補(bǔ)飼不同劑量竹葉提取物對(duì)泌乳期伊犁馬血液生化指標(biāo)的影響

吳睿宸，姚新奎,2,3，孟 軍,2,3，曾亞琦,2,3，王川坤,2，阿拉法特·艾合買提，努爾塔依·庫爾班塔依

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，烏魯木齊 830052；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)馬產(chǎn)業(yè)研究院，烏魯木齊 830052；3.新疆馬繁育與運(yùn)動(dòng)生理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830052)

0 引 言

【研究意義】竹葉提取物中含有大量的黃酮類化合物，具有很好的抗氧化能力和還原能力，同時(shí)具有明顯的抑菌作用以及對(duì)體內(nèi)激素的調(diào)節(jié)，研究泌乳期伊犁馬補(bǔ)喂不同梯度竹葉提取物后，伊犁馬血液生化指標(biāo)的差異變化，對(duì)了解竹葉提取物對(duì)泌乳期伊犁馬的作用效果。【前人研究進(jìn)展】竹提取物經(jīng)口、皮膚及眼刺激毒理學(xué)試驗(yàn)得出其毒副作用微小[1]，且具有很好的抗氧化能力和還原能力[2]，能夠減輕機(jī)體炎癥[3]以及調(diào)節(jié)體內(nèi)激素[4, 5]的變化；沈明明[6]的研究證明，竹葉提取物可提高肉雞機(jī)體抗氧化能力并從一定程度上能夠達(dá)到改善肉雞健康作用。汪新亮[7]，劉連亮等[8, 9]通過建立不同的病理性大鼠模型，研究竹葉提取物作用于體內(nèi)相關(guān)抗氧化因子所產(chǎn)生的影響，驗(yàn)證竹葉提取物的抗氧化作用。侯昆等[10]研究發(fā)現(xiàn)，竹葉提取物中的竹葉黃酮能夠降低奶牛血清中白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量。肖熠等[11]發(fā)現(xiàn)在飼糧中短期添加竹葉黃酮能夠?qū)ΡＳi的生長(zhǎng)存在一定促進(jìn)作用，同時(shí)具有微弱的免疫激活作用，有助于保育豬在斷奶過程中的適應(yīng)性。潘靜等[12]研究苦竹葉提取物對(duì)Ⅱ型糖尿病小鼠的降糖機(jī)理時(shí)發(fā)現(xiàn)對(duì)其相關(guān)激素也有一定的調(diào)節(jié)作用?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】竹葉提取物以添加劑的形式應(yīng)用于動(dòng)物飼養(yǎng)中具有很大的發(fā)展?jié)摿Γ壳皩⒅袢~提取物作為伊犁馬的營養(yǎng)添加劑的研究還未見報(bào)道。需研究不同補(bǔ)飼梯度對(duì)泌乳期伊犁馬血液中抗氧化、免疫以及激素指標(biāo)的影響?！緮M解決的關(guān)鍵問題】分析對(duì)其泌乳期伊犁馬血液生化指標(biāo)的影響，為竹葉提取物對(duì)泌乳期伊犁馬抗氧化、免疫性能以及血清蛋白、激素調(diào)節(jié)的研究提供了前期的理論基礎(chǔ)和數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 竹葉提取物

竹葉提取物選自陜西森元生物科技有限公司，是以淡竹葉為原料的棕黃色粉末，純度為60%。

1.1.2 馬匹

隨機(jī)選取年齡、胎次、體尺相近的健康泌乳期伊犁馬24匹為研究對(duì)象。所選馬匹由新疆伊犁哈薩克自治州昭蘇馬場(chǎng)提供。

1.2 方 法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)自 2020 年 7 月開始，開始前進(jìn)行為期1周的預(yù)試驗(yàn)。將所選母馬隨機(jī)分為4組，每組各6匹，分別為對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組，各組依次添加補(bǔ)飼的竹葉提取物為0、10、20、30 g/d。預(yù)試驗(yàn)結(jié)束后開始正式試驗(yàn)，在試驗(yàn)第0、15、30、45、60 d的時(shí)候進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，每匹馬采集10 mL血樣，在室溫下靜置1 h后于 3 000 r/min離心15 min獲取血清，血清于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 飼養(yǎng)管理

母馬全天自由采食牧草，自由飲水。每天早上08：00，將母馬趕入單體欄，按照梯度分組補(bǔ)喂竹葉提取物分別與1.00 kg精料混合，在料兜中加少量水?dāng)嚢杈鶆?，保證時(shí)間充分，舔食干凈。

1.2.3 指標(biāo)測(cè)定

運(yùn)用比色法測(cè)定丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、羥自由基(-OH)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、白蛋白球蛋白比(A/G)。運(yùn)用酶聯(lián)免疫法測(cè)定免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、甲狀腺素(T4)、孕酮(P)、雌二醇(E2)、催乳素(PRL)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2010 整理，采用SPSS 19.0一般線性模型多變量方差分析，固定效應(yīng)有試驗(yàn)處理(Trt)、采樣時(shí)間(Date)及二者之間的交互作用(Trt×Date)，以試驗(yàn)處理(Trt)為主效應(yīng)進(jìn)行分析討論，結(jié)果以平均數(shù)(mean)和標(biāo)準(zhǔn)誤(SE)表示，差異顯著則用LSD法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 補(bǔ)飼不同梯度對(duì)其血液中抗氧化因子影響

研究表明，MDA的濃度變化與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組提高1.44%，試驗(yàn)Ⅱ組降低7.60%，但差異均不顯著(P>0.05)，試驗(yàn)Ⅲ組降低了19.32%，差異極顯著(P<0.01)，且試驗(yàn)Ⅲ組與Ⅰ組組間MDA濃度差異達(dá)到極顯著水平(P<0.01)；-OH的濃度變化與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組提高4.27%，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組分別降低9.86%、8.12%，但均無顯著差異(P>0.05)；SOD濃度變化與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組提高3.24%、試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組分別降低2.33%、7.67%，但均無顯著差異(P>0.05)。表1

2.2 補(bǔ)飼不同梯度對(duì)其血清蛋白的影響變化

研究表明，TP濃度變化與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別降低了2.68%、7.34%、2.65%，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅲ組均無顯著差異(P>0.05)，試驗(yàn)Ⅱ組差異極顯著(P<0.01)；ALB濃度變化與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組分別降低了6.41%、3.02%，試驗(yàn)Ⅲ組升高2.79%，試驗(yàn)Ⅰ組ALB濃度與對(duì)照組差異顯著(P<0.05)；GLB濃度變化與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別降低了1.15%、9.11%、4.88%，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅲ組與對(duì)照組均無顯著差異(P>0.05)，試驗(yàn)Ⅱ組GLB濃度與對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)；A/G變化與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組降低了5.56%，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組分別升高6.52%、7.49%，與對(duì)照組均無顯著差異(P>0.05)，試驗(yàn)Ⅰ組與Ⅱ、Ⅲ組組間A/G差異極顯著(P<0.01)。表2

表1 補(bǔ)喂不同梯度竹葉提取物下泌乳期伊犁馬血液中抗氧化因子變化

表2 補(bǔ)喂不同梯度竹葉提取物下泌乳期伊犁馬血液中蛋白變化

2.3 補(bǔ)飼不同梯度對(duì)其血液免疫因子的變化

研究表明，IL-1β的濃度變化與對(duì)照相比，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別升高了5.10%、32.04%、13.45%；TNF-α濃度變化與對(duì)照相比，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別升高了3.47%、26.75%、10.37%；試驗(yàn)Ⅱ組IL-1β、TNF-α濃度與對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)，且試驗(yàn)Ⅰ組與Ⅱ組組間IL-1β、TNF-α濃度差異顯著(P<0.05)；IgG濃度與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組升高1.53%，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組分別降低2.74%、3.09%；IgM濃度與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組升高2.05%，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組分別降低2.77%、5.21%，IgG與IgM的濃度變化差異均不顯著(P>0.05)。表3

表3 飼喂不同梯度竹葉提取物下泌乳期伊犁馬血液中免疫因子變化

2.4 補(bǔ)喂不同梯度竹葉提取物對(duì)其血液中激素的影響

研究表明，PRL濃度與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別升高了6.52%、35.94%、15.46%，試驗(yàn)Ⅱ組PRL濃度與對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)，且試驗(yàn)Ⅰ組與Ⅱ組組間PRL濃度差異顯著(P<0.05)；T4濃度與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組降低1.47%，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組分別升高0.81%、1.17%；P濃度與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組分別降低20.59%、7.99%，試驗(yàn)Ⅲ組升高1.40%；E2濃度與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別升高了54.67%、72.44%、30.31%，T4、P、E2的濃度變化與對(duì)照組均無顯著差異(P>0.05)。表4

表4 補(bǔ)喂不同梯度竹葉提取物下泌乳期伊犁馬血液中激素變化

3 討 論

3.1 補(bǔ)喂不同梯度竹葉提取物對(duì)其抗氧化性能的影響

MDA作為脂質(zhì)過氧化[13]的終產(chǎn)物，其含量變化反映出機(jī)體抗氧化能力[14, 15]。研究表明，隨飼喂梯度的升高會(huì)影響MDA含量的變化，且試驗(yàn)Ⅲ組MDA濃度極顯著低于對(duì)照組。與前人研究發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物可以降低MDA的含量來提高機(jī)體抗氧化能力[16, 17]的結(jié)果一致。SOD，-OH在血液中含量雖沒有顯著變化，但隨著飼喂梯度升高，其含量有逐漸降低的趨勢(shì)，該趨勢(shì)與MDA的濃度變化相似。盡管植物提取物中的黃酮類化合物在生物系統(tǒng)中起到的保護(hù)作用均與其抗氧化能力有關(guān)[18]，但竹葉提取物的抗氧化作用主要體現(xiàn)在對(duì)MDA含量的影響。

3.2 補(bǔ)喂不同梯度竹葉提取物對(duì)其血清蛋白的影響

外來刺激能夠作用于MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路，調(diào)控細(xì)胞的增殖分化，免疫細(xì)胞的增多會(huì)加速白蛋白與球蛋白的產(chǎn)生，進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)，血液中TP、GLB的濃度只在試驗(yàn)Ⅱ組梯度下顯著降低。與前人[19, 20]的研究的結(jié)果有差異?？赡苁窃囼?yàn)期內(nèi)，馬匹飼養(yǎng)環(huán)境主要以放牧為主所致。而通過試驗(yàn)Ⅰ、Ⅲ組與試驗(yàn)Ⅱ組對(duì)比發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)飼適量的竹葉提取物能夠影響血清蛋白的含量。

3.3 補(bǔ)喂不同梯度竹葉提取物對(duì)其血液免疫因子的影響

TNF-α和IL-1β是巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的主要促炎因子，與各種慢性炎癥疾病均有關(guān)[21]。炎癥部位的白細(xì)胞介素-1(IL-1)含量上升會(huì)促進(jìn)和維持炎癥反應(yīng)[22]。研究發(fā)現(xiàn)，在試驗(yàn)設(shè)計(jì)梯度內(nèi)，試驗(yàn)Ⅱ組補(bǔ)喂梯度會(huì)造成血液中IL-1β、TNF-α的濃度極顯著升高。通過增加釋放促炎因子會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物機(jī)體慢性疲勞[23, 24]。與前人的研究不一致。許多研究表明，補(bǔ)充黃酮類化合物會(huì)一定程度的降低IL-1β、TNF-α濃度，抑制炎性反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)抗疲勞效果[25]，提高免疫力。

3.4 補(bǔ)飼不同梯度對(duì)泌乳期伊犁馬血液激素的影響

適量甲狀腺激素[26]為維持正常心血管功能所必需。孕酮含量的變化與動(dòng)物體的生殖受損有關(guān)[27]，雌二醇與發(fā)情的表達(dá)和較早的排卵有關(guān)[28]。研究發(fā)現(xiàn)，飼喂不同梯度竹葉提取物對(duì)T4、P、E2的含量變化并不明顯，但對(duì)PRL產(chǎn)生較大影響，在飼喂梯度升高，血液中PRL的含量明顯升高。與前人研究[29]竹葉提取物對(duì)其它動(dòng)物體內(nèi)PRL的作用結(jié)果一致。PRL的含量的升高進(jìn)一步促進(jìn)了泌乳期伊犁馬的乳腺發(fā)育和乳汁的生成，減少泌乳量不足的風(fēng)險(xiǎn)，提高其產(chǎn)奶性能。

4 結(jié) 論

補(bǔ)飼20、30 g/d竹葉提取物均能對(duì)泌乳期伊犁馬的血液生化指標(biāo)產(chǎn)生影響；當(dāng)補(bǔ)飼20 g/d竹葉提取物時(shí)，血液中GLB的濃度呈極顯著下降，血液中免疫指標(biāo)IL-1β、TNF-α和激素指標(biāo)PRL的濃度均呈極顯著升高，血液中PRL濃度調(diào)節(jié)其體內(nèi)生殖激素的變化，PRL濃度的升高能促進(jìn)乳腺發(fā)育和乳汁的分泌，提高其泌乳期伊犁馬的產(chǎn)奶性能，但補(bǔ)飼該梯度條件下竹葉提取物會(huì)使泌乳期母馬血液蛋白含量下降和炎性細(xì)胞的增加，導(dǎo)致機(jī)體更易疲勞；當(dāng)補(bǔ)飼30 g/d竹葉提取物時(shí)，血液中抗氧化指標(biāo)MDA的濃度呈極顯著下降，血液中氧化終產(chǎn)物MDA濃度的降低，可有效提高泌乳期伊犁馬的抗氧化能力。

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