虎耳草科植物指紋圖譜及抗氧化活性研究進(jìn)展*

馬曉彤，周蓉蓉，張晶云，謝冰怡，郝 雨，史瑞萌，張 韞

(西安醫(yī)學(xué)院，陜西 西安 710021)

1 虎耳草科

虎耳草科(Saxifragaceae)隸屬于雙子葉植物綱，包括17個(gè)亞科，80個(gè)屬，1200余種，主要生長(zhǎng)在北溫帶。中國(guó)境內(nèi)共有7個(gè)亞科，28個(gè)屬，大約500種，華南華北地區(qū)均產(chǎn)，西南地區(qū)為主產(chǎn)地，中國(guó)獨(dú)有一屬為獨(dú)根草屬(Oresitrophe Bunge)?；⒍菘浦参锏闹饕瘜W(xué)成分為槲皮素-5-葡萄糖苷、巖白菜素、沒食子酸、原兒茶酸、熊果酚苷、揮發(fā)油和有機(jī)酸等，可用于治療風(fēng)疹、濕疹、中耳炎等?；⒍菘浦参镏芯哂锌寡趸芰Φ闹饕瘜W(xué)成分有巖白菜素(bergenin)、槲皮苷(quercitrin)、沒食子酸(gallic acid)、熊果酚苷(arbutin)、揮發(fā)油(volatile oil)、有機(jī)酸等物質(zhì)[1]。不同來源的同一種植物含有的化學(xué)成分及含量具有一定差異，難以對(duì)其內(nèi)在質(zhì)量做到全面把控，不能準(zhǔn)確地鑒別其真?zhèn)蝺?yōu)劣。例如，虎耳草科植物落新婦屬的落新婦，不同產(chǎn)地的落新婦所含有的化學(xué)成分及含量具有一定差異，難以全面準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)其內(nèi)在質(zhì)量，可以利用不同產(chǎn)地落新婦的共同特征建立其高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜，對(duì)落新婦的內(nèi)在質(zhì)量進(jìn)行全面把控[2]。為了更加合理有效的開發(fā)利用和把控虎耳草科植物的內(nèi)在質(zhì)量，現(xiàn)將虎耳草科植物的HPLC指紋圖譜及抗氧化活性進(jìn)行綜述。

2 指紋圖譜

中藥指紋圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)前處理后，采用一定的分析手段(如HPLC等)得到的能夠標(biāo)示其化學(xué)特征的色譜圖。中藥指紋圖譜是一種綜合、可量化的鑒定手段，建立在中藥化學(xué)成分系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，主要用于中藥材以及中藥制劑半成品的質(zhì)量控制。中藥質(zhì)量控制方法中應(yīng)全面體現(xiàn)藥材成分信息，單一測(cè)定一種或幾種有效成分作為藥效的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)有局限性。在這樣的背景下，中藥指紋圖譜因其可以全面表達(dá)關(guān)于成分的信息，對(duì)中藥質(zhì)量進(jìn)行可靠評(píng)價(jià)，受到研究者的青睞成為目前國(guó)際上較為通用的中藥質(zhì)量控制辦法。

王燕等[3]以羽葉鬼燈檠為主要研究對(duì)象，色譜檢測(cè)條件：檢測(cè)波長(zhǎng)310 nm時(shí)進(jìn)行梯度洗脫。最佳的提取方法：60%的甲醇在蒸餾水中水浴回流2次，提取時(shí)間一般為1 h。利用化學(xué)模式識(shí)別的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析，應(yīng)用高效液相色譜的方法，建立有關(guān)羽葉鬼燈檠的HPLC指紋圖譜。其結(jié)果表明測(cè)定的RSD具有一致性，且其值均小于5%，對(duì)管控羽葉鬼燈檠的品質(zhì)具備重要意義。周美等[4]以虎耳草藥材為主要研究對(duì)象，色譜檢查條件：檢測(cè)波長(zhǎng)256 nm進(jìn)行梯度洗脫。最佳的提取工藝方法：60%乙醇水浴進(jìn)行回流提取，其提取時(shí)間2 h，料液比1:12。其結(jié)果顯示RSD值均穩(wěn)定，可有效將其作為藥用植物虎耳草藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)的重要依據(jù)。

費(fèi)曜等[5]以“松蒂”(蓖齒虎耳草)藥用植物為主要色譜研究對(duì)象，色譜條件：色譜波長(zhǎng)為254 nm，進(jìn)行紫外的梯度洗脫。最佳提取工藝：在周美等[4]單純采用乙醇回流的基礎(chǔ)上，以甲醇進(jìn)行超聲法提取。利用HPLC等獲取各種來自于藥用植物蓖齒虎耳草中所含物質(zhì)具有特點(diǎn)的共有峰，全面體現(xiàn)出藥材中物質(zhì)的化學(xué)組成并初步建立了蓖齒虎耳草的HPLC指紋圖譜。熊丹丹等[6]首次使用高效液相色譜的研究方法對(duì)苗藥的虎耳草成分進(jìn)行了多指標(biāo)的定量分析，并將其作為主要成分進(jìn)行測(cè)定。建立了苗藥的虎耳草的HPLC指紋圖譜，形成虎耳草藥材質(zhì)量控制的新型技術(shù)方法，為以后進(jìn)一步提高藥用植物虎耳草質(zhì)量控制方法奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。袁麗君等[7]以落新婦為研究對(duì)象，色譜條件：檢測(cè)波長(zhǎng)275 nm時(shí)進(jìn)行梯度洗脫。在進(jìn)行提取方法的選擇上，袁麗君等采用適用超聲提取法，提取溶劑為50%，提取時(shí)間是1 h為最佳提取工藝，并以巖白菜素作為指標(biāo)成分，對(duì)落新婦藥材進(jìn)行真?zhèn)舞b別。

目前對(duì)虎耳草科植物采用HPLC法建立指紋圖譜實(shí)驗(yàn)研究較少。在實(shí)驗(yàn)過程中，提取工藝不斷更新，最初采用的回流提取法雖然對(duì)實(shí)驗(yàn)要求不高，操作簡(jiǎn)單，但缺點(diǎn)在于其提取效率低，不能很好的達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。優(yōu)化后的超聲提取法不用高溫加熱，對(duì)熱不穩(wěn)定成分適宜，有效成分易于分離，大大地提高了實(shí)驗(yàn)效率，促進(jìn)了實(shí)驗(yàn)進(jìn)程的發(fā)展。

3 抗氧化活性

虎耳草科植物的質(zhì)量綜合評(píng)價(jià)，可通過HPLC指紋圖譜的建立和抗氧化活性大小的測(cè)定來進(jìn)行。人體的正常代謝會(huì)產(chǎn)生自由基的氧化，但過多的氧化自由基會(huì)對(duì)人體健康造成威脅，中藥作為一種天然產(chǎn)物其抗氧化活性越來越受到研究人員的重視，因此可通過研究中藥的抗氧化活性來建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。有關(guān)虎耳草科植物的抗氧化活性的研究主要有以下兩類：

3.1 體內(nèi)抗氧化活性

崔瑋等[8]以甘青虎耳草中含有的總黃酮對(duì)D-半乳糖所致衰老小鼠進(jìn)行了試驗(yàn)，通過測(cè)得小鼠血清和臟器中的生化指標(biāo)，探究其抗衰老作用對(duì)衰老小鼠產(chǎn)生的效果。結(jié)果其總黃酮可以提高抗氧化酶的活性，其中低劑量總黃酮的效果比較顯著。蒲含林[9]對(duì)腦缺血小鼠進(jìn)行再灌注的研究，發(fā)現(xiàn)巖白菜素能抑制應(yīng)激時(shí)超氧陰離子的過度產(chǎn)生，對(duì)兩種小鼠的腦組織中所產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)均有抑制作用，使自由基產(chǎn)生減緩，從而保證小鼠腦組織細(xì)胞的正常生理活性。

3.2 體外抗氧化活性

潘國(guó)慶等[10]以抗氧化劑VC、VE的乙醇懸濁液作為對(duì)照，測(cè)定巖白菜乙醇提取物在不同油脂中的POV值，結(jié)果顯示:其對(duì)四種常見食用油脂均具有抗氧化能力，其中對(duì)酥油作用最強(qiáng)，與VC、VE效果相當(dāng)，可見其作為天然氧化劑開發(fā)比較有前景。郝志云等[11]通過分光光度法來深入了解巖白菜素所具有的抗羥自由基作用與抗氧化活性，結(jié)果其能一定程度地抑制羥基自由基氧化所導(dǎo)致的損傷，且能明顯阻礙脂質(zhì)過氧化。陳翠等[12]采用DPPH比色法來評(píng)估以乙醇提取的巖白菜與其余幾種藥用植物的抗氧化能力，其中抗氧化活性以巖白菜根、莖提取物為最強(qiáng)，自由基清除率也大于VC。尚小嬌[13]等對(duì)干燥七葉鬼燈檠的根進(jìn)行總多酚的提取,在進(jìn)行比較與工藝優(yōu)化后得出用乙醇進(jìn)行回流提取時(shí)提取效率較高。以VC 作為對(duì)照，其抗氧化活性略強(qiáng)于VC。成英等[14]采用分光光度法，對(duì)巖白菜的三種萃取物進(jìn)行自由基清除能力分析，結(jié)果顯示三種巖白菜提取物的抗氧化活性均比較明顯,且對(duì)于DPPH自由基與羥基自由所產(chǎn)生的基清除效果較明顯，其中乙醇浸提物甲醇提取部位所具有的抗氧化能力最強(qiáng)。

盧玉棟等[15]采用分光光度法，以VC作為對(duì)照，對(duì)虎耳草的乙醇提取液的體外抗氧化活性進(jìn)行研究，結(jié)果表明其對(duì)羥基自由基所具有的消除效果較為良好，且抗氧化能力與濃度成正比。羅思源等[16]對(duì)峨眉巖白菜中提取出的三萜類物質(zhì)在體外所具有的抗氧化能力大小進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果三萜類提取物在其根中含量較多，且其根和葉中所提取出的三萜類物質(zhì)對(duì)自由基的清除均有顯著作用。

總體而言，由于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)耗時(shí)長(zhǎng)、花費(fèi)多等多種因素影響，虎耳草科植物體內(nèi)抗氧化活性相關(guān)的研究較少，有關(guān)研究多用的是體外的自由基清除法，此方法快速、便捷、靈敏，且更加容易操作，但自由基清除法也有著不少的缺陷，在一定波長(zhǎng)處準(zhǔn)確度會(huì)受到影響，因此為了建立該科植物更加全面的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，需與HPLC法結(jié)合從而進(jìn)行較為合理的質(zhì)量控制。

4 結(jié) 語(yǔ)

巖白菜屬歷史悠久，我國(guó)分布廣泛，具有較高的藥用價(jià)值。運(yùn)用HPLC指紋圖譜，可有效的評(píng)估巖白菜屬藥材的一致性及質(zhì)量，為中藥材的生產(chǎn)品質(zhì)管理控制及其前景具有重大意義。研究體內(nèi)外抗氧化活性時(shí)發(fā)現(xiàn)是巖白菜屬是黃酮、自由基、多酚等多種成分綜合作用的效果，若要更好理解其抗氧化作用機(jī)制，還需從細(xì)胞和基因水平闡明作用機(jī)理，為今后研發(fā)抗氧化劑提供了理論依據(jù)。