可吸收透明質酸止血材料對犬子宮出血模型的止血效果及其體內降解特性

鄭曉霞，何小華，房紹英，馮仰輝，程艷玲

(1.山東省藥學科學院 山東省化學藥物重點實驗室，山東 濟南 250101 ； 2. 山東藥品食品職業學院，山東 威海 264210)

在對人和動物進行外科手術的過程中，術中出血會影響手術視野、干預手術進程、影響術部康復，嚴重的術部出血將導致個體死亡[1]。常見的毛細血管出血或動靜脈出血，采用電凝、壓迫或縫扎等常規方法即可有效止血。但是，在外科及創傷手術中廣泛出血或大量滲血的情況下，包括紗布、繃帶、棉紗等傳統的止血材料的止血效果并不理想。新型止血紗布和止血海綿雖然止血效果優于傳統止血材料，但自身降解性能差，長期存在于創面組織，往往會引起機體的應激反應。可吸收止血產品能夠在較短的時間內促使血液凝固，達到快速止血的目的，同時，還可被機體降解吸收，無需從受傷部位去除，因此具有重要的應用前景[2-3]。本試驗旨在通過建立比格犬子宮出血模型，考察可吸收透明質酸止血材料的止血作用，并觀察產品的組織相容性和降解性能，以評價其是否可作為臨床盆腔外科手術中的理想止血材料。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 18只雌性比格犬，由廣州醫藥研究總院有限公司提供，生產許可證號：SCXK(粵)2018—0007，合格證號：44006900000450。犬只飼養于普通環境，用于試驗時體重為9.0～12.0 kg。

1.2 主要試劑 可吸收透明質酸止血材料，山東省藥學科學院；外科術中止血裝置，巴德醫療科技(上海)有限公司；戊巴比妥鈉，德國默克公司；0.9%氯化鈉注射液，辰欣藥業股份有限公司；頭孢噻呋鈉，河南新正好生物工程有限公司。

1.3 主要儀器 電子臺秤(TSC-150型)、電子天平(LE203E/02型)，梅特勒-托利多(常州)測量技術有限公司；生物組織脫水機(櫻花VIP-6型)、全自動一體化染色機(櫻花Tisssue-Tek?PrismaTM型)，日本櫻花公司；生物組織包埋機(NP-B型)，湖北諾普醫療器械有限公司；切片機(RM2235型)，德國Leica公司。

1.4 試驗方法

1.4.1 子宮出血模型的構建 18只比格犬按體重隨機分為供試品組、市售對照品組和紗布對照組，每組6只。犬按1 mL/(kg·bw)劑量靜脈注射給予3%戊巴比妥鈉溶液進行麻醉，腹部備皮，仰臥位固定，消毒、鋪巾，開腹，暴露子宮。在距離子宮體與子宮角交界處約1 cm的范圍，隨機選取微小血管(φ<1 mm)，用手術刀片在與血管垂直的角度劃出長度約5 mm的直線型創口，造成子宮出血模型。

1.4.2 各試驗組止血過程 供試品組處理方法：子宮出血創面造成后，迅速去除創面積血，暴露出血點，立即將適量供試品直接噴在出血部位，覆以無菌紗布壓迫止血，直至止血完成。市售對照品組做同樣處理。紗布對照組使用已精確稱重的無菌醫用紗布敷壓創口，止血完畢，用少量生理鹽水浸透紗布，輕輕揭開，以免造成再次出血。記錄各組的止血時間、出血量和材料用量。對于各組中創面較大的血管及止血無效的出血采用電凝止血。手術完畢后，去除多余樣品，還納子宮，常規逐層縫合。各組動物于術后每天分別用75%酒精和碘伏消毒傷口處1次，并按10 mg/(kg·bw·d)肌內注射頭孢噻呋鈉，連續注射3 d，預防感染。

1.5 觀察指標及方法 止血時間：在出血創面部位應用止血樣品或紗布直至出血完全停止的時間間隔為止血時間。止血觀察時間最長為5 min，如5 min內已止血，則記錄實際止血時間；大于5 min仍未止血，則止血無效，止血時間記錄為5 min。出血量：術前用分析天平精確稱重無菌醫用紗布，止血結束后稱重吸收血液后的紗布重量，根據公式計算出血量：出血量(mL)=(止血后紗布重量-止血前紗布重量)÷血液比重(1.050 g/mL)。材料用量：用差量法，即每次止血前后稱量樣品重量。術中止血效果評分：根據術中出血和術野情況，判斷止血效果并進行評分(表1)，評分≥2 分，表示止血有效；評分≥3 分，表示止血優良。

表1 止血效果評分Table 1 Hemostatic effect score

1.6 大體解剖觀察及組織病理學檢查 術后7 d內，每天觀察犬傷口愈合情況，記錄有無出血、滲出和感染等。術后7 d解剖各組比格犬，肉眼觀察供試品和市售對照品的殘留情況、創面的血腫和腹腔粘連情況；取創面處組織、損傷附近血管進行組織病理學檢查，顯微境下觀察樣品組織粘附性、降解情況、組織反應和有無血栓形成。

1.7 統計學分析 采用SPSS 17.0統計學軟件對數據進行單因素方差分析或非參數檢驗，數據以“平均值±標準差”表示。若計量資料的方差齊，采用單因素方差分析最小差異性檢驗法(Least-significant difference，LSD)檢驗進行組間比較；若計量資料的方差不齊，采用單因素方差分析Dunnet's T3檢驗。P<0.05表示有統計學意義。

2 結果

2.1 止血時間、出血量、止血材料用量和止血效果評分 結果如表2所示，與紗布對照組相比，供試品組和市售對照品組均能夠明顯縮短犬子宮出血創面的止血時間(P<0.01)和減少出血量(P<0.05)；供試品在犬子宮出血創面的止血過程中用量比市售對照品略少；供試品組和市售對照品組之間在止血時間、出血量和材料用量上無統計學差異(P>0.05)。與紗布對照組相比，供試品組和市售對照品組的止血效果評分有極顯著提高(P<0.01)，且供試品組的手術視野比市售對照品組稍好，滲血較少。

表2 各組比格犬子宮創面止血效果Table 2 Hemostatic effect of each group on uterine wound in beagle dogs

2.2 大體解剖觀察 術后7 d觀察期內，各組動物進食、飲水、排便等基本體征均正常，未出現傷殘和死亡情況。除了個別動物傷口處出現線結反應，有輕微紅腫，其余大部分動物的腹部傷口愈合良好，無明顯異味和分泌物，未見炎癥反應，可見供試品和市售對照品對傷口愈合無明顯影響。術后7 d對比格犬進行大體解剖肉眼觀察發現，各組動物的子宮與周圍組織均無粘連，手術劃傷處愈合良好，供試品組和市售對照品組均未見樣品殘留(圖1)。

圖1 術后7 d各組比格犬子宮創面愈合情況Fig.1 Wound healing of uterus in each group 7 days after operationA:紗布對照組； B：供試品組； C：市售對照品組A:Gauze control group; B:Test group; C:Commercial control group

2.3 組織病理學檢查 術后7 d時，各組比格犬子宮外膜(主要由漿膜組成)結構正常，未見變性、壞死、炎細胞浸潤等組織病理學變化(圖2)。紗布對照組有1只犬的子宮黏膜層有輕微出血，供試品組和市售對照品組均未見明顯異常。各組在顯微鏡下均未觀察到血栓、樣品殘留和異物組織，其他主要臟器(心、肝、脾、肺、腎、腦)亦未見明顯異常。

圖2 術后7 d各組比格犬子宮組織病理學觀察(H.E.染色，100×)Fig.2 Histopathological observation of uterus in each group 7 days after operation (H.E.staining,100×)A：紗布對照組； B：供試品組； C：市售對照品組A:Gauze control group; B:Test group; C:Commercial control group

3 討論

對于高效止血、抗菌、抗炎、促愈合、可生物降解、可吸收等功能多樣化的止血材料的研發，已成為當前止血領域的研究熱點[4]。可吸收透明質酸止血材料為以透明質酸為主要原料，采用乳化交聯工藝制備的微球表面具有微孔結構[5]，微孔具有親水性分子篩的作用，通過吸收水分，濃縮血液中的固形成分(如血小板、紅細胞、凝血酶和纖維蛋白原等)到微粒表面，形成凝膠狀基質而加速自然止血[6-7]。

本試驗旨在考察可吸收透明質酸止血材料對子宮部位大面積滲血的止血效果，并考察其降解特性，試驗選用犬的子宮出血模型，既滿足了出血部位不會自行凝血的要求，也模擬了適應癥的使用部位。

本試驗結果顯示，與紗布對照組比較，供試品組在犬的子宮出血創面具有較好的止血作用，與市售對照品組的止血效果相當；術后7 d肉眼觀察，供試品組和市售對照品組的子宮創面恢復良好，未見樣品殘留；術后7 d組織病理學觀察，子宮創面未見血栓、壞死、炎性細胞浸潤、組織增生等病理變化，其他主要臟器未見明顯異常。

綜上所述，可吸收透明質酸止血材料對犬子宮出血模型具有較好的止血作用，且7 d即可降解完全，同時不影響傷口的愈合，創傷部位無感染，無血栓形成，不引起組織廣泛粘連，可作為臨床盆腔外科手術中一種理想的止血材料。