血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白在新生兒缺氧缺血性腦病病情和預(yù)后判斷中的價值

宋 奕,肖蕾萍,張嘉玲

復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院新生兒重癥監(jiān)護室，上海 200090

新生兒缺氧缺血性腦病是由于缺血缺氧導(dǎo)致的新生兒腦損傷，其發(fā)生率為3%～6%，臨床上主要表現(xiàn)為意識障礙和昏迷等，甚至出現(xiàn)中樞性呼吸衰竭、腦癱，該病是導(dǎo)致新生兒死亡的重要原因之一[1]。目前，在該病患兒的病情和預(yù)后判斷方面，臨床上常用的腦電圖和神經(jīng)功能評估均存在一定的局限性，尚缺乏有效的生物學(xué)標(biāo)志物。可溶性血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體-1(sLOX-1)是反映機體炎性反應(yīng)狀態(tài)和內(nèi)皮損傷程度的指標(biāo)，主要由血管內(nèi)皮細胞和自然殺傷細胞分泌，是腦缺氧性疾病診斷和嚴重程度判斷的重要指標(biāo)[2]；視錐蛋白樣蛋白-1(VILIP-1)為鈣離子結(jié)合蛋白，在神經(jīng)系統(tǒng)中呈高表達，在腦部損傷時由神經(jīng)元分泌到細胞外，與腦損傷嚴重程度有關(guān)[3]；在缺氧性腦損傷動物模型和離體實驗中腦紅蛋白被發(fā)現(xiàn)，其在腦缺氧適應(yīng)性調(diào)節(jié)中具有重要作用[4]。本研究觀察了血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白在新生兒缺氧缺血性腦病病情和預(yù)后判斷中的價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2019年1月至2021年12月本院收治的135例新生兒缺氧缺血性腦病患兒納入觀察組，其中男78例、女57例，母體孕周35～42周、平均(38.78±1.34)周，出生日齡2～5 d、平均(3.53±0.56)d，胎齡37～42周、平均(39.16±1.16)周。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患兒均符合新生兒缺氧缺血性腦病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；經(jīng)頭顱CT或MRI檢查確定有腦損傷的存在；均為足月新生兒；未輸血或者輸注血液制品。排除標(biāo)準(zhǔn)：腦膜炎；外傷引起的顱內(nèi)血腫；神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育畸形；先天性心臟病；合并呼吸系統(tǒng)疾病；急慢性感染性疾病。選擇同期在本院體檢的75例健康足月新生兒納入對照組，其中男47例、女28例，母體孕周36～42周、平均(38.89±1.50)周，出生日齡2～4 d、平均(3.41±0.52)d，胎齡37～42周、平均(39.11±1.19)周。兩組患兒性別、胎齡和日齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。所有患兒家屬均簽署知情同意書，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核通過。

1.2方法

1.2.1治療方法 予觀察組新生兒缺氧缺血性腦病患兒常規(guī)清除呼吸道分泌物，控制驚厥，氧療和降低顱內(nèi)壓等治療，并根據(jù)血糖、血壓和電解質(zhì)檢測結(jié)果等采取對癥治療。根據(jù)患兒的具體情況予胞二磷酸注射液125 mg靜脈滴注，每天1次；重組人促紅素注射液30 U/kg，每天1次。患兒均持續(xù)治療28 d。

1.2.2分組及預(yù)后判斷 根據(jù)新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度的判定標(biāo)準(zhǔn)將患兒分為輕度組、中度組和重度組。病灶部位局限在1～2個腦葉為輕度；病灶部位在3～5個腦葉或者雖然病灶<3個腦葉，但伴有腦出血為中度；病灶累及6～7個腦葉或者病灶部位<6個腦葉，合并2個以上病灶腦出血為重度。

參照新生兒缺氧缺血性腦病預(yù)后不良評價標(biāo)準(zhǔn)[6]，評估患兒的預(yù)后。具體根據(jù)以下項目評定：(1)生命體征平穩(wěn)，瞳孔、呼吸和脈搏均正常；(2)肌張力正常；(3)肌張力減弱等體征和驚厥等神經(jīng)癥狀均消失；(4)可正常母乳進食；(5)原始反射正常。上述5條均滿足為痊愈。滿足(1)條和其余4條中的任意一條為好轉(zhuǎn)。未滿足痊愈和好轉(zhuǎn)標(biāo)準(zhǔn)的患兒納入預(yù)后不良組；好轉(zhuǎn)和痊愈患兒納入預(yù)后良好組。

1.2.3血液標(biāo)本保留和指標(biāo)檢測 于患兒入院時和對照兒童體檢時留取空腹肘靜脈血液標(biāo)本3 mL，3 000 r/min離心10 min，將上清液放置在-70 ℃的冰箱中。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平，試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.3觀察指標(biāo) 觀察兩組血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平變化，分析血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平與新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度的關(guān)系，對臨床指標(biāo)與患兒預(yù)后的關(guān)系進行單因素和多因素分析，探討血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白檢測預(yù)測患兒預(yù)后不良的價值。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平比較 觀察組的血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 兩組血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平比較

2.2血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平與新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度的關(guān)系 根據(jù)新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度將患兒分為輕度組53例，中度組47例和重度組35例。重度組血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平明顯高于中度組和輕度組(P<0.01)，而中度組血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平明顯高于輕度組(P<0.01)。見表2。

表2 血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平與新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度的關(guān)系

2.3新生兒缺氧缺血性腦病預(yù)后不良影響因素的單因素分析 所有患兒治療后隨訪28 d，根據(jù)預(yù)后情況分為預(yù)后不良組32例，預(yù)后良好組103例。新生兒缺氧缺血性腦病患兒預(yù)后不良與Apgar評分、開始治療日齡、sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平有關(guān)(P<0.01)，而與性別、孕周、日齡、胎齡、生產(chǎn)方式、出生時體質(zhì)量、體溫、心率、臍帶異常，以及母體貧血、妊娠期糖尿病和妊娠期高血壓無關(guān)(P>0.05)。見表3。

表3新生兒缺氧缺血性腦病預(yù)后不良影響因素的單因素 分析[n/n或或n(%)]

2.4血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白預(yù)測新生兒缺氧缺血性腦病患兒預(yù)后不良的效能 血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白預(yù)測新生兒缺氧缺血性腦病患兒預(yù)后不良的效能明顯高于Apgar評分和開始治療日齡(P<0.05)。根據(jù)新生兒缺氧缺血性腦病患兒是否發(fā)生預(yù)后不良進行二元Logistic回歸分析，方程為Y=0.01×XsLOX-1+12.53×XVILIP-1+0.25×X腦紅蛋白-28.33。3項指標(biāo)聯(lián)合檢測的靈敏度為96.9%，特異度為86.4%，曲線下面積(AUC)為0.971，AUC明顯高于sLOX-1(Z=2.289，P=0.022)、VILIP-1(Z=2.635，P=0.008)和腦紅蛋白(Z=3.263，P=0.001)單項指標(biāo)檢測，而這3項指標(biāo)之間AUC的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4、圖1。

表4 血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白預(yù)測新生兒缺氧缺血性腦病患兒預(yù)后不良的效能

圖1 血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白預(yù)測新生兒缺氧性腦病患兒預(yù)后不良的ROC曲線

2.5新生兒缺氧缺血性腦病預(yù)后不良影響因素的多因素分析 根據(jù)ROC曲線分析中的截斷值，對單因素分析中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的指標(biāo)進行賦值：Apgar評分>6分賦值2，≤6分賦值1；開始治療日齡≤2 d為2，>2 d為1；sLOX-1>888.02 ng/L為2，≤888.02 ng/L為1；VILIP-1>0.83 μg/L為2，≤0.83 μg/L為1；腦紅蛋白>24.22 pg/mL為2，≤24.22 pg/mL為1。根據(jù)是否發(fā)生預(yù)后不良進行二元Logistic回歸分析，發(fā)現(xiàn)血清sLOX-1>888.02 ng/L、VILIP-1>0.83 μg/L和腦紅蛋白>24.22 pg/mL是新生兒缺氧缺血性腦病患兒預(yù)后不良的獨立危險因素(P<0.01)。見表5。

表5 新生兒缺氧缺血性腦病預(yù)后不良影響因素的多因素分析

3 討 論

新生兒缺氧缺血性腦病是導(dǎo)致新生兒致殘和致死的重要因素，早期診斷和早治療是改善新生兒預(yù)后的關(guān)鍵。目前臨床上診斷新生兒缺氧缺血性腦病主要依靠頭顱CT或者MRI，但以上項目往往需要多次檢查、存在假陰性等弊端，甚至在病情十分嚴重時，頭顱影像學(xué)檢查結(jié)果仍無異常的情況時有發(fā)生[7]。如何早期對新生兒缺氧缺血性腦病的嚴重程度進行判斷，提高治療效果，改善預(yù)后是目前研究的熱點。

sLOX-1是一種能夠與低密度脂蛋白結(jié)合的細胞因子，能夠使機體的低密度脂蛋白大量降解，從而引起新生兒的脂質(zhì)代謝紊亂[8]。sLOX-1能夠與氧化型低密度脂蛋白結(jié)合并將其降解，減少后者對心腦血管的損傷，水平異常升高的sLOX-1能夠促進低密度脂蛋白的異常降解，導(dǎo)致新生兒機體脂質(zhì)代謝紊亂，促使病情加重[9]。本研究顯示，觀察組血清sLOX-1水平明顯高于對照組，并且血清sLOX-1水平隨著新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度升高而升高，說明血清sLOX-1是反映新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度的指標(biāo)，與文獻[10]報道結(jié)果一致。本研究發(fā)現(xiàn)血清sLOX-1>888.02 ng/L是新生兒缺氧缺血性腦病預(yù)后不良的獨立危險因素，預(yù)后不良組血清sLOX-1水平明顯高于預(yù)后良好組，說明血清sLOX-1是反映新生兒缺氧缺血性腦病預(yù)后的指標(biāo)。現(xiàn)有研究顯示，血清sLOX-1水平與新生兒缺氧缺血性腦病患兒的神經(jīng)功能損傷有關(guān)，sLOX-1水平的升高與機體的氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)，氧化應(yīng)激產(chǎn)生大量氧自由基會導(dǎo)致機體細胞膜發(fā)生氧化損傷，從而加重神經(jīng)元損傷，抑制神經(jīng)元增殖，導(dǎo)致神經(jīng)功能受損[11]。本研究顯示，血清sLOX-1為888.02 ng/L時，其預(yù)測新生兒缺氧缺血性腦病預(yù)后不良的靈敏度為78.1%，特異度為90.3%，AUC為0.883，說明血清sLOX-1水平對新生兒缺氧缺血性腦病的預(yù)后具有良好的預(yù)測價值。

VILIP-1是視錐蛋白家族成員之一，由神經(jīng)元產(chǎn)生，并通過與鈣離子結(jié)合參與神經(jīng)細胞的信息傳導(dǎo)和細胞凋亡的病理生理過程[12]。VILIP-1與神經(jīng)功能損傷具有一定的關(guān)系，主要參與了taud蛋白的磷酸化過程，導(dǎo)致出現(xiàn)VILIP-1表達的神經(jīng)元發(fā)生損傷。另一方面，VILIP-1還通過對乙酰膽堿受體的調(diào)節(jié)，進而導(dǎo)致神經(jīng)功能缺損[13]。本研究顯示，觀察組血清VILIP-1水平明顯高于對照組，并且隨著新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度的升高而升高，說明血清VILIP-1是反映新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度的指標(biāo)。VILIP-1是神經(jīng)元損傷的潛在生物標(biāo)志物，主要存在于神經(jīng)元細胞中，當(dāng)腦組織發(fā)生損傷時，表達VILIP-1的細胞將釋放大量的VILIP-1到外周血中，VILIP-1被認為是反映腦損傷嚴重程度的重要指標(biāo)[14]。本研究還顯示，血清VILIP-1>0.83 μg/L是新生兒缺氧缺血性腦病患兒預(yù)后不良的獨立危險因素，預(yù)后不良的新生兒血清VILIP-1水平明顯高于預(yù)后良好者，說明血清VILIP-1是反映新生兒缺氧缺血性腦病預(yù)后的指標(biāo)。本研究還發(fā)現(xiàn)，血清VILIP-1為0.83 μg/L時，預(yù)測新生兒缺氧缺血性腦病患兒預(yù)后不良的靈敏度為87.5%，特異度為72.8%，AUC為0.875，說明VILIP-1對預(yù)測預(yù)后不良有較高的效能。

腦紅蛋白是一種攜氧蛋白，主要在神經(jīng)組織廣泛表達，參與了神經(jīng)元的儲氧和氧運輸?shù)倪^程，可提高神經(jīng)元內(nèi)的氧分壓，與神經(jīng)元的存活具有密切的關(guān)系[15]。在腦缺氧狀態(tài)下，血清腦紅蛋白水平代償性增加，對神經(jīng)元具有保護作用(代償越嚴重，說明疾病越重)，能夠改善神經(jīng)組織的缺氧，促進氧氣向神經(jīng)元線粒體內(nèi)的傳遞，清除氧化應(yīng)激產(chǎn)生的大量自由基，從而減輕神經(jīng)元細胞的損傷[16]。在動物實驗中同樣證實，轉(zhuǎn)染腦紅蛋白基因的心肌和腦組織對缺氧的耐受程度進一步提高[17]。有研究者發(fā)現(xiàn)多種因素影響了腦紅蛋白的表達，從而發(fā)揮對腦的保護作用，其表達水平與腦損傷的嚴重程度有關(guān)，是反映腦損傷嚴重程度的指標(biāo)[18]。本研究顯示，觀察組血清腦紅蛋白水平明顯高于對照組，并且發(fā)現(xiàn)血清腦紅蛋白水平隨著新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度升高而升高，說明血清腦紅蛋白為代償性增加，水平越高，病情越重，其也是評價缺氧缺血性腦病嚴重程度的指標(biāo)，與文獻[18]報道的結(jié)果一致。本研究結(jié)果還顯示，血清腦紅蛋白>24.22 pg/mL是新生兒缺氧缺血性腦病預(yù)后不良的獨立危險因素，預(yù)后不良組血清腦紅蛋白水平明顯高于預(yù)后良好組。血清腦紅蛋白為24.22 pg/mL時，其預(yù)測新生兒缺氧缺血性腦病預(yù)后不良的靈敏度為65.6%，特異度為87.4%。同時，本研究顯示血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白聯(lián)合檢測在預(yù)測新生兒缺氧缺血性腦病患兒發(fā)生預(yù)后不良方面具有更高的效能，明顯高于單項指標(biāo)檢測，其靈敏為96.9%，特異度為86.4%，說明3項指標(biāo)之間具有某種互補性，其內(nèi)在聯(lián)系需要進一步研究。

綜上所述，血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白與新生兒缺氧缺血性腦病的嚴重程度具有密切聯(lián)系，3項指標(biāo)是預(yù)后不良的獨立危險因素，在預(yù)測預(yù)后不良方面具有較高的價值。