fā)生，是造成羊只損失的主要疫病之一。本研究擬采用間接ELI SA方法，在全縣范圍內開展M．0的血清學流行病學調查，為該病的防治提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

于2021年4月—9月間，在屏南縣縣域內選擇10個存欄量50只以上的養(yǎng)殖場（戶）開展M．0血清學流行病學調查。每個場按照實際存欄量和羊個體大小隨機采集18～45份血液樣，累計采集血液樣287頭份。每只羊采用一次性真空采血管（無抗凝劑）采集頸靜脈血5mL，置于4。C冰箱5～8h，待血清析出后每份吸取血清樣品500UL，一20℃冷凍備用。

1.2 血清M．0抗體檢測方法

M．0抗體ELISA檢測試劑盒購自上海赫果生物有限公司。按照試劑盒說明書和試劑盒提供的標準樣品，利用全自動酶標儀（賽默飛世爾（上海）儀器有限公司）測定各標樣在450nm波長下吸光度（0D值），并繪制標準曲線。按照試劑盒步驟分別測定各血清樣本0D值，每板設置6個陽性對照孔和6個陰性對照孔。樣品0D值小于陰性對照平均值評定為M．0抗體陰性，樣品0D值大于或等于陰性對照平均值則評定為M．0抗體陽性。

2 結果與分析

2.1 調查對象類傳染性胸膜肺炎的感染與治療情況

通過對10個場（戶）業(yè)主的詢問調查，60%的場（戶）有類傳染性胸膜肺炎發(fā)生史（表1），各生長階段的羊均可發(fā)病，且無明顯的季節(jié)性。發(fā)病羊群的臨床癥狀以咳嗽氣喘和漿液性鼻涕為主，部分個體采食量下降，被毛粗亂無光，出現漸進性消瘦和衰竭。剖檢主要表現為肺部出現肉樣病變，部分病例肺臟與肋骨粘連，胸腔積液、肺腫大和上呼吸道黏膜出血等癥狀也有發(fā)現。畜主多采用氟苯尼考、青霉素和鏈霉素等抗生素藥物或者雙黃連、魚腥草等中成藥進行3～10d的連續(xù)治療，但治療效果均不理想。

2.2 M．O抗體檢測結果

由于養(yǎng)殖場（戶）對類傳染性胸膜肺炎的病原認識不足和對市面相關疫苗信息缺乏了解，所有調查對象均未接種過M．0株疫苗，40%養(yǎng)殖場（戶）曾經接種過山羊傳染性胸膜肺炎Mccp的滅活疫苗，對該病的保護效果參差不齊，且認為疫苗免疫效果并不理想。不同養(yǎng)殖場（戶）M．0感染的血清學檢測結果見表1，被檢的10個規(guī)模養(yǎng)殖場（戶）均存在不同程度的M．0感染。287份樣品中共檢出M．0抗體陽性95份，陽性率33.1%，不同養(yǎng)殖場（戶）的陽性率為7.7%～60.0%，且存欄量越大，M．0抗體陽性率也出現升高的趨勢。

3 討論

鑒于引起類傳染性胸膜肺炎病原的復雜性，僅通過臨床癥狀和解剖病理觀察難以確認病原，雖然3種常見病原的血清學特征存在明顯的交叉反應，然而三者的抗原特性、藥敏性等方面均存在較大差別[11]。長期以來，類傳染性胸膜肺炎是屏南縣放牧山羊中的主要疫病之一，但對其病原仍然未知。自江錦秀等[7]2017年明確福建省發(fā)生的類傳染性胸膜肺炎主要是由M．0感染引起的羊支原體性肺炎后，郭慧瑜等[17]發(fā)現福建省福清市的M．0抗體陽性率高達88.3%，進一步證實了M．0在福建省山羊中的感染率較高。本研究結果表明屏南縣不同山羊養(yǎng)殖場（戶）中也廣泛存在M．0感染，但感染率低于福建省其他地區(qū)，這可能是由于屏南縣山羊養(yǎng)殖群體規(guī)模較小，且以自繁自養(yǎng)為主，較少到外地引種，減少了疾病傳播的風險。同時，結合各場的歷史發(fā)病和疫苗接種情況，可以初步確認屏南縣發(fā)生的類傳染性胸膜肺炎為M．0感染的綿羊肺炎支原體，而是否存在其他病原的交叉感染還需要開展基于多病原檢測的分子流行病學調查。

大量研究表明M．0仍然是目前我國山羊支原體性肺炎的重要病原之一，在國內多雀份均存在一定比例的感染，但不同群體間的感染率存在較大差異[18]。吳錦艷等[19]研究表明內蒙古自治區(qū)M．0抗體陽性率高達76.8%，河北省為50%，吉林省為21. 99%。其他研究表明新疆伊犁地區(qū)部分牧場M．0抗體陽性率為21%[20]，河南省清風縣山羊M．0抗體陽性率8. 68%[21]，青海省貴南縣貴德黑裘皮羊M．0抗體陽性率26. 5%[22]，四川省攀枝花地區(qū)山羊M．0感染陽性率46. 0%[23]，2016年和2017年廣西6個地區(qū)山羊M．0個體陽性率分別為32.2%和49. 2%[24]。通過比較發(fā)現，屏南縣M．0感染率處于中等水平，應該在全縣范圍內加強該病的監(jiān)測，進一步控制和減少M．0的感染率。

M．0是一種接觸性傳染病，主要經空氣傳播．非感染病原病株的免疫接種和藥物治療無法徹底清除感染羊群的病原體[7]。屏南縣M．O的控制應該以預防為主，加大針對免疫造成該疫病病原的疫苗宣傳推廣力度，在全群內免疫接種能有效防控M．0株的疫苗，加強對群體的檢疫，及時隔離淘汰發(fā)病羊只，定期消毒以保持羊舍衛(wèi)生，凈化羊場，為該病的防治提供保障。另外，在引種過程中也要加強防范，做好生物安全防護措施，對引進的種羊全面開展病原或抗體檢測，杜絕疫病由種羊帶入，種羊引進后要進行2周以上的隔離觀察，隔離觀察后期再次開展病原或抗體檢測，確認引入羊只健康后進行疫苗接種。

參考文獻：

[1]

Hutcheon D Contagious pleuropneumonia in Angora goats[J]VeterinaryJoumal. 1881（13）：171-180

[2]王棟，張瑞亭，我國山羊傳染性胸膜肺炎病原的研究[J]中國獸醫(yī)科技，1988（9）：3-5

[3]鄧光明，趙煊，梁桂香，類山羊傳染性胸膜肺炎診斷和防治的研究[J]中國獸醫(yī)科技，1991，21（6）：3-6

[4]

World OrgaIUzation for Animal Health. Contagious caprine Pleuropneumo-nia.ln：Manual of Diagnostic tests and Vaccines for Terrestrial Animals（mammals， birdsand bees） [Ml. Sth ed vol II .Paris： office Intemational DesEpizooties. 2004： 623-634

[5]農業(yè)部畜牧獸醫(yī)司，中國動物疫病志fM]科學出版社，1993

[6]江錦秀，林裕勝，游偉，等福建省羊支原體性肺炎分子流行病學研究[J]福建農業(yè)學報.2017.32（1）：12-16

[7]江錦秀，林裕勝，張靖鵬，等綿羊肺炎支原體感染的診斷和防治技術研究進展[J]福建農業(yè)學報，2019，34（12）：1463-1470

[8]儲岳峰，趙萍，高鵬程，等從山羊中檢測山羊支原體山羊肺炎亞種[J]江蘇農業(yè)學報，2009，25（6）：1442-1444

[9]杜鮮，喬軍，陳誠，等綿羊肺炎支原體降落PCR-側向層析快速檢測方法的建立[J]中國預防獸醫(yī)學報，2017，39（6）：466-470

[10]張潔，曹軍軍，祝明松，等綿羊肺炎支原體環(huán)介導等溫擴增聯合橫向流動試紙條可視化檢測方法的建立[J]動物醫(yī)學進展，2019，40（3）：1-8

[11]林裕勝，江錦秀，張靖鵬，等綿羊肺炎支原體TaqMan熒光定量PCR檢測方法的建立[J]中國預防獸醫(yī)學報，2018，40（4）：316-320

[12]張雙翔，程振濤，周碧君，等．應用熒光定量PCR篩選綿羊肺炎支原體最適生長培養(yǎng)基[J]畜牧與獸醫(yī)2013.45（1）：9-14

[13]趙萍，逯忠新，儲岳峰，等綿羊肺炎支原體間接血凝診斷方法的建立[J]甘肅農業(yè)大學學報.2008，43（1）：29-32

[14]候相山，王建昌，張永寧，等羊群綿羊肺炎支原體抗體間接ELISA檢測方法的建立[J]中國畜牧獸醫(yī)2006.33（6）：76-78

[15]黃海碧，鄭佳琪，王仁超，等綿羊肺炎支原體P71蛋白分段表達及其間接ELISA方法的建立[J]中國預防獸醫(yī)學報，2015，37（8）：623-627

[16]陸李枝，屏南縣羊口瘡病的診斷和PCR流行病學調查[J]福建農業(yè)科技，2020（1）：46-49

[17]郭慧瑜，林裕勝，毛坤明，等福清市福清山羊綿羊肺炎支原體血清學調查[J]福建畜牧獸醫(yī)，2019，41（6）：10-11

[18]楊發(fā)龍，王華，岳華，等山羊中綿羊肺炎支原體的分離及鑒定[J]中國畜牧獸醫(yī)2010，37（8）：177-180

[19]吳錦艷，尚佑軍，陳妍，等國內部分地區(qū)羊支原體肺炎血清學調查及分析[J]中國預防獸醫(yī)學報，2017，39（2）：156-158

[20]崔慶賢，張鵬博，喬彥杰，等新疆伊犁地區(qū)哈薩克羊與薩福克羊感染支原體肺炎血清學調查與分析[J]當代畜牧，2022（1）：25-27

[21]馮業(yè)攀，河南省清豐縣綿羊肺炎支原體血清學調查與分析[J]中國草食動物科學.2020，40（3）：89-91

[22]張琳，貴南縣貴德黑裘皮羊傳染性胸膜肺炎的血清學診斷[J]青海畜牧獸醫(yī)雜志.2007（4）：17-18

[23]黃秀君，童俊青，萬潔，等攀枝花山羊的綿羊肺炎支原體感染血清學調查[J]畜牧與獸醫(yī)，2015.47（8）：154

[24]韓林梅，吳翠蘭，李軍，等廣西牛羊主要呼吸道疫病的血清學調查[J]今日畜牧獸醫(yī)，2018，34（10）：17-19