應(yīng)用抗炎卵黃抗體標(biāo)粗南美白對蝦苗效果試驗(yàn)

孟愛軍，錢學(xué)軍，許前，郭培紅

［1.正大水產(chǎn)(南通)有限公司,江蘇 南通226400；昆山貝瑞康生物科技有限公司,江蘇 昆山215345］

南美白對蝦標(biāo)粗是指各個育苗場從種苗場購進(jìn)5日齡仔蝦(P5)強(qiáng)化培育至P10階段、達(dá)到體長0.8～1.0厘米，并調(diào)整鹽度使出池鹽度達(dá)到養(yǎng)殖戶要求范圍的生產(chǎn)過程。近年來，江蘇如東小棚蝦養(yǎng)殖模式成了全國業(yè)界關(guān)注的重點(diǎn)。如東模式的實(shí)踐證明，優(yōu)質(zhì)南美白對蝦種苗是如東小棚蝦成功的基礎(chǔ)，而蝦苗淡化標(biāo)粗是小棚蝦養(yǎng)殖成功不可或缺的中間環(huán)節(jié)。如何通過加強(qiáng)營養(yǎng)、控制好水質(zhì)、減少病原菌來提高苗種成活率，是淡化標(biāo)粗成功的關(guān)鍵。

本試驗(yàn)采用的抗腸炎功能蛋白質(zhì)是一種抗腸炎卵黃抗體添加劑，具有抑制養(yǎng)殖動物慢性腸道炎癥反應(yīng)、調(diào)整免疫力等功能，已在石斑魚、大西洋鮭、黃顙魚、草魚等魚上應(yīng)用，顯現(xiàn)出很好的促進(jìn)腸道健康、提高養(yǎng)殖性能的功能。本試驗(yàn)在南美白對蝦工廠化標(biāo)粗過程中，添加抗腸炎功能蛋白質(zhì)，對其成活率與生長性能進(jìn)行觀察比較，為抗腸炎功能蛋白質(zhì)在甲殼動物養(yǎng)殖中的應(yīng)用和推廣提供參考依據(jù)。

一、材料與方法

1.試驗(yàn)池條件與材料

本試驗(yàn)在江蘇如東縣愛明苗場進(jìn)行，標(biāo)粗車間的水泥池為5米×5米×1米的標(biāo)準(zhǔn)池，具控溫、增氧等設(shè)施。

試驗(yàn)蝦苗是由海南提供的品牌P5蝦苗；豐年蟲為市售渤海灣白卵；蝦片由饒平提供，粗蛋白質(zhì)水平＞45%；抗腸炎功能蛋白質(zhì)添加劑為昆山研發(fā)，其中抗腸炎功能蛋白質(zhì)水平為40%。

2.試驗(yàn)方法

試驗(yàn)分試驗(yàn)池與對照池，各設(shè)3個平行，試驗(yàn)池為5#、9#、11#池，對照池為6#、8#、12#池。試驗(yàn)池在基礎(chǔ)飼料中添加抗腸炎功能的混合型添加劑，添加量為基礎(chǔ)飼料的1.5%，將添加劑溶解到適量水中(水重量為飼料的6%)混勻拌料，待飼料充分吸收后投喂。對照組投喂基礎(chǔ)飼料，基礎(chǔ)飼料為豐年蟲與蝦片。試驗(yàn)時間7天。

3.仔蝦攝食量分析

各培育池的起始投喂量均為15.52克/萬尾，以后根據(jù)吃食情況逐漸增加；豐年蟲與蝦片的起始比例為5∶1，以后逐漸增加蝦片比例，苗出池時的豐年蟲與蝦片的起始比例為3.7∶1。投喂頻率為8次/天，每3小時投1次，豐年蟲與蝦片間隔投喂，記錄投喂量，計(jì)算每萬尾仔蝦的飼料用量。

4.養(yǎng)殖水環(huán)境的控制

放苗(P5)時的水深為0.5米、鹽度為15、總堿度為160毫克/升，放養(yǎng)密度均為20萬尾/米3，從P6開始加水10厘米、P7～P8分別加水20厘米、P9換淡水30%、P10換水30%，使苗出池時池水鹽度為5，符合如東小棚蝦養(yǎng)殖池的鹽度要求。試驗(yàn)期間的pH保持8.4±0.1，水溫28～30℃，出苗前降低到25℃。整個過程水體的氨氮在0.5～0.8毫克/升，亞硝酸鹽為0～0.01毫克/升，總堿度控制在160～180毫克/升。

5.出池蝦苗的計(jì)數(shù)

自備4 800萬像素的安卓手機(jī)，采用蝦苗專用點(diǎn)數(shù)檢查箱進(jìn)行自動計(jì)數(shù)。即用小網(wǎng)兜將蝦苗放入有200毫升左右清水的白色矩形盤中，均勻分散開，避免重疊。調(diào)整好手機(jī)視野大小，點(diǎn)按手機(jī)拍照計(jì)數(shù)，精確點(diǎn)出照片中所有仔蝦的顯微圖數(shù)量，點(diǎn)上的仔蝦被自動標(biāo)記，一次自動識別點(diǎn)數(shù)操作耗時≤10秒。存活率(%)＝存活尾數(shù)/總尾數(shù)×100。

6.養(yǎng)殖水體與白對蝦仔蝦弧菌的檢測

分別取標(biāo)粗的第3、5、7天對養(yǎng)殖水體和白對蝦仔蝦進(jìn)行弧菌含量檢測。從培育池隨機(jī)采集白對蝦仔蝦于無菌的樣品瓶中，在無菌條件下用鑷子從樣品瓶中取0.10～0.12克仔蝦于離心管中，加入0.85%的生理鹽水400微升后用玻璃棒研磨均勻，根據(jù)需要10倍稀釋；同時采集養(yǎng)殖水，根據(jù)需要10倍稀釋。取不同稀釋度的上述提取液0.1毫升，均勻涂布于具弧菌選擇性培養(yǎng)基(TCBS)的培養(yǎng)皿上面；30～32℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)16～24小時，采用訊數(shù)icount20全自動菌落計(jì)數(shù)器進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。在暗室內(nèi)檢查熒光弧菌，記錄好發(fā)現(xiàn)的熒光弧菌的數(shù)量，然后按照顏色分開記錄生長在培養(yǎng)皿上面的綠菌和黃菌的菌落量，并分析記錄結(jié)果。

7.數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

數(shù)據(jù)主要使用Microsoft Excel 2018軟件進(jìn)行處理，SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。顯著性分析采用t檢驗(yàn)，當(dāng)P＜0.05時為差異顯著,當(dāng)P＜0.01時為差異極顯著。所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式來表示。

二、結(jié)果與分析

1.南美白對蝦標(biāo)粗期間仔蝦成活率及飼料用量

經(jīng)7天的標(biāo)粗培育后，出池仔蝦進(jìn)行自動精確計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示，標(biāo)粗期間在飼料中添加1.5%的抗炎卵黃抗體飼料添加劑后，仔蝦的平均成活率從對照組的89.67%提高至95.33%，提高了5.66個百分點(diǎn)，達(dá)到顯著水平；而每培育成1萬尾仔蝦消耗的豐年蟲量則極顯著地低于對照組，蝦片用量無顯著差異，具體見表1。同時，在計(jì)數(shù)時發(fā)現(xiàn)，投喂添加劑后仔蝦的胃腸道飼料充盈度顯著大于對照組，且仔蝦個體大小均勻；而對照組仔蝦個體大小懸殊(圖1)。說明抗腸炎功能蛋白質(zhì)添加劑能夠提高仔蝦的抗逆能力和健康程度，提高了對飼料的利用率。

表1 南美白對蝦標(biāo)粗后各組仔蝦的成活率及其飼料消耗量比較

圖1 飼喂抗炎卵黃抗體后的南美白對蝦仔蝦的胃腸道飼料充盈度

2.飼喂抗腸炎功能蛋白質(zhì)后養(yǎng)殖水體與仔蝦體內(nèi)弧菌載量的變化

標(biāo)粗過程跟蹤檢測養(yǎng)殖水體與仔蝦體內(nèi)的弧菌，結(jié)果在整個過程中均未發(fā)現(xiàn)發(fā)熒光的弧菌和綠弧菌，但存在黃弧菌，具體數(shù)量見表2。表2顯示，標(biāo)粗的第3天，相較于對照組，無論是養(yǎng)殖水體還是仔蝦體內(nèi)的黃弧菌數(shù)量，試驗(yàn)組均與對照組無差異；但到第5天和第7天，無論是養(yǎng)殖水體還是仔蝦體內(nèi)的黃弧菌數(shù)量，試驗(yàn)組均極顯著地低于對照組，尤其到了第7天，試驗(yàn)組的黃弧菌數(shù)量只有對照組的1/5，說明了抗腸炎功能蛋白質(zhì)能較好地保護(hù)南美白對蝦仔蝦的胃腸道健康，有力地抵抗了弧菌的感染。

表2 南美白對蝦標(biāo)粗過程中水體與仔蝦體內(nèi)黃弧菌載量比較

三、討論

在南美白對蝦標(biāo)粗過程中防止仔蝦發(fā)生炎癥反應(yīng)是促進(jìn)其健康發(fā)育，提高成活率的重要條件之一。研究發(fā)現(xiàn)，抗腸炎功能蛋白質(zhì)可以增強(qiáng)魚的免疫力，減少腸道炎癥的發(fā)生，促進(jìn)腸道絨毛發(fā)育，增強(qiáng)消化吸收能力，增強(qiáng)食欲，促進(jìn)生長，提高抗應(yīng)激能力和增強(qiáng)活力。

本試驗(yàn)結(jié)果充分證明，在豐年蟲和蝦片等飼料中拌入1.5%的抗腸炎功能蛋白質(zhì)飼料添加劑，能有效地提高南美白對蝦仔蝦的成活率和飼料利用率，從而間接減少了殘餌中的氮、磷在水體中的釋放，有利于水質(zhì)的控制。良好的水質(zhì)又減少了弧菌大量滋生的機(jī)會，從而使仔蝦健康、均勻生長，提高了生產(chǎn)效率，降低了養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)。