基于HIF-1α/NF-κB通路探究三黃三仙湯聯合常規西藥治療非重型再生障礙性貧血臨床效果

李丹丹,丁月玲,李 佳，王 寧，李 濤，王衛中

再生障礙性貧血屬于自身免疫性骨髓衰竭癥，發病機制較為復雜，多認為與T淋巴細胞免疫亢進、全血細胞減少及骨髓造血細胞凋亡等密切相關[1-4]。臨床上將其分為重型與非重型。有調查顯示，我國非重型再生障礙性貧血發病率為6/106，明顯高于重型；現階段重型再生障礙性貧血患者治療多以強免疫抑制及骨髓移植為主，而非重型再生障礙性貧血患者至今尚無規范化治療[5-6]。隨著中醫藥的推廣，臨床發現其在非重型再生障礙性貧血的治療中優勢顯著。中醫學認為，再生障礙性貧血屬“血虛”“虛勞”等范疇，病部在于骨髓，與臟器功能失調有關，主要責于腎臟功能失調，病機以腎虛為主，氣陰兩虛為標，故治療應以補腎生血和益氣養陰為主，國家級著名中醫魏克民教授提出的經驗方——三黃三仙湯與其相符。此外，已有研究證實，低氧誘導因子-1α(HIF-1α)/核因子-κB(NF-κB)通路參與再生障礙性貧血的發生和發展[7]。為此，本研究基于HIF-1α/NF-κB通路探討三黃三仙湯聯合常規西藥治療非重型再生障礙性貧血臨床效果，旨在為該病臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.2治療方法 對照組予以司坦唑醇聯合環孢素A治療，司坦唑醇(特一藥業集團股份有限公司，國藥準字H44021119)每次1片，每日3次口服；環孢素A(中山安士制藥有限公司，國藥準字H20198014)每日4 mg/kg，早晚各服用1次。觀察組在對照組治療基礎上予以三黃三仙湯，組方：黃芪30 g、仙鶴草30 g、仙茅20 g、仙靈脾20 g、黃芩15 g、黃精15 g，以水煎制，每日1劑，分早晚2次口服，每次100 ml。2組療程均為6個月。

1.3觀察指標

1.3.1臨床療效：比較2組治療6個月后臨床效果。參考《血液病診斷及療效標準》[8]制訂臨床療效評價標準：出血及貧血癥狀完全消失，血常規檢查結果正常，為治愈；出血及貧血癥狀完全消失，血白細胞、血小板、血紅蛋白明顯增加且接近正常值，為顯效；出血及貧血癥狀改善顯著，血白細胞、血小板、血紅蛋白有所增加但未接近正常值，為有效；未達到上述標準，為無效?？傆行?(治愈+顯效+有效)/總例數×100%。

1.3.2中醫證候積分：比較2組治療前和治療3、6個月后中醫證候積分。參考《中藥新藥臨床研究指導原則(試行)》[9]制訂中醫證候積分相關評分標準，分為無、輕度、中度和重度，分別記0～3分，分值越高，癥狀越嚴重。

1.3.3血常規及HIF-1α/NF-κB通路相關mRNA、細胞因子：比較2組治療前和治療3、6個月后血常規及HIF-1α/NF-κB通路相關mRNA、細胞因子。所有患者于清晨空腹狀態下抽取5 ml肘靜脈血，高速離心處理后，采用Sysmex XT1800I型五分類血細胞分析儀測定血白細胞、血小板及血紅蛋白；采用InfiniteF 50型酶標儀以實時定量聚合酶鏈反應測定HIF-1α mRNA、NF-κB mRNA；采用日立7600型全自動生化分析儀以酶聯免疫吸附試驗測定血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白細胞介素-1β(IL-1β)水平。

1.3.4不良反應：比較2組治療期間不良反應發生情況，包括牙齦增生、惡心嘔吐、毛發增多及皮疹等。

2 結果

2.1臨床療效比較 治療6個月后，總有效率觀察組為84.78%高于對照組60.87%(P<0.05)，見表1。

2.2中醫證候積分比較 治療前，2組中醫證候積分比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療3和6個月后，觀察組中醫證候積分均低于對照組(P<0.01)。見表2。

2.3血常規比較 治療前，2組血白細胞、血小板及血紅蛋白比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療3和6個月后，觀察組血白細胞、血小板及血紅蛋白均高于對照組(P<0.05，P<0.01)。見表3。

2.4HIF-1α/NF-κB通路相關mRNA比較 治療前，2組HIF-1α mRNA和NF-κB mRNA比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療3和6個月后，觀察組HIF-1α mRNA和NF-κB mRNA均低于對照組(P<0.01)。見表4。

2.5HIF-1α/NF-κB通路相關細胞因子比較 治療前，2組血清TNF-α和IL-1β比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療3和6個月后，觀察組血清TNF-α低于對照組，血清IL-1β高于對照組(P<0.05)。見表5。

2.6不良反應比較 治療期間，觀察組發生惡心嘔吐3例，皮疹2例，牙齦增生和毛發增多各1例，總不良反應發生率為15.22%；對照組發生惡心嘔吐2例，皮疹、牙齦增生和毛發增多各1例，總不良反應發生率為10.87%。2組總不良反應發生率比較差異無統計學意義(P>0.05)。

表2 2組非重型再生障礙性貧血治療前后中醫證候積分比較分)

表1 2組非重型再生障礙性貧血治療6個月后臨床效果比較[例(%)]

表3 2組非重型再生障礙性貧血治療前后血常規比較

表4 2組非重型再生障礙性貧血治療前后HIF-1α/NF-κB通路相關mRNA比較

表5 2組非重型再生障礙性貧血治療前后HIF-1α/NF-κB通路相關細胞因子比較

3 討論

近年來，臨床對再生障礙性貧血發病機制的研究多集中于“蟲子”學說，即骨髓造血干或祖細胞遭受異常免疫損傷，并深入進展，而“土壤”(造血微環境)與其相互影響和作用，關系密切[10-11]。機體正常造血依賴血細胞與骨髓微環境。通常情況下，骨髓內為低氧環境，絕對氧分壓不足32 mmHg，平均含氧量僅1.8%左右[12-13]。HIF-1α是一種在機體缺氧或炎癥狀態下激活的轉錄因子，廣泛參與機體免疫和炎癥反應[14-18]。隨著臨床研究的不斷深入，有學者發現TNF-α和IL-1β等炎性細胞因子可激活HIF-1α信號通路，而這些炎性細胞因子均涉及HIF-1α和NF-κB表達上調，且活化的NF-κB可增強HIF-1α表達，促使異源二聚體HIF-1形成，進而結合低氧反應元件，介導相應靶基因表達[19-20]。HIF-1α/NF-κB通路在活化及轉導過程中可產生TNF-α和IL-1β等炎性細胞因子，這些炎性細胞因子參與再生障礙性貧血的發生和發展。TNF-α除作為炎性細胞因子發揮炎癥和免疫作用外，還可作為造血祖細胞負向調節因子，對祖細胞形成具有明顯抑制作用，在再生障礙性貧血患者中水平明顯升高[21-22]。IL-1β參與免疫炎癥反應同時，還可作為輔助因子參與造血調節，對造血干細胞增殖及分化發揮重要作用[23-24]?；诖耍狙芯繌腍IF-1α/NF-κB通路探究三黃三仙湯聯合常規西藥治療非重型再生障礙性貧血的臨床效果。

中醫學認為再生障礙性貧血屬“血虛”“虛勞”等范疇，病部在于骨髓，病機以腎虛為主，臨床多由腎論治，辨證分型多為腎陽虛、腎陰虛及腎陰陽兩虛型，由于該病病程較長，患者陰陽俱損，通常表現為腎陰陽兩虛。有研究指出，經驗方三黃三仙湯具有補腎健脾、養血益氣功效，該處方屬健脾益氣、溫腎生血之方，具有溫陽滋陰、止血生血作用，治療再生障礙性貧血可提高臨床效果[25]。本研究觀察組采用三黃三仙湯聯合常規西藥治療，對照組僅采用常規西藥治療，治療6個月后總有效率觀察組為84.78%高于對照組60.87%；治療3和6個月后觀察組中醫證候積分均低于對照組，與以往研究結果一致。表明三黃三仙湯聯合常規西藥治療非重型再生障礙性貧血可明顯提高臨床效果，改善臨床癥狀。本研究結果顯示，治療3和6個月后，觀察組血白細胞、血小板及血紅蛋白均高于對照組。提示三黃三仙湯聯合常規西藥治療非重型再生障礙性貧血可通過促進骨髓細胞增殖和分化，促使造血功能恢復。三黃三仙湯方中黃芪補氣，仙鶴草補虛止血，二者共同增強人體正氣；仙靈脾、仙茅屬溫腎壯陽之品，溫煦腎臟，促使精血再生；黃精益氣養陰，黃芩清熱止血，全方補中有泄，補泄兼施，共奏健脾溫腎、益氣生血之功效。本研究結果顯示，治療3和6個月后，觀察組HIF-1α mRNA、NF-κB mRNA及血清TNF-α均低于對照組，血清IL-1β高于對照組。提示三黃三仙湯聯合常規西藥治療非重型再生障礙性貧血可調節患者HIF-1α/NF-κB通路。現代藥理學研究證實，黃精、仙靈脾、黃芪及仙茅等均具有增強免疫及刺激骨髓造血的作用[26]，故認為三黃三仙湯可通過刺激骨髓造血和恢復機體免疫穩態途徑調節HIF-1α/NF-κB通路。此外，本研究結果顯示，治療期間2組總不良反應發生率比較差異無統計學意義。提示三黃三仙湯聯合常規西藥治療非重型再生障礙性貧血安全性較好。

綜上所述，三黃三仙湯聯合常規西藥治療非重型再生障礙性貧血患者可明顯提高臨床效果，緩解臨床癥狀，改善血常規。其機制可能為三黃三仙湯通過下調HIF-1α/NF-κB通路上HIF-1α和NF-κB表達，減少TNF-α分泌，加速IL-1β釋放，促使機體免疫及造血功能恢復，進而對疾病產生積極作用。然而，本研究樣本量較小，有待擴大樣本量行進一步研究證實本研究結論。