血清IL-33水平與變應(yīng)性鼻炎患者T淋巴細(xì)胞亞群水平的相關(guān)性分析

溫振雷，王紅梅，鄒良玉，李連賀

遼寧省朝陽市中心醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科,遼寧朝陽 122000

流行病學(xué)調(diào)查顯示，過敏性疾病如變應(yīng)性鼻炎(AR)和哮喘的發(fā)生率在世界范圍內(nèi)顯著增加，據(jù)估計(jì)城市成人AR標(biāo)準(zhǔn)化患病率為17.6%，該病雖不危及生命但可誘發(fā)諸多并發(fā)癥而影響患者生活質(zhì)量[1]。由于AR發(fā)病機(jī)制的特殊性，避免接觸過敏原成為治療的首選方案，但該方案應(yīng)用較為困難；以抗炎為靶向的藥物治療方案常常使患者難以耐受，同樣難以較好地推廣應(yīng)用[2]。隨著對(duì)AR的研究逐步深入，過敏原特異性免疫治療的優(yōu)點(diǎn)亦逐漸體現(xiàn)，但機(jī)體免疫系統(tǒng)是一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，現(xiàn)階段仍有諸多問題尚未明確，故對(duì)AR的免疫調(diào)控機(jī)制開展深入研究可能有助于對(duì)AR的預(yù)防、診斷和治療[3]。現(xiàn)階段，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為輔助性T淋巴細(xì)胞(Th)1/Th2免疫失衡是AR發(fā)病機(jī)制中的主要環(huán)節(jié)[4-5]，即Th2極化引起Th2類亞群優(yōu)勢(shì)表達(dá)的變應(yīng)性炎性反應(yīng)，而作為白細(xì)胞介素(IL)家族成員之一的IL-33可激活Th2、肥大細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞等諸多免疫細(xì)胞，進(jìn)一步加速炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn)程，從而促進(jìn)過敏性炎性反應(yīng)[6]。然而，血清IL-33水平與AR患者T淋巴細(xì)胞亞群關(guān)系的研究仍較少，因此，本研究探討本院收治的AR患者血清IL-33水平與T淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系，旨在為血清IL-33在AR患者臨床診治上的應(yīng)用提供一線資料。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年4月至2020年10月本院收治的AR患者97例作為AR組，其中男55例，女42例；年齡20～56歲，平均(32.15±8.64)歲；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)為21.68～25.84 kg/m2，平均(23.85±1.65)kg/m2。另選擇同期來本院進(jìn)行體檢且無AR家族史及相關(guān)臨床癥狀、體征的健康人員100例作為對(duì)照組，其中男61例，女39例；年齡21～55歲，平均(32.47±8.70)歲；BMI為21.73～25.90 kg/m2，平均(23.90±1.71)kg/m2。兩組研究對(duì)象均未發(fā)生病例脫落，兩組基線資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已通過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者自愿參加并簽署知情同意書。

AR組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)認(rèn)知狀態(tài)良好，依從性較高，能夠配合各項(xiàng)檢查和治療；(2)入組前1周內(nèi)未患上呼吸道感染性疾病；(3)未處于妊娠期或哺乳期。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)過敏體質(zhì)或存在自身免疫性疾病；(2)入組前30 d內(nèi)接受過局部或全身糖皮質(zhì)激素、抗組胺藥物及免疫治療；(3)合并嚴(yán)重內(nèi)分泌疾病或傳染性疾病；(4)合并過敏性哮喘、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、特應(yīng)性皮炎、濕疹等其他變態(tài)反應(yīng)性疾病；(5)入院時(shí)行鼻內(nèi)鏡及鼻竇CT檢查，發(fā)現(xiàn)患有鼻息肉、慢性鼻竇炎、鼻腔腫瘤等其他鼻部疾病。

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn) AR的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《中國(guó)變應(yīng)性鼻炎診斷和治療指南(2022年,修訂版)》[7]，即按照患者變應(yīng)原檢測(cè)結(jié)果[變應(yīng)原皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)(++)≥2種或血清特異性免疫球蛋白E(IgE)檢測(cè)陽性且≥2級(jí)]、臨床癥狀、體征以及過敏病史等進(jìn)行綜合診斷。

1.3方法 對(duì)照組于體檢當(dāng)日、AR組于入院24 h內(nèi)清晨抽取空腹外周靜脈血5 mL，血液標(biāo)本于室溫環(huán)境下保存20 min，低速離心(速度：3 500 r/min；半徑：8 cm)，10 min后取上層血清，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定血清IL-33、E-選擇素水平，試劑盒均購(gòu)自上海通蔚生物科技有限公司。

按上述方法制備血清，采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定AR患者及健康體檢者血清T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)水平，并計(jì)算CD4+/CD8+，試劑盒為德國(guó)Partec公司產(chǎn)品，檢測(cè)儀器為德國(guó)Partec公司生產(chǎn)的CyFlow?Cube8流式細(xì)胞儀。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清IL-33、T淋巴細(xì)胞亞群水平比較 與對(duì)照組相比，AR組IL-33、CD8+水平明顯升高，而CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平則明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組血清IL-33、T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

2.2AR患者血清IL-33水平與T淋巴細(xì)胞亞群水平的相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，AR患者血清IL-33水平與CD8+水平呈正相關(guān)(P<0.01)，而與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)。見表2。

表2 AR患者血清IL-33水平與T淋巴細(xì)胞亞群水平的相關(guān)性

2.3血清IL-33對(duì)AR的診斷效能 ROC曲線分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清IL-33診斷AR的曲線下面積為0.841(95%CI：0.738～0.945)，以62.50 μg/L作為預(yù)測(cè)的臨界值，靈敏度(88.64%)和特異度(90.80%)均較高。見圖1。

圖1 血清IL-33診斷AR的ROC曲線

3 討 論

AR是由體外環(huán)境因素作用于機(jī)體發(fā)生的異常免疫反應(yīng)引起的，現(xiàn)階段的主流研究均認(rèn)為Th1/Th2的免疫失衡并向Th2過度分化是誘發(fā)AR的關(guān)鍵病理因素[8]。因此，早期對(duì)機(jī)體免疫功能進(jìn)行評(píng)估，及時(shí)實(shí)施有效的血清標(biāo)志物監(jiān)測(cè)，有利于AR的預(yù)測(cè)和診斷。IL-33是一種多功能細(xì)胞因子，能夠通過調(diào)節(jié)多種細(xì)胞和組織的表達(dá)來調(diào)控免疫應(yīng)答，在多種生物反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用[9]。既往研究顯示，AR患者的鼻上皮中IL-33 mRNA及蛋白表達(dá)水平持續(xù)升高，且顯著高于非AR患者[10]。同樣，一項(xiàng)AR幼年動(dòng)物模型研究表明，敲除IL-33基因的小鼠在發(fā)病后病灶內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及鼻黏膜內(nèi)環(huán)境破壞程度明顯更輕微[11]。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，AR組血清IL-33水平明顯升高，證實(shí)異常表達(dá)的IL-33可能參與AR的發(fā)生，這與上述研究結(jié)果相一致。但在AR發(fā)生、發(fā)展過程中IL-33的異常表達(dá)是否與T淋巴細(xì)胞亞群紊亂存在某種關(guān)系仍需進(jìn)一步探討。

現(xiàn)代免疫學(xué)研究指出，AR患者鼻黏膜部位不成熟的樹突狀細(xì)胞與過敏原結(jié)合使Th0向Th2分化，Th2可激活B淋巴細(xì)胞活性使過敏原特異性IgE分泌增強(qiáng)，其表達(dá)上調(diào)后可與嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞表面受體結(jié)合，當(dāng)患者經(jīng)過臨床治療且病情緩解后，再次與過敏原接觸時(shí)，可迅速導(dǎo)致IgE和抗原發(fā)生橋聯(lián)，使下游Th2相關(guān)細(xì)胞因子及血小板激活因子大量釋放，而迅速引發(fā)流涕、打噴嚏和鼻塞等癥狀[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，AR組血清CD8+水平明顯升高，而CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平則明顯降低，這與唱得龍等[13]的研究結(jié)果基本一致。CD3+是機(jī)體重要的淋巴細(xì)胞，與機(jī)體免疫密切相關(guān)。有基礎(chǔ)研究表明，CD3+存在于T淋巴細(xì)胞表面并參與T淋巴細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，其高表達(dá)有利于激活CD4+，使CD4+分泌IL-4的能力增強(qiáng)，而對(duì)IL-2和干擾素-γ的抑制能力減弱[14]。CD4+為免疫系統(tǒng)受到嚴(yán)重?fù)p害的標(biāo)志物，可通過活化B淋巴細(xì)胞而促進(jìn)抗體分泌，正常機(jī)體中Th1/Th2處于動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)機(jī)體遭受異常抗原刺激時(shí)，二者平衡被打破，可迅速引起異常免疫應(yīng)答[15]。Th2主要介導(dǎo)體液免疫，可通過活化B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體，迅速誘發(fā)速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，其機(jī)制可能為活化的Th2分泌諸如IL-5和IL-4等細(xì)胞因子，使病灶局部炎癥水平升高[16-17]。LUO等[18]研究發(fā)現(xiàn)，AR患者CD4+水平呈低表達(dá)，而在經(jīng)過特異性免疫治療后體內(nèi)CD4+Th的數(shù)量上升。CD8+來源于骨髓造血干細(xì)胞，在胸腺中發(fā)育成熟，當(dāng)其表達(dá)上調(diào)時(shí)可有效抑制B、T淋巴細(xì)胞活性。機(jī)體CD8+的活化需要3種信號(hào)：炎癥因子、共刺激信號(hào)和T淋巴細(xì)胞受體/抗原肽-Ⅰ型主要組織相容性復(fù)合體(信號(hào)1)，其中信號(hào)1可影響CD8+增殖，亦決定了其具有抗原特異性[19]。一項(xiàng)基礎(chǔ)研究表明，CD8+的活化與許多自身免疫性疾病的發(fā)生有關(guān)，當(dāng)其水平降低時(shí)可在一定程度上增強(qiáng)對(duì)B淋巴細(xì)胞的抑制作用，使IgE水平降低[20]。

為進(jìn)一步證實(shí)本研究的推論，本研究進(jìn)行了相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)AR患者血清IL-33水平與CD8+水平呈正相關(guān)(P<0.01)，而與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)，提示IL-33的低表達(dá)與T淋巴細(xì)胞亞群的紊亂存在關(guān)系。而IL-33誘發(fā)T淋巴細(xì)胞亞群紊亂的機(jī)制可能如下：IL-33可促進(jìn)未成熟的T淋巴細(xì)胞向Th2轉(zhuǎn)化。既往有學(xué)者在血吸蟲卵誘導(dǎo)肺肉芽腫模型和卵清蛋白致敏哮喘小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，IL-33能夠通過激活核因子(NF)-κB和絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路使Th2活化[21]。IL-33可刺激Th2產(chǎn)生IL-5及少量的IL-4，其中IL-5能促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞的活化，而活化的嗜酸性粒細(xì)胞可進(jìn)一步釋放趨化因子2(CCL2)，后者又可通過誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞亞群紊亂來加速炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，從而促進(jìn)變應(yīng)性炎性反應(yīng)。此外，也有研究發(fā)現(xiàn)，IL-33在機(jī)體中的水平與年齡呈正比，這似乎證實(shí)免疫系統(tǒng)在外界刺激的不斷作用下，該因子的水平亦隨之改變，提示了IL-33水平與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)[22]。為進(jìn)一步證實(shí)該推論，本研究以預(yù)測(cè)概率繪制ROC曲線，得到血清IL-33預(yù)測(cè)AR的靈敏度和特異度分別為88.64%、90.80%，這也表明IL-33水平紊亂可能與誘發(fā)AR的基礎(chǔ)病理學(xué)改變有關(guān)，通過監(jiān)測(cè)其水平可有效反映機(jī)體外周血T、B淋巴細(xì)胞的免疫紊亂情況，進(jìn)而為AR的預(yù)防提供新的思路。這有利于及時(shí)調(diào)整AR的治療策略，在臨床醫(yī)師判斷患者病情進(jìn)展時(shí)提供更多參考。

綜上所述，AR患者血清IL-33水平較健康人明顯升高，且與AR患者T淋巴細(xì)胞亞群紊亂密切相關(guān)，因此，監(jiān)測(cè)AR患者血清IL-33水平變化對(duì)預(yù)測(cè)AR發(fā)病具有一定臨床意義。然而，本研究仍存在一些局限性，如僅為一項(xiàng)橫斷面研究，且樣本例數(shù)不多，同時(shí)AR患者不同階段外周血中IL-33水平是否與T淋巴細(xì)胞亞群紊亂有關(guān)，仍需要大型的前瞻性隊(duì)列研究來進(jìn)一步證實(shí)。