心電圖參數聯合外周血miR-21、miR-133a、miR-150檢測對急性心肌梗死的診斷價值*

張敏敏，鄭蒙蒙

1.淮安市第二人民醫院心電圖室，江蘇淮安 223001;2.漣水縣人民醫院呼吸內科，江蘇淮安 223499

急性心肌梗死(AMI)是冠狀動脈急性閉塞引起的心肌缺血性壞死，具有起病急驟、進展迅速、致殘致死率高等特點，及時再通梗死冠狀動脈、恢復心肌血流灌注對挽救瀕死心肌、改善患者預后至關重要[1-2]。近年來，心電圖在心臟疾病的早期診斷及病情監測中發揮著重要作用，心電圖參數QT間期離散度(QTD)代表各部分心室肌復極的不同步和不穩定程度，其值變化與心血管疾病的發生發展密切相關[3]。且有報道[4-7]指出，多種微小RNA(miRNA)可作為AMI診斷的潛在生物標志物，miR-21、miR-133a、miR-150均已被證實參與AMI的發生發展過程。此外，心肌纖維化是導致AMI病情惡化的主要因素之一?；诖?，本研究嘗試探討心電圖參數聯合外周血miR-21、miR-133a、miR-150檢測對AMI的診斷價值及與心肌纖維化的關聯性?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 前瞻性選取2017年10月至2020年10月本院74例AMI患者作為研究組，其中男43例，女31例，年齡20～78歲，平均(62.35±8.17)歲。納入標準：(1)參照美國心臟協會(AHA)、美國心臟病學會(ACC)共同發布的AMI診斷標準[8]診斷為AMI；(2)首次患AMI；(3)年齡18～79歲；(4)無心臟手術史；(5)認知功能良好；(6)患者及家屬知曉本研究，已簽署同意書。依據1∶1配對試驗原則，另隨機選取同期健康體檢者74例作為對照組，其中男45例，女29例，年齡18～75歲，平均(60.12±7.42)歲。納入標準：(1)無心臟手術史及心血管疾??；(2)自主行為能力良好，無溝通交流障礙。兩組排除標準：(1)凝血功能異?；蛴谐鲅獌A向者；(2)惡性腫瘤患者；(3)急慢性感染性疾病患者；(4)腦血管疾病、肝腎功能障礙患者；(5)自身免疫性疾病患者。本研究通過本院倫理委員會審批。

1.2方法

1.2.1實驗室指標檢測 所有受試者均采集外周靜脈血。取血液標本3 mL，采用枸櫞酸鈉抗凝(9∶1)處理，采用miRNA提取試劑盒(購自北京索萊寶科技有限公司)提取全血中總RNA，采用逆轉錄試劑盒(美國Promega公司)逆轉錄，采用聚合酶鏈反應(PCR)試劑盒(購自德國Qiagen公司)，以實時熒光定量PCR法檢測miR-21、miR-133a、miR-150相對表達水平，采用通用TaqMan探針，miR-21正向引物為5′-TCA AGC AAG AGA AGA AGG ATG A-3′，反向引物為5′-GCA GGA TTT AGA GGG GAC AGA A-3′；miR-133a正向引物為5′-ATG GAC TTC CGG TCA GGT TCA-3′，反向引物為5′-GCC CTT GCC CAG TAG CTT CA-3′；miR-150正向引物為5′-CAG GCA TGG AGA CGC TAC TGA-3′，反向引物為5′-TCC GAT CGC AGG TGA CTG A-3′；引物設計與合成由廣州銳博公司完成。U6作為miRNA定量內參。應用公式2-ΔΔct計算miR-21、miR-133a、miR-150相對表達水平(Δct=ct目標-ct內參，ΔΔct=Δct實驗-Δct對照)。取血液標本3 mL，離心處理(轉速3 500 r/min，半徑8 cm，時間5 min)取血清，采用貝克曼庫爾特公司生產的DX800免疫發光儀器及配套試劑盒測定血清心肌纖維化指標，包括層黏連蛋白(LN)、透明質酸(HA)、心肌肌鈣蛋白T(CTnT)。取血液標本2 mL，采用沈陽萬泰醫療設備有限責任公司生產的OTA-400型全自動生化分析儀、血脂測試卡(干化學法)檢測三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平。采用智能電子血壓計(購自上海聚慕醫療器械有限公司)測定收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)。實驗室操作嚴格按試劑盒說明書進行。

1.2.2心電圖檢查 研究組于入院時、對照組于體檢時行十二導聯心電圖檢查，儀器為KF-2000型動態心電記錄分析儀(購自西安交大辰方科技有限公司)，檢測并記錄心電圖參數QTD，測量結果采用心率具體數值進行校正。

2 結 果

2.1兩組臨床資料比較 兩組性別、年齡、體質量指數、吸煙史、飲酒史、SBP、DBP、TC、TG、HDL-C、LDL-C水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組臨床資料比較或n(%)]

2.2兩組心肌纖維化指標、心電圖參數、外周血miRNA比較 研究組QTD、LN、HA、TGF-β1、miR-21、miR-133a、miR-150及CTnT水平均較對照組高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組心肌纖維化指標、心電圖參數、外周血miRNA比較

2.3心電圖參數、外周血miRNA與心肌纖維化指標相關性 相關性分析可知，AMI患者心電圖參數QTD、外周血miR-21、miR-133a、miR-150均與心肌纖維化指標LN、HA、TGF-β1及CTnT均呈正相關(P<0.05)。見表3。

表3 心電圖參數、外周血miRNA與心肌纖維化指標相關性

2.4心電圖參數、外周血miRNA對AMI的診斷價值 繪制ROC曲線，評價心電圖參數、外周血miRNA對AMI的診斷價值，發現心電圖參數QTD聯合外周血miR-21、miR-133a、miR-150診斷AMI的曲線下面積(AUC)值最大，為0.900，最佳診斷靈敏度、特異度分別為86.49%、81.08%，具有良好診斷效能。見表4、圖1。

表4 心電圖參數、外周血miRNA對AMI的診斷價值

圖1 心電圖參數、外周血miRNA診斷AMI的ROC曲線

3 討 論

本研究結果顯示，AMI患者的心電圖參數QTD大于健康對照組，與國內外相關研究[9-10]結果一致。分析其原因為AMI發生時由于心肌缺血缺氧，使相鄰心肌細胞在復極時產生電位差，導致QTD增大[11-12]。本研究ROC曲線結果顯示QTD診斷AMI的AUC為0.878，具有較高診斷效能，進一步證實心電圖參數QTD在AMI的發生發展及診斷方面具有良好應用價值。但QTD診斷AMI的靈敏度較低，僅為68.92%，需要與其他診斷方法聯合。

近期的多項研究[13-14]證實，miRNA可作為AMI早期診斷的生物標志物。本研究結果中，AMI患者外周血miR-21、miR-133a、miR-150相對表達水平均明顯高于健康人群，提示上述指標與AMI的患病有關。miR-21是位于基因組第17號染色體上的跨膜蛋白基因，文獻報道指出，在AMI患病早期階段miR-21表達增加，可能通過促進炎癥反應加重心肌細胞損傷[15]。支持本研究結果結論。miR-133a是調控肌肉細胞增殖的一種miRNA，在平滑肌細胞、心肌細胞內均有表達，具有調控內皮細胞功能、調控平滑肌細胞增殖的生物學作用，與心肌受損、心臟衰竭的發生發展密切相關[16]。當心肌細胞發生損傷時，可釋放出miR-133a，并進入冠脈循環，引起血液系統中miR-133a含量增加。而miR-150位于染色體19q13區域，是一種與炎癥有關的miRNA，其過表達可上調炎性因子從而介導心臟肥大和纖維化的發生，且能直接抑制心肌細胞中的促凋亡基因egr2和p2x7r參與缺血性損傷期間心臟結構和功能重構的調節[17-18]。本研究還發現外周血miR-21、miR-133a、miR-150相對表達水平診斷AMI的AUC均在0.75以上，具有一定診斷效能。

筆者認為，心電圖參數可反映AMI患者病理性心肌細胞復極電位變化，而miRNA能從分子生物學方面反映心肌細胞的病理變化，推測兩種方法聯合能更全面反映AMI患者心肌細胞損傷情況，或許能提高診斷價值。本研究ROC曲線分析結果顯示，QTD聯合外周血miR-21、miR-133a、miR-150診斷AMI的AUC達到0.900，大于各指標單獨診斷，有助于提高診斷效能，且心電圖參數聯合外周血miRNA診斷AMI的研究較少，心電圖參數QTD聯合外周血miR-21、miR-133a、miR-150或許能為臨床診斷AMI提供新的方法。此外，本研究還發現AMI患者心電圖參數QTD、外周血miR-21、miR-133a、miR-150均與CTnT水平、心肌纖維化指標LN、HA、N末端腦鈉肽前體(NT-proBNP)密切相關。心肌纖維化是AMI患者心肌細胞外基質變化的主要特征，心肌纖維化可引起心肌重塑，加重患者心功能損傷[19]。由此可見，通過檢測心電圖參數QTD、外周血miR-21、miR-133a、miR-150相對表達水平可反映心肌纖維化情況，有助于對患者病情進行評估。

綜上所述，AMI患者心電圖參數QTD、外周血miR-21、miR-133a、miR-150相對表達水平明顯升高，各指標聯合可為臨床診斷AMI提供參考，且與心肌纖維化指標密切相關，具有較高臨床應用價值。但本研究仍存在一定不足，如未動態觀察QTD、外周血miR-21、miR-133a、miR-150相對表達水平變化，QTD與心電圖顯示的梗死部位的關系未明確，未明確miRNA與心梗嚴重度、預后的關系，未來工作中仍需進一步深入探討。