RPR滴度在梅毒檢測(cè)中的應(yīng)用

劉 震

（安溪縣中醫(yī)院，福建 安溪 362400）

梅毒屬于慢性傳播疾病，主要由蒼白螺旋體引起的，通過性接觸傳播，感染風(fēng)險(xiǎn)高，危害性極大，可通過胎盤傳染胎兒，尤其是有多個(gè)性伴侶人群，感染梅毒的可能性更高。當(dāng)未患病人群與梅毒患者進(jìn)行性接觸后，病毒通過細(xì)微破損入侵，感染梅毒后，會(huì)侵犯皮膚、黏膜及多器官組織。全球每年新發(fā)梅毒病例不斷增加，其中潛伏梅毒占比較高，其次為一期、二期梅毒[1]。梅毒初起有全身性感染，并在病情緩慢推進(jìn)下，多個(gè)器官及組織受累。梅毒螺旋體含有多抗原物質(zhì)，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，梅毒感染者機(jī)體免疫球蛋白G和免疫球蛋白M升高明顯。臨床認(rèn)為進(jìn)行早期抗原檢測(cè)，可盡早發(fā)現(xiàn)梅毒，并盡早治療，促使病情得到控制[2]。臨床診斷發(fā)現(xiàn)，疾病診斷難度大，有誤診、漏診情況[3]。現(xiàn)階段，主要通過TPPA和RPR檢測(cè)梅毒，臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)，上述兩種方法均有一定的檢測(cè)價(jià)值，為進(jìn)一步提高梅毒檢測(cè)準(zhǔn)確性，本文對(duì)本院2020年1月至2021年8月收治的82例疑似梅毒患者進(jìn)行研究，研究了不同方法檢測(cè)梅毒的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 82例疑似梅毒患者中包括48例男性和34例女性，最小年齡24歲，最大年齡60歲，平均（41.25±4.05）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者腹股溝及近區(qū)淋巴結(jié)腫大，有濕丘疹及扁平濕疣癥狀。②研究對(duì)象了解本研究?jī)?nèi)容。③臨床資料完整者。④患者年齡≤60歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①不配合或中途轉(zhuǎn)院的患者。②有凝血功能障礙或血液疾病者。③未合并其他傳染性疾病者。④不配合本研究者。所有受試者臨床資料對(duì)比顯示，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究符合醫(yī)院倫理委員會(huì)規(guī)定，患者家屬了解研究?jī)?nèi)容，自愿簽署了知情協(xié)議。

1.2 方法 采集所有研究對(duì)象清晨空腹血（5 mL），進(jìn)行離心處理（轉(zhuǎn)速3 000 r，時(shí)間15 min），離心后懸置，待取上清液。

1.2.1 RPR檢測(cè) 使用本院梅毒檢測(cè)自動(dòng)旋轉(zhuǎn)儀及相配套的試劑進(jìn)行檢測(cè)，將血清與生理鹽水稀釋，稀釋比例分別為1∶1、1 ∶2、1 ∶4、1 ∶8、1 ∶16、1 ∶32、1 ∶64，分別置于紙卡圓圈中，分別滴入RPR試劑；利用梅毒檢測(cè)自動(dòng)旋轉(zhuǎn)儀處理（轉(zhuǎn)速：100 r/min，時(shí)間：8 min）后，于光線充足處進(jìn)行分析，并在2名及以上診斷醫(yī)師共同參與下，給出統(tǒng)一意見。

1.2.2 ELISA檢測(cè) 采用雙抗原夾心酶免疫法檢測(cè)，使用抗原包被微孔板試驗(yàn)。

1.2.3 TPPA檢測(cè) 將上清液置于U型板上，進(jìn)行不同滴度處理，使用預(yù)先準(zhǔn)備的生理鹽水進(jìn)行稀釋，分別配制1∶10、1∶20、1∶40、1∶80的滴度；完成上述操作后，將未致敏顆粒放入1∶40稀釋液中，將致敏明膠顆粒放入到1∶80的稀釋液中；置放于一定的環(huán)境條件下，后觀察檢測(cè)結(jié)果。診斷方法同上。

1.3 觀察指標(biāo) 評(píng)價(jià)不同檢測(cè)方法的檢出結(jié)果；對(duì)比不同檢測(cè)方法的檢測(cè)效能，診斷符合率、靈敏度、特異性。

1.4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) RPR：陽(yáng)性，卡片圓圈有黑色凝聚顆粒，溶液清澈；陰性，卡片圓圈有亮灰色抗原顆粒，無絮片。ELISA：陽(yáng)性，濃度＞0.15 ng/mL。TPPA：梅毒檢測(cè)檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)。陽(yáng)性，粒子小環(huán)狀，雜亂聚集，邊緣不整齊。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以（%）表示。計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以（）表示。P＜0.05視為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RPR與TPPA陽(yáng)性檢出率對(duì)比 RPR檢出51例陽(yáng)性標(biāo)本，檢出率（62.20%，51/82）；ELISA檢出（93.90%，77/82）；TPPA檢出82例陽(yáng)性標(biāo)本，檢出率為100.00%，由此可知，TPPA陽(yáng)性檢出率高于RPR和ELISA陽(yáng)性檢出率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；ELISA陽(yáng)性檢出高于RPR陽(yáng)性檢出率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 RPR檢測(cè)結(jié)果 RPR檢測(cè)一期梅毒、二期梅毒檢出率較高，不同稀釋比例檢出結(jié)果也存在一定的差異性（P＜0.05）。見表1。

表1 RPR檢測(cè)結(jié)果

2.3 檢測(cè)效能對(duì)比 RPR檢測(cè)效能比ELISA低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同檢測(cè)方法的檢測(cè)效能對(duì)比（%）

3 討論

梅毒屬于慢性傳染性疾病，具有社會(huì)屬性，傳播途徑包括性行為、血液制品、母嬰間接傳播等，對(duì)患者身心健康損害較大，增加了患者心理壓力，生活質(zhì)量也隨之下降[4]。梅毒傳染力強(qiáng)，人群易感，感染初期，生殖器受累，隨著感染程度加重，會(huì)損傷各臟器器官[5]。梅毒病程長(zhǎng)，有一定的潛伏期，且與其他性疾病有一定的相似性。流行病學(xué)研究顯示，梅毒患者性活躍期在20～40歲，由于性教育缺乏以及現(xiàn)代人性觀念發(fā)生變化，青年人不正當(dāng)性行為增加，促使梅毒傳播，梅毒患者患病率也逐年攀升[6]。梅毒臨床分期多，包括早期潛伏梅毒、一期梅毒、二期梅毒等，感染梅毒后，將產(chǎn)生梅毒螺旋體抗體反應(yīng)素，有較強(qiáng)的傳染性，典型特征表現(xiàn)為血液損害[7]。一、二期梅毒患者有皮膚斑疹、黏膜損傷表現(xiàn)，若不及時(shí)治療，發(fā)展到三期病毒，將會(huì)造成臟器受累，引發(fā)危重疾病[8]。普遍研究發(fā)現(xiàn)，梅毒的發(fā)生嚴(yán)重危害到身體健康，引發(fā)神經(jīng)梅毒、胎兒感染畸形等，加劇患者心腦血管疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，嚴(yán)重可導(dǎo)致多臟器衰竭，死亡風(fēng)險(xiǎn)高[9]。妊娠女性感染梅毒，可造成流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎兒先天性缺陷、新生兒梅毒等，引發(fā)不良妊娠結(jié)局，威脅到下一代的健康安全[10]。當(dāng)前，我國(guó)通過多種方法加強(qiáng)妊娠期健康檢查引導(dǎo)和指導(dǎo)，進(jìn)行孕期梅毒早期篩查，改善母嬰結(jié)局。基于此，臨床高度重視梅毒早期診斷，旨在盡早確定患者病情，為后續(xù)治療提供指導(dǎo)。

梅毒檢測(cè)方法多樣，常規(guī)檢查主要根據(jù)患者臨床表現(xiàn)、病史及實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測(cè)進(jìn)行判斷，體格檢查主要以掌跖、肛門、陰部為主，配合神經(jīng)系統(tǒng)或心血管系統(tǒng)檢查等[11]。在梅毒臨床分期上，有梅毒感染史、潛伏期在2～3周，皮膚有淋巴結(jié)受損且經(jīng)梅毒血清學(xué)檢測(cè)顯示陽(yáng)性，提示為一期梅毒感染；有梅毒感染史、一期梅毒史、皮膚有濕丘疹、扁平濕疣癥狀，血清學(xué)檢測(cè)為強(qiáng)陽(yáng)性，提示檢測(cè)結(jié)果為二期梅毒；有一、二期梅毒感染史，病期超過2年，經(jīng)RPR檢測(cè)呈陽(yáng)性，提示為三期梅毒[12-13]。現(xiàn)階段，臨床將血清學(xué)檢查作為梅毒檢測(cè)首要方法，包括快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)、梅毒螺旋體ELISA試驗(yàn)、梅毒螺旋體明膠凝集法等。多項(xiàng)研究表明，不同檢測(cè)方式敏感度、特異度也存在一定的差異性，有漏診或誤診的可能性，影響梅毒患者后續(xù)治療，甚至是引發(fā)醫(yī)患糾紛[14]。

RPR屬于非梅毒螺旋體抗原血清檢測(cè)，常應(yīng)用于普通人群或疑似梅毒感染篩查中。RPR檢測(cè)效率高，與梅毒臨床癥狀相關(guān)性好，可排除梅毒活動(dòng)性感染，在梅毒早期篩查中展現(xiàn)了一定的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)[15]。RPR檢測(cè)主要是利用卵磷脂、膽固醇的乙醇溶液檢測(cè)梅毒患者血清抗原的，在臨床應(yīng)用中，此種檢測(cè)方法方便快捷，成本低，檢測(cè)速度快，在大規(guī)模梅毒篩查中有明顯的優(yōu)越性；但當(dāng)梅毒患者抗體水平下降時(shí)，檢出難度增加，漏診率也隨之增加，容易同紅斑狼瘡、關(guān)節(jié)炎、銀屑病混淆，增加了臨床診斷難度[16]。同時(shí)，患者有老年病或合并冠心病、風(fēng)濕骨病，對(duì)TPPA檢測(cè)結(jié)果也會(huì)產(chǎn)生不同程度的影響和干擾，究其原因發(fā)現(xiàn)，有基礎(chǔ)疾病患者集體釋放大量的TP抗體，進(jìn)一步增加了RPR檢測(cè)難度，無法保證檢測(cè)準(zhǔn)確率，因此，RPR檢測(cè)更適用于梅毒初期篩查。有研究指出，不同RPR滴度檢測(cè)，能夠幫助臨床進(jìn)一步評(píng)估梅毒患者病情嚴(yán)重程度，對(duì)病情控制和預(yù)后改善有重要意義。

另有研究指出，RPR滴度為梅毒早期篩查提供了科學(xué)指導(dǎo)，但不同RPR滴度篩查存在一定的局限性，存在假陰性情況，相比ELISA檢測(cè)或其他檢測(cè)方法，診斷效能有待提升[17]。觀察本文的研究結(jié)果可見RPR陽(yáng)性檢出率較低，ELISA的檢出率較高，兩種檢測(cè)方法相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；提示RPR檢測(cè)存在不足之處，建議聯(lián)合ELISA檢測(cè)。梅毒感染患者，機(jī)體中多種免疫應(yīng)答被激活，會(huì)引發(fā)炎性因子高表達(dá)，造成炎性反應(yīng)，尤其RPR高滴度患者機(jī)體炎性因子呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，與梅毒RPR滴度呈正相關(guān)關(guān)系。研究中指出，不同梅毒血清RPR滴度在1∶8內(nèi)，當(dāng)RPR滴度升高，檢測(cè)假陽(yáng)性率則下降，但也有發(fā)生假陽(yáng)性的可能性，具體需要結(jié)合臨床及血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析[18]。觀察本文研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，一期梅毒患者血清在1∶16稀釋情況下呈陽(yáng)性，二期梅毒患者血清在1∶32稀釋條件下呈陽(yáng)性，不同RPR滴度檢測(cè)，假陽(yáng)性率較高，容易造成誤診。研究發(fā)現(xiàn)，患者當(dāng)患者血清中抗心凝脂抗體增加，對(duì)抗體與抗原結(jié)合產(chǎn)生了一定的干擾和影響，因此，造成檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性。

TPPA檢測(cè)被臨床作為梅毒診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，在檢測(cè)中，通過技術(shù)將毒株轉(zhuǎn)化為抗原，將其與致敏粒子包裹在一起，促使二者進(jìn)行反應(yīng)，最終會(huì)生成凝集顆粒物。在梅毒檢測(cè)中，展現(xiàn)了較高的敏感性和特異性，試劑穩(wěn)定性高，結(jié)果判斷清晰，是判斷梅毒感染的明確指標(biāo)，但TPPA檢測(cè)操作過程繁瑣，流程和步驟較多，檢測(cè)結(jié)果出具時(shí)間長(zhǎng)，且受技術(shù)因素影響，有一定的假陽(yáng)性反應(yīng)，存在一定的檢查局限性，容易耽誤梅毒患者治療[19]。分析不同檢測(cè)方法檢測(cè)效能發(fā)現(xiàn)，TPPA檢測(cè)準(zhǔn)確性高，達(dá)到了100.00%，診斷效能高于ELISA檢測(cè)，高于RPR檢測(cè)，但檢測(cè)流程較多，樣本稀釋操作繁瑣，工作量大，易產(chǎn)生操作誤差，僅適用于小規(guī)模標(biāo)本檢測(cè)中。RPR檢測(cè)敏感度、特異性相對(duì)較低，檢測(cè)中容易出現(xiàn)誤診或漏診情況。ELISA診斷效能高，適用于大規(guī)模標(biāo)本檢測(cè)。本研究中，RPR檢測(cè)特異度、敏感度、符合率分別為85.56%、82.58%、85.00%，ELISA檢測(cè)特異度、敏感度、符合率分別為96.06%、96.46%、96.58%；TPPA特異度、敏感度、符合率，分別為97.25%、98.52%、98.49%；上述數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，ELISA診斷靈敏度、特異度與TPPA更接近。RPR雖有一定的檢測(cè)價(jià)值，但檢測(cè)效能比ELISA低，僅適用于大規(guī)模梅毒篩查，提示梅毒RPR檢測(cè)應(yīng)同ELISA或其他方法聯(lián)合檢測(cè)。當(dāng)前，已有研究證實(shí)了，TPPA聯(lián)合ELISA、RPR診斷效能和診斷價(jià)值，臨床建議將RPR梅毒檢測(cè)作為梅毒初篩檢測(cè)使用，為進(jìn)一步明確臨床診斷，需聯(lián)合ELISA等檢測(cè)方法進(jìn)行優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，降低梅毒檢測(cè)漏診率、誤診率。

綜上所述，RPR檢測(cè)梅毒有一定的診斷價(jià)值和診斷效能，為提高診斷準(zhǔn)確率，建議采取聯(lián)合檢測(cè)方法，進(jìn)而為梅毒臨床治療及預(yù)后評(píng)估提供指導(dǎo)。